張陳彥，都治香，祁美玉，張銘娜，趙敏英，張立新，安雪麗

(1. 河北省石家莊市第一醫(yī)院，河北 石家莊 050011；2. 河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院，河北 石家莊 050000)

三磷酸腺苷二鈉氯化鎂對(duì)心肌、肺臟、肝臟及腸等缺血再灌注損傷具有明顯的保護(hù)作用，但對(duì)胎兒宮內(nèi)缺氧缺血是否具有保護(hù)作用報(bào)道少見。胎兒宮內(nèi)缺氧缺血多是由子宮胎盤缺血而造成，故本研究通過制作孕鼠的子宮胎盤缺血模型,探討了三磷酸腺苷二鈉氯化鎂是否對(duì)宮內(nèi)窘迫胎鼠腎組織具有保護(hù)作用，從而為胎兒宮內(nèi)窘迫的治療提供新思路及途徑。

1 實(shí)驗(yàn)資料

1.1動(dòng)物動(dòng)物 成年雌性SD大鼠15只，體質(zhì)量240～270 g，購自河北醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室，動(dòng)物合格證號(hào)：2016-04-009。

1.2實(shí)驗(yàn)方法 將SD孕鼠隨機(jī)分為缺氧缺血再灌注組、假手術(shù)組和干預(yù)組，每組5只。于妊娠第19天以3.5%水合氯醛(1 mL/100 g)腹腔注射麻醉，缺氧缺血再灌注組和干預(yù)組通過無損傷動(dòng)脈鉗鉗夾雙側(cè)子宮、卵巢動(dòng)脈建立缺氧缺血宮內(nèi)窘迫模型，缺氧20 min后拆除動(dòng)脈夾以恢復(fù)血供，并逐層關(guān)腹。假手術(shù)組只開關(guān)腹，不鉗夾子宮、卵巢動(dòng)脈。干預(yù)組缺血前30 min給予三磷酸腺苷二鈉氯化鎂45 mg/kg腹腔注射，缺氧缺血再灌注組、假手術(shù)組于相同時(shí)間給予同等體積的0.9%氯化鈉注射液腹腔注射。

1.3觀測指標(biāo)

1.3.1大體觀察 于術(shù)后24 h以3.5%水合氯醛對(duì)各組孕鼠行腹腔麻醉，開腹并暴露雙側(cè)子宮，觀察宮腔內(nèi)的活胎數(shù)，剖出胎鼠并觀察存活新生鼠皮膚顏色、呼吸、四肢運(yùn)動(dòng)等情況，計(jì)算胎鼠死亡率。取胎鼠，斷頭處死，取出完整胎腎臟，于4%多聚甲醛固定48 h，經(jīng)脫水透明后石蠟包埋切片，備用。

1.3.2腎組織中丙二醛(MDA)含量測定 在每組胎鼠中隨機(jī)抽取10只取腎臟，濾紙拭干，稱質(zhì)量后，加入4 ℃的HEPES沖液中，其體積是腎組織塊質(zhì)量的9倍，用玻璃勻漿器制成勻漿，勻漿液以3 000 r/min離心15 min，分裝于-70 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩０丛噭┖姓f明書，利用分光光度計(jì)檢測胎鼠腎組織中MDA含量。MDA試劑盒購于南京建成科技有限公司。

1.3.3腎組織學(xué)觀察 固定后的腎組織分置于40 g/L多聚甲醛中4 ℃固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋后切片，脫蠟，行HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察腎組織形態(tài)學(xué)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。計(jì)數(shù)資料比較行2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1各組胎鼠死亡率 假手術(shù)組胎鼠57只，均無死亡；缺氧缺血再灌注組胎鼠61只，死亡13只(23.31%)；干預(yù)組胎鼠60只，死亡9只(15.00%)。缺氧缺血再灌注組胎鼠死亡率明顯高于假手術(shù)組(P<0.05) ，干預(yù)組胎鼠死亡率明顯低于缺氧缺血再灌注組(P<0.05)。

2.2各組胎鼠腎組織中MDA含量 缺氧缺血再灌注組胎鼠腎組織中MDA含量為(7.37±0.92)nmol/mg，假手術(shù)組為(3.56±0.56)nmol/mg，干預(yù)組為(4.39±0.73)nmol/mg。缺氧缺血再灌注組胎鼠腎組織中MDA含量明顯高于假手術(shù)組(P<0.05)，干預(yù)組胎鼠腎組織中MDA含量明顯低于缺氧缺血再灌注組(P<0.05)。

2.3各組胎鼠腎組織病理學(xué)表現(xiàn) 假手術(shù)組腎組織結(jié)構(gòu)基本正常，間質(zhì)、微血管內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)亦大致正常。缺氧缺血再灌注組炎細(xì)胞浸潤明顯，腎小管上皮細(xì)胞明顯水腫樣變性，腎間質(zhì)局部充血；干預(yù)組僅見部分腎小管上皮細(xì)胞輕度水腫樣變性。見圖1～3。

圖1 假手術(shù)組腎組織病理學(xué)表現(xiàn)

3 討 論

圖2 缺氧缺血再灌注組腎組織病理學(xué)表現(xiàn)

圖3 干預(yù)組腎組織病理學(xué)表現(xiàn)

妊娠期缺氧是影響胎兒發(fā)育和增加新生兒發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的常見原因[1]。而在妊娠期間，因代謝需要，組織氧氣消耗增加，加劇組織中的氧化應(yīng)激和脂質(zhì)氧化[2]。缺氧是宮內(nèi)創(chuàng)傷中一種常見形式，如高海拔地區(qū)妊娠、妊娠合并貧血、胎盤功能不全、脊髓壓迫、先兆子癇、心臟疾病等均可導(dǎo)致宮內(nèi)缺氧[3]。而缺氧缺血性損傷后磷酸肌酸或以三磷酸腺苷形式儲(chǔ)存的能量在幾秒鐘內(nèi)耗盡，隨后發(fā)生的無氧酵解維持主要細(xì)胞的功能，但糖酵解不能維持組織的長久生存，代謝廢物的積累和細(xì)胞內(nèi)pH值降低，因?yàn)槿狈Ψ肿友鹾蚇AD+供給不足，線粒體ATP生成受阻，導(dǎo)致三羧酸循環(huán)停止功能[4]。而外源性的三磷酸腺苷二鈉氯化鎂能夠激活腺苷受體，減少心肌細(xì)胞能源消耗，可以直接對(duì)細(xì)胞內(nèi)的Na+，K+-ATP酶以及Ca2+-ATP酶提供能量或能量底物維持細(xì)胞外和細(xì)胞內(nèi)的離子平衡，減輕細(xì)胞內(nèi)酸中毒和細(xì)胞腫脹[5]；還能夠改善微循環(huán)，修復(fù)膜的電壓，恢復(fù)正常膜的滲透性和改進(jìn)細(xì)胞功能[6]；能夠提高第二信使cAMP和IP3的基礎(chǔ)水平，保護(hù)各種灌注損傷后細(xì)胞和器官的功能，改善器官血流量[7]，減弱線粒體的脂質(zhì)過氧化損傷，達(dá)到清除氧自由基的功能[8]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，缺氧缺血再灌注組胎鼠死亡率明顯高于假手術(shù)組，干預(yù)組胎鼠死亡率明顯低于缺氧缺血再灌注組，證實(shí)三磷酸腺苷二鈉氯化鎂可以降低宮內(nèi)窘迫胎鼠死亡率；病理組織學(xué)結(jié)果顯示，缺氧缺血再灌注組炎細(xì)胞浸潤明顯，腎小管上皮細(xì)胞明顯水腫樣變性，腎間質(zhì)局部充血伴水腫；干預(yù)組僅見部分腎小管上皮細(xì)胞輕度水腫樣變性，偶見管型，提示三磷酸腺苷二鈉氯化鎂對(duì)宮內(nèi)窘迫胎鼠腎組織損傷有明顯的保護(hù)作用。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)，自由基參與宮內(nèi)的急性缺氧缺血及再灌注損傷[9]。而組織中MDA水平是反映自由基損傷程度的重要指標(biāo)[10]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，缺氧缺血再灌注組胎鼠腎組織中MDA含量明顯高于假手術(shù)組，干預(yù)組胎鼠腎組織中MDA含量明顯低于缺氧缺血再灌注組。提示三磷酸腺苷二鈉氯化鎂能夠減少M(fèi)DA生成，從而減輕組織的脂質(zhì)過氧化損傷，減輕宮內(nèi)窘迫胎鼠腎損傷。

綜上所述，宮內(nèi)缺氧缺血會(huì)對(duì)胎鼠腎組織產(chǎn)生嚴(yán)重的氧化損傷，而三磷酸腺苷二鈉氯化鎂能夠減輕宮內(nèi)窘迫胎鼠腎組織的損傷，可增強(qiáng)缺氧缺血胎鼠腎組織清除自由基的能力，對(duì)缺氧缺血腎細(xì)胞有保護(hù)作用，為臨床上應(yīng)用三磷酸腺苷二鈉氯化鎂防治宮內(nèi)缺血性腎損傷提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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