柯 鴻武倫 王黎

（湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬人民醫(yī)院，湖北 十堰 442000）

急性髓細(xì)胞白血?。ˋML）是由來源于骨髓的祖細(xì)胞或干細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化造成的克隆性血液系統(tǒng)腫瘤，表現(xiàn)為造血祖細(xì)胞或干細(xì)胞增殖過度、分化障礙或細(xì)胞凋亡受抑［1］。目前對AML的治療以化療為主，但化療產(chǎn)生的耐藥性及嚴(yán)重不良反應(yīng)限制了它的臨床使用，而造血干細(xì)胞移植雖可以治愈大多數(shù)白血病，但受制于骨髓移植源少、費(fèi)用高昂及手術(shù)死亡率高等諸多不利因素，常達(dá)不到治愈目的。而中醫(yī)中藥在治療腫瘤方面有一定的效果，因此，研究傳統(tǒng)中藥治療AML十分必要。臨床常用的中藥淫羊藿為小檗科植物心葉淫羊藿，常用于治療半身不遂、腰酸腿痛、陽痿早泄、四肢麻木、神經(jīng)衰弱、健忘、目眩耳鳴等［2-3］。國內(nèi)外大量研究表明，淫羊藿的主要藥理成分黃酮類生物堿——淫羊藿苷具有抗腫瘤、促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞增殖及遷移、抑制腫瘤細(xì)胞生長、遷移、侵襲和促細(xì)胞凋亡作用［4-6］。在血液系統(tǒng)腫瘤研究中，目前有實(shí)驗(yàn)證實(shí)淫羊藿可抑制AML細(xì)胞株HL-60的增殖并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和分化［7-8］。由于細(xì)胞增殖與凋亡平衡關(guān)系失調(diào)是AML發(fā)生的根本原因，因此，本研究以AML細(xì)胞株HL-60為靶細(xì)胞，采用腹腔注射的方法建立AML模型，觀察淫羊藿提取物體內(nèi)對AML細(xì)胞株HL-60的抑制作用，為尋找治療AML潛在的有效藥物提供理論依據(jù)?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物 SPF級，SCID小鼠60只，雌雄各半，7~8周齡，體質(zhì)量20~22 g，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司提供，許可證編號：SCXK（京）2017-019。動物房要求恒溫20~22℃，恒濕60%~70%，5只1籠喂養(yǎng)，自然光照，自由飲純凈水，食料高壓滅菌。

1.2 藥物及試劑 1）淫羊藿提取物的提取。取干燥淫羊藿生藥200 g，加400 mL雙蒸水浸泡1 h，采用加熱提取法得到200 mL水煎劑，制成的生藥水煎提取液置4℃冰箱保存?zhèn)溆?。淫羊藿提取物由湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬人民醫(yī)院藥學(xué)部提取。阿糖胞苷標(biāo)準(zhǔn)品購自上海源葉生物科技有限公司；AML細(xì)胞株HL-60購自上海撫生實(shí)業(yè)有限公司；同源性磷酸酶-張力蛋白（PTEN）、多聚腺苷二磷酸核糖多聚酶（PARP）ELISA試劑盒（南京森貝伽生物科技有限公司）；胎牛血清和RPMll640培養(yǎng)液（賽默飛）；環(huán)磷酰胺注射液（上海瀚香生物科技有限公司）；DAB試劑盒和小鼠抗人CD13和CD71單克隆抗體 （北京中山生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品）。

1.3 細(xì)胞培養(yǎng) 取出凍存AML細(xì)胞株HL-60的冷凍管速融，37℃解凍，細(xì)胞培養(yǎng)箱通5%CO2，恒溫37℃，解凍后HL-60接種于含100 mg/L鏈霉素、100 U/mL青霉素G和10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)。常規(guī)傳代培養(yǎng)3 d，EDTA消化后注入離心管，1000 r/min低速離心5 min，收集AML細(xì)胞株HL-60調(diào)制成細(xì)胞數(shù)密度為1×107的細(xì)胞懸液備用。

1.4 造模與分組 60只小鼠隨機(jī)選取其中的50只，再隨機(jī)分為模型組、阿糖胞苷組、觀察1組、2組和3組，另10只正常小鼠設(shè)為空白對照組。將模型組、阿糖胞苷組、觀察1組、2組和3組SCID小鼠移出，在超凈臺上，按100 mg/kg體質(zhì)量的環(huán)磷酰胺腹腔注射預(yù)處理，每日1次，注射2 d，第3日取備用的AML細(xì)胞株HL-60細(xì)胞懸液，均從小鼠右側(cè)腹部皮下單點(diǎn)注射（1×107/鼠），空白對照組不做處理。注射后第3周以肝脾出現(xiàn)腫瘤浸潤、外周血白細(xì)胞達(dá)（4.03±1.92）×109/L為成瘤標(biāo)準(zhǔn)［9］。在造模的預(yù)實(shí)驗(yàn)中，平均成瘤時(shí)間為（14.63±2.74） d，平均生存時(shí)間達(dá)（54.36±6.97） d，說明這種方法造模簡單，成瘤率高 （本實(shí)驗(yàn)成瘤率為100%），并能更真實(shí)、直觀地觀察白血病細(xì)胞在肝、脾、肺等內(nèi)臟器官的浸潤及轉(zhuǎn)移情況。

1.5 給藥方法 注射AML細(xì)胞株HL-60細(xì)胞懸液后第3周最后1 d，觀察1組、2組和3組分別用淫羊藿提取物，按10、5、2.5 mL/kg灌胃 5周，模型組和空白對照組灌胃等體積0.9%氯化鈉注射液5周。阿糖胞苷組尾靜脈注射阿糖胞苷標(biāo)準(zhǔn)品 100 mg/（m2·d），每日 1次，共治療5 d。

1.6 標(biāo)本采集與檢測 1）外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類。在治療結(jié)束時(shí)取尾靜脈血0.1 mL，用人工計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)白細(xì)胞、紅細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和HL-60細(xì)胞總數(shù)。2）流式細(xì)胞分析儀檢測CD13和CD71表達(dá)率及細(xì)胞各周期細(xì)胞百分率。在治療第5周最后1 d，處死小鼠，摘取肝、脾組織，制成組織勻漿細(xì)胞懸液，加鼠抗人CD13-PE和CD71-PE，陰性對照加羊抗小鼠IgG-PE標(biāo)記，4℃下避光染色30 min，PBS液洗2次，按試劑盒操作進(jìn)行流式細(xì)胞學(xué) （FCM）檢測CD13和CD71陽性表達(dá)率。取尾靜脈血0.1 mL，用紅細(xì)胞裂解液去除紅細(xì)胞制成單細(xì)胞懸液，用PBS液洗2次，75%乙醇固定，12 h后采用FCM方法上樣進(jìn)行檢測，并用Cell Quest析軟件分析各組G1和S期HL-60細(xì)胞所占百分率。3）Western blotting檢測PTEN和PARP蛋白表達(dá)。稱取小鼠脾臟組織約100 mg，剪碎后勻漿，提取總蛋白質(zhì)進(jìn)行電泳分離。電泳分離時(shí)在100 V恒壓下電泳20 min，150 V恒壓下電泳60 min，250 mA下電轉(zhuǎn)膜90 min，然后將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到PVDF膜上，用5%脫脂奶粉室溫下封閉1 h，分別加入Ⅰ抗兔抗人PTEN和PARP單克隆抗體10 mL，4℃過夜。然后加入生物素化Ⅱ抗，室溫2 h后加ABC復(fù)合物，室溫下消化30 min，再后再加DAB顯色液顯色。以β-actin為內(nèi)參，以目的基因灰度值/β-actin灰度值之比值表示相應(yīng)基因的相對值。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以（±s）表示，先進(jìn)行單因素方差分析，組間差異則采用兩樣本均數(shù)t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組小鼠外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類比較 見表1。FCM檢測顯示，模型組白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和HL-60細(xì)胞總數(shù)升高，中性粒細(xì)胞降低，與空白對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與模型組比較，阿糖胞苷組白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和HL-60細(xì)胞總數(shù)明顯降低，中性粒細(xì)胞升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。觀察2組和觀察3組這一作用與阿糖胞苷組相似，與模型組比較各指標(biāo)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表1 各組小鼠外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類比較（±s）

表1 各組小鼠外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類比較（±s）

與空白對照組比較，*P＜0.05；與模型組比較，△P＜0.05。下同。

組別 n空白對照組 1 0模型組 1 0阿糖胞苷組 1 0白細(xì)胞（1 0 9/L）中性粒細(xì)胞（%）淋巴細(xì)胞（%）H L-6 0細(xì)胞（%）5.0 3±0.2 1 3.5 1±0.2 0 7 0.5 6±5.2 3 0 1 0.2 1±1.6 4* 1.6 9±0.1 1* 8 6.6 4±7.5 1* 1 7.8 2±1.9 6*4.6 7±0.8 6△ 3.0 2±0.2 5△ 6 8.9 4±8.4 3△ 5.4 6±0.7 2△觀察 1組 1 0 9.7 5±1.2 7 1.8 6±0.1 7 8 4.8 6±6.9 7 1 5.1 4±1.7 5觀察 2組 1 0 7.4 8±1.0 4△ 3.4 2±0.1 4△ 7 2.4 2±5.8 4△ 6.3 8±1.0 2△觀察 3組 1 0 5.1 3±0.7 1△ 3.8 6±0.2 2△ 7 3.5 1±7.2 1△ 6.0 6±0.6 5△

2.2 各組小鼠CD13和CD71表達(dá)率和HL-60細(xì)胞各周期細(xì)胞百分率比較 見表2。與空白對照組比較，模型組在治療第5周G1期HL-60細(xì)胞百分率明顯降低，CD71和CD13表達(dá)率明顯升高（P＜0.05）。與模型組比較，阿糖胞苷組G1期HL-60細(xì)胞百分率明顯升高，CD71和CD13表達(dá)率和S期HL-60細(xì)胞百分率明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。觀察2組和觀察3組這一作用與阿糖胞苷組相似，與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且觀察2組和觀察3組G1和S期HL-60細(xì)胞百分率呈濃度效應(yīng)關(guān)系。

2.3 各組小鼠PTEN和PARP相對表達(dá)量比較 見表3。與空白對照組比較，模型組PTEN明顯降低，PARP明顯升高（P＜0.05）。與模型組比較，阿糖胞苷組PTEN明顯升高，PARP明顯降低（P＜0.05）。觀察2組和觀察3組這一作用與阿糖胞苷組相似，與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表2 各組小鼠CD13和CD71表達(dá)率和HL-60細(xì)胞各周期HL-60細(xì)胞百分率比較（%，±s）

表2 各組小鼠CD13和CD71表達(dá)率和HL-60細(xì)胞各周期HL-60細(xì)胞百分率比較（%，±s）

與觀察 2組比較，▲P＜0.05。

組別 n空白對照組 1 0模型組 1 0阿糖胞苷組 1 0 C D 7 1 C D 1 3 G 1期 S期0.2 3±0.0 2 3.7 5±0.2 7 5 0.5 2±3.1 8 3 9.8 4±4.9 5 3.5 9±0.1 3 8.5 7±0.5 4 3 5.9 4±1.9 3 3 7.5 7±3.1 2 0.3 7±0.0 3△ 3.6 9±0.1 3△ 7 8.4 6±6.2 5△ 1 4.8 3±1.9 4△觀察 1 組 1 0 3.0 3±0.2 4 7.9 1±0.7 6*5 2.4 6±3.2 2 3 6.1 5±3.0 4觀察 2 組 1 0 1.5 8±0.1 2△ 5.1 4±0.2 2△ 6 7.4 6±5.8 4△ 2 0.3 4±1.5 7△觀察 3 組 1 0 0.7 1±0.0 5△ 4.0 1±0.1 9△ 7 6.5 3±6.9 1△▲ 1 5.5 2±1.2 1△▲

表3 各組小鼠PTEN和PARP相對表達(dá)量比較（±s）

表3 各組小鼠PTEN和PARP相對表達(dá)量比較（±s）

組 別 n空白對照組 1 0模型組 1 0阿糖胞苷組 1 0 P T E N P A R P 1.7 1±0.1 6 6.4 1±0.2 4 0.9 2±0.0 7* 9.2 7±1.1 4*1.9 7±0.1 8△ 6.8 3±0.5 4△觀察 1 組 1 0 0.9 5±0.0 6 9.0 2±0.8 5觀察2組 1 0 1.6 8±0.1 1△ 7.9 4±0.7 9△觀察3組 1 0 1.7 3±0.1 5△ 7.3 6±0.8 1△

3 討 論

急性白血?。ˋL）為兒童最常見的淋巴系統(tǒng)惡性腫瘤，根據(jù)癌變細(xì)胞類型可分為AML和急性淋巴細(xì)胞白血?。ˋLL）兩大類。該病屬造血干細(xì)胞惡性克隆性疾病，其病理基礎(chǔ)是因異常的幼稚白血病細(xì)胞和原始細(xì)胞大量增殖并蓄積于骨髓而影響到正常造血功能，并在增殖的同時(shí)廣泛浸潤淋巴、肝、脾等臟器，造成嚴(yán)重的出血、貧血、浸潤及感染［10］。臨床檢測表明，兒童AML的骨髓標(biāo)本中PTEN蛋白表達(dá)缺失，PTEN屬磷酸酶活性的抑癌基因，在細(xì)胞生長信號通路中起重要作用，具有蛋白磷酸酶活性和脂質(zhì)磷酸酶活性，可通過拮抗酪氨酸激酶等磷酸化酶的活性而抑制腫瘤細(xì)胞的生長、侵襲［11］。

在本研究中，筆者用陽性藥阿糖胞苷組作為陽性對照，發(fā)現(xiàn)淫羊藿提取物有與其相似的藥理作用，這一作用雖弱于阿糖胞苷，但兩者對相關(guān)檢測指標(biāo)的作用結(jié)果基本一致。在實(shí)驗(yàn)中，模型組PTEN低表達(dá)，不能有效抑制腹腔接種的AML細(xì)胞株HL-60細(xì)胞增殖，這是造成腫瘤細(xì)胞無序生長的關(guān)鍵。而觀察2組、3組PTEN蛋白表達(dá)量增加，說明適當(dāng)劑量的淫羊藿提取物可提高抑癌基因PTEN表達(dá)，從而拮抗酪氨酸激酶等磷酸化酶的活性，達(dá)到抑制AML細(xì)胞株HL-60細(xì)胞在SCID小鼠體內(nèi)生長的作用。PARP存在于真核細(xì)胞中，PARP在生理狀態(tài)下保持染色體結(jié)構(gòu)完整性，參與DNA復(fù)制和轉(zhuǎn)錄，PARP與細(xì)胞的分化、癌化和DNA的修復(fù)有關(guān)。在白血病的發(fā)病過程中，過度激活的PARP可產(chǎn)生大量的聚芳酯，PARP上的絲氨酸磷酸化而失去結(jié)合B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-6基因的能力［12］。模型組PARP高表達(dá)，被異常激活的PARP產(chǎn)生大量的聚芳酯，失去結(jié)合B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-6基因的能力，造成腹腔接種的AML細(xì)胞株HL-60細(xì)胞無限制性增殖。而觀察2組、3組PARP明顯下降，提示淫羊藿提取物可通過抑制PARP的裂解，阻止PARP磷酸化，從而產(chǎn)生凋亡作用［13-14］，達(dá)到抑制HL-60細(xì)胞分化和增殖的目的。CD13存在于細(xì)胞表面，是檢測AML的重要標(biāo)志物，CD13陽性表明生存率低，是預(yù)后不良重要標(biāo)志［15］。CD71也存在于細(xì)胞表面，為轉(zhuǎn)鐵蛋白受體，可通過與其配體轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合而介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)鐵的攝取和轉(zhuǎn)運(yùn)，在一定程度上反映細(xì)胞的增殖活性。模型組CD13和CD71表達(dá)率均高于空白對照組，刺激其與轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合，使細(xì)胞內(nèi)鐵的攝取和轉(zhuǎn)運(yùn)激增促使腹腔接種的AML細(xì)胞株 HL-60細(xì)胞分化、增殖和浸潤。本課題組觀察淫羊藿提取物體內(nèi)對CD13和CD71均有明顯的抑制作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，觀察2組、3組CD13和CD71陽性表達(dá)率均明顯下降，這與朱劍鋒等［16］觀察到淫羊藿通過抑制CD13和CD71表達(dá)率而影響K562細(xì)胞的誘導(dǎo)分化作用結(jié)果高度一致。另有研究表明，CD71在靜止期的淋巴細(xì)胞上不表達(dá)，在高分化期則高表達(dá)，這與本研究中模型組觀察到的結(jié)果一致，故CD71常被作為AML的重要標(biāo)志物用于血液腫瘤的診斷及鑒別診斷［17］。本實(shí)驗(yàn)觀察到觀察2組、3組CD13和CD71陽性表達(dá)率均明顯下降，因此可以推斷，淫羊藿提取物通過抑制CD13和CD71表達(dá)，并在體內(nèi)生長因子和有絲分裂原的刺激下，促使細(xì)胞從G0期進(jìn)入G1期，將處于對數(shù)生長期腫瘤細(xì)胞的阻滯于G1期。

眾所周知，所有惡性腫瘤生長的本質(zhì)就是細(xì)胞周期調(diào)控紊亂即失控性增殖，目前，在臨床上使用的抗癌藥大多作用于細(xì)胞，可使細(xì)胞阻滯在S期或G2/M期［18］。大量抗癌中藥及其單體在體外實(shí)驗(yàn)中能夠誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯而發(fā)揮抗癌作用［19］。從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果來看，觀察2、3組外周血白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和HL-60細(xì)胞總數(shù)明顯降低，中性粒細(xì)胞升高，G1期細(xì)胞百分率明顯升高，S期細(xì)胞百分率明顯降低，這提示淫羊藿提取物將兩組HL-60細(xì)胞阻滯于G1期。

綜上所述，淫羊藿提取物有與陽性藥阿糖胞苷相似的藥理作用，在體內(nèi)對急性髓系白血病HL-60細(xì)胞株有一定的抑制作用，其機(jī)制可能通過下調(diào)CD13和CD71，裂解PARP以誘導(dǎo)急性髓系白血病細(xì)胞凋亡，增強(qiáng)PTEN蛋白表達(dá)并促使細(xì)胞阻滯于G1期，從而發(fā)揮抑制白血病細(xì)胞的增殖作用。

［1］ 王孝會，陳芳，符爽，等.兒童急性髓系白血病免疫表型特點(diǎn)分析［J］.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2017，25（16）：2651-2654.

［2］ 李釗，王雄彪.淫羊藿甙的研究進(jìn)展［J］.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2015，24（8）：908-910.

［3］ 張淑琴，贠向陽，鄭倩，等.淫羊藿素對3種人腫瘤細(xì)胞增殖抑制作用的比較［J］.中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2015，32（8）：1919-1921.

［4］ 張黎聲，韓小晶，羅志榮，等.淫羊藿苷對大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞遷移作用的影響［J］.中國中醫(yī)藥信息雜志，2017，24（2）：44-48.

［5］ Li C，Li Q，Mei Q，et al.Pharmacological effects and pharmacokinetic properties of icariin，the major bioactive component in Herba Epimedii［J］.Life Sci，2015，126（12）：57-68.

［6］ 張溫花，張文超，于遠(yuǎn)東，等.淫羊藿苷對前列腺癌細(xì)胞株活力、遷移與侵襲的作用［J］.中國病理生理雜志，2017，33（6）：1017-1020.

［7］ 宋飛，高素君，張?jiān)莆?，?淫羊藿苷對NB4白血病細(xì)胞株增殖和凋亡的影響及其作用機(jī)制［J］.吉林大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2015，41（6）：1181-1185.

［8］ 謝超，董偉，溫培娥，等.曲古霉素A和淫羊藿甙誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞分化過程中nm23和c-myc及G-CSF表達(dá)變化的研究［J］.中華腫瘤防治雜志，2008，15（7）：481-486.

［9］ 單武林，章成芳，馬筱玲，等.不同方法接種構(gòu)建的SCID小鼠HL-60白血病模型生物學(xué)特性分析［J］.安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，49（6）：837-841.

［10］Creutzig U，van den Heuvel-Eibrink MM，Gibson B，et al．Diagnosis and management of acute myeloid leukemia in children and adoleseents：recommendations from an international expert panel［J］.Blood，2012，120（16）：3187-3205．

［11］王妍，徐酉華，胡艷妮，等.GSK-3β、PTEN、PLK1 在兒童急性髓系白血病中的表達(dá)及意義［J］.重慶醫(yī)學(xué)，2013，42（28）：3347-3349.

［12］尚粉青，閆龍龍，張玎，等.高糖通過調(diào)節(jié)腺苷酸活化蛋白激酶/聚二磷酸腺苷核糖聚合酶-1的磷酸化抑制B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-6基因表達(dá)的研究［J］.中國糖尿病雜志，2016，24（11）：1012-1015.

［13］潘莉萍，袁偉.淫羊藿苷促進(jìn)白血病K562細(xì)胞凋亡的研究［J］.白血病·淋巴瘤，2016，25（6）：340-343.

［14］朱華宇，李玉潔，吳元?jiǎng)伲?脫水淫羊藿素與金雀異黃酮對 MCF-7、MDA-MB231細(xì)胞株增殖的影響研究［J］.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2017，26（7）：685-688.

［15］馬杰，劉延方，陳勝梅，等.不同年齡段成人急性淋巴細(xì)胞白血病免疫表型差異分析［J］.中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志，2010，18（4）：942-945.

［16］朱劍鋒，昊正東，孟坤，等.淫羊藿提取物IC163對K562細(xì)胞的誘導(dǎo)分化作用觀察［J］.臨床血液學(xué)雜志，2011，24（5）：300-302.

［17］魏園玉，張曉飐，張帆，等.CD71作為增殖指標(biāo)在血液腫瘤中的表達(dá)及與Ki-67的相關(guān)性分析 ［J］.中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志，2015，23（1）：234-240.

［18］詹啟敏，陳杰.細(xì)胞周期與腫瘤轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)［J］.中國腫瘤臨床，2014（1）：1-7.

［19］曹玫，歐陽露.植物甾醇的抗腫瘤作用及其機(jī)制研究進(jìn)展［J］.實(shí)用藥物與臨床，2015，18（9）：1104-1107.