王振濤 張曉丹 吳 鴻 柴松波 常紅波

（1.河南省中醫(yī)院，河南 鄭州 450002；2.上海中醫(yī)藥大學(xué)，上海 200032；3.河南中醫(yī)藥大學(xué)，河南 鄭州 450046）

抗纖益心濃縮丸是本院臨床經(jīng)驗方，由黃芪、紅參、益母草、丹參、澤蘭、等組成，具有益氣、活血、利水的功效。前期臨床觀察和實驗研究表明，抗纖益心方應(yīng)用于擴(kuò)張型心肌?。馓撗鲎C）患者，在改善臨床癥狀、血流動力學(xué)、心功能及抑制心室重構(gòu)等方面均取得良好療效［1-3］，為方便患者應(yīng)用，現(xiàn)已將其研發(fā)制作丸劑。本實驗在前期實驗的基礎(chǔ)上，就抗纖益心濃縮丸在抗靜脈血栓形成及其部分凝血功能方面進(jìn)行實驗研究?，F(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 SD大鼠，雌雄各半，體質(zhì)量（200±20）g，由北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供，合格證號：1140700105088。

1.2 試藥與儀器 抗纖益心濃縮丸由紅參、益母草、丹參、澤蘭、麥冬、黃芪、升麻、茯苓、白術(shù)組成（由河南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院藥劑室提供）。華法林鈉片（2.5 mg/片，上海信宜九福藥業(yè)有限公司，批號：H31022123）。水合氯醛（鄭州派尼有限公司生產(chǎn)，批號：20100614）。凝血酶時間（TT）測定試劑盒（德國 Siemens，批號：45625）。凝血酶原時間 （PT）測定試劑盒 （德國Siemens，批號：546887）。部分活化凝血酶原時間（APTT）測定試劑盒（德國 Siemens，批號：557191）。

1.3 干預(yù)方法 1）抗纖益心濃縮丸對靜脈血栓的影響。取40只SPF級SD大鼠，雌雄各半，隨機(jī)分為4組，即模型對照組（等量生理鹽水）、中藥高劑量組（18.8 g/kg），中藥低劑量組（4.7 g/kg），華法林鈉組（1.1 mg/kg）。 各組大鼠每日給藥1次，連續(xù)灌胃1周。末次給藥30 min后，進(jìn)行深靜脈血栓形成造模［4］，將大鼠以4%水合氯醛麻醉，用安爾碘常規(guī)消毒腹部，沿其腹部正中線剪開進(jìn)腹，將腹腔內(nèi)全部腸管移出，暴露血管，用沾滿生理鹽水的濕紗布包裹腸管，后置于腹部一側(cè)，用棉簽逐步分離下腔靜脈，于左腎靜脈下方用粗絲線結(jié)扎下腔靜脈，將暴露的腸管回納腹腔，依次連續(xù)縫合腹腔，于結(jié)扎下腔靜脈4 h后，打開腹腔，在結(jié)扎位置下方2 cm處用止血鉗夾閉管腔，并用小剪刀剪斷瘀血段血管，剖開瘀血段管腔，鑷子取出血栓，放于濾紙上，沾去血液，稱取血栓濕質(zhì)量。后放置烘干機(jī)處烘干24 h，稱取血栓干質(zhì)量。2）抗纖益心濃縮丸對大鼠凝血功能的影響。按上述實驗方法，在剖取瘀血段前，將各組大鼠腹主動脈取血，以 3.8%的枸櫞酸鈉（1∶9）抗凝，3000 r/min 離心15 min，分離血漿待測。按試劑盒說明測定APTT、PT、TT。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計軟件。計量資料以（±s）表示。多組間比較，若方差齊，用方差分析，若方差不齊則用非參數(shù)檢驗，兩兩組間比較用t檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠靜脈血栓干、濕質(zhì)量比較 見表1。中藥高、低劑量組及華法林鈉組均可以減輕結(jié)扎大鼠下腔靜脈所形成的血栓的干、濕質(zhì)量。與模型對照組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

表1 各組大鼠靜脈血栓干、濕質(zhì)量比較（mg，±s）

表1 各組大鼠靜脈血栓干、濕質(zhì)量比較（mg，±s）

與模型對照組比較，△P＜0.05。

組 別 n 血栓濕質(zhì)量 血栓干質(zhì)量模型對照組 1 0 2 6.2 3±4.4 2 9.9 0±3.1 4中藥高劑量組 1 0 1 5.1 1±4.3 9△ 5.0 4±0.8 4△中藥低劑量組 1 0 2 2.6 7±3.3 5△ 6.8 4±1.9 1△華法林鈉組 1 0 1 1.7 1±1.3 8△ 1.4 8±0.3 5△

2.2 各組大鼠凝血功能比較 見表2。中藥高、低劑量及華法林鈉組均能延長大鼠PT、TT、APTT。與模型對照組相比，中藥高劑量組及華法林鈉組均能延長PT、TT、APTT，差異具有統(tǒng)計意義（P＜0.01）。 中藥高劑量組與華法林鈉組相比，作用相當(dāng)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P ＞0.05）。

表2 各組大鼠凝血功能比較（s，±s）

表2 各組大鼠凝血功能比較（s，±s）

與模型對照組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。

組別 n P T T T A P T T模型對照組 1 0 1 3.4 1±1.4 6中藥高劑量組 1 0 2 4.0 2±2.5 3△△中藥低劑量組 1 0 1 5.1 4±1.6 1 4 0.5 3±1 2.0 4 1 7.0 5±1.5 7 5 0.8 5±1 2.6 0△△ 3 6.2 7±4.9 7△△3 7.8 3±6.6 5 2 0.5 2±3.1 0華法林鈉組 1 0 2 5.9 9±3.0 9△△5 3.5 5±3.7 2△△ 3 9.5 3±4.1 5△△

3 討 論

近些年，中醫(yī)藥在治療擴(kuò)張型心肌病方面發(fā)揮了重要作用。根據(jù)疾病的臨床表現(xiàn)本病可歸屬于中醫(yī)“喘證”“胸痹”“心悸”等范疇。筆者在長期治療本病的實踐中歸納其臨床特點，結(jié)合有關(guān)文獻(xiàn)及一些醫(yī)家認(rèn)識，認(rèn)為本病早期以氣虛為本，瘀血為標(biāo)。晚期患者出現(xiàn)心腎陽氣衰微，失去溫煦功能，逐漸出現(xiàn)瘀血、痰濁、水濕，但總以氣虛陽虛為本。其中氣虛是中心環(huán)節(jié)，因此筆者認(rèn)為治療擴(kuò)張型心肌病可予益氣活血法，擬抗纖益心方治療。方中丹參活血化瘀，通經(jīng)止痛，涼血清心。實驗研究顯示［5］，丹參可以明顯抑制血小板聚集、降低血液黏稠度、擴(kuò)張微血管、增加血流量，從而具有較好的抗血小板聚集、防止血小板活化、防止血栓形成的作用。澤蘭可活血、祛瘀、利水。黃芪益氣、固表、利水，研究［6］顯示黃芪可能通過抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞PAI-1表達(dá)和活性發(fā)揮抗血栓作用。益母草清熱解毒，通經(jīng)活血，利水消腫，現(xiàn)代藥理研究顯示［7-12］，益母草提取物具有抗血栓，抗血小板聚集，改善微循環(huán)等作用。

研究中對照藥選用華法林，是目前臨床中最常用經(jīng)典的抗凝藥之一，其通過抑制凝血因子的活化抑制新的血栓形成，限制血栓的擴(kuò)大和延展，抑制在血栓的基礎(chǔ)上形成新的血栓，抑制血栓脫落和栓塞的發(fā)生，有利于機(jī)體纖溶系統(tǒng)清除已經(jīng)形成的血栓。靜脈血栓形成［13］主要是由于靜脈損傷、血流緩慢、血液高凝引起血液在血管內(nèi)不能正常的凝結(jié)，阻塞靜脈管腔，導(dǎo)致血栓的形成。實驗結(jié)果顯示中藥高、低劑量組與模型對照組對比，能夠減少靜脈血栓干濕質(zhì)量，但是效果沒有華法林鈉組顯著。表明抗纖益心濃縮丸可以抑制靜脈血栓的形成，但是效果沒有抗凝藥物華法林鈉的作用明顯。

凝血功能的測定主要是指測定 APTT、PT、TT［14］。APTT反應(yīng)內(nèi)源性凝血系統(tǒng)的凝血功能，因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ的水平對APTT的水平有直接影響；PT是反應(yīng)外源性凝血系統(tǒng)的凝血功能，能反應(yīng)血漿凝血酶原的水平，也可以反應(yīng)凝血因子Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ的水平活性；TT反應(yīng)凝血、抗凝血及纖維蛋白溶解系統(tǒng)功能。對凝血功能的檢測可以了解藥物的相關(guān)凝血功能［15-18］。上述實驗顯示，與模型對照組相比，抗纖益心濃縮丸高、低劑量組及華法林鈉組均能延長PT、TT、APTT，差異具有統(tǒng)計意義（P＜0.05），其中，高劑量與華法林鈉組作用更明顯（P＜0.01）；高劑量組與華法林鈉組相比，作用相當(dāng)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。說明抗纖益心濃縮丸可能通過延長APTT、PT、TT，達(dá)到一定的預(yù)防血栓形成的作用。

綜上所述，抗纖益心濃縮丸可以減少靜脈血栓干濕質(zhì)量，亦能延長APTT、PT、TT，從而說明抗纖益心濃縮丸具有一定抑制血栓形成的作用。這可能與抗纖益心濃縮丸對血液運行及凝血系統(tǒng)影響有一定的關(guān)聯(lián)，但具體機(jī)制有待進(jìn)一步探究。

［1］ 王振濤，韓麗華，柴松波，等.抗纖益心方對擴(kuò)張型心肌病心力衰竭大鼠心肌基質(zhì)金屬蛋白酶-1及其抑制劑表達(dá)的影響［J］.中醫(yī)雜志，2011，52（16）：1406-1408.

［2］ 王振濤，韓麗華，朱明軍，等.抗纖益心方對擴(kuò)張型心肌大鼠心?、瘛ⅱ笮湍z原mRNA表達(dá)的影響［J］.中成藥，2009，31（10）：1496-1500.

［3］ 王振濤，韓麗華，朱明軍，等.抗纖益心方對擴(kuò)張型心肌病大鼠心肌細(xì)胞凋亡及Bax、Bcl-2蛋白表達(dá)的影響［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2009，24（2）：152-155.

［4］ 劉政，張玥，候玉芬.深靜脈血栓形成動物模型的研究進(jìn)展［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2010，28（1）：57-58.

［5］ 李學(xué)林，姚保杰，李春曉.丹參及其制劑對血小板功能影響的研究進(jìn)展［J］.中國藥房，2013，24（7）：670-671.

［6］ 楊長春，馬增春.黃芪、當(dāng)歸對血管內(nèi)皮細(xì)胞纖溶酶原激活物抑制劑-1 的影響［J］.第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2010，32（11）：1149-1151.

［7］ Laguens R，Alvarez P，Vigliano C，et al.Coronary microcirculation remodeling in patientswithidiopathic dilated cardiomyopathy［J］.Cardiology，2011，119（4）：191-196.

［8］ 阮金蘭，杜俊蓉，曾慶忠，等.益母草的化學(xué)藥理和臨床研究進(jìn)展［J］.中草藥，2003，34（11）：16-18.

［9］ 李儀奎.中藥藥理實驗方法學(xué)［M］.上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，2006，709.

［10］梁大華.益母草的藥理學(xué)研究進(jìn)展［J］.中外醫(yī)學(xué)研究，2015，13（3）：160-162.

［11］李月仕.益母草的研究進(jìn)展［J］.國外醫(yī)學(xué)：醫(yī)學(xué)地理分冊，2014，35（4）：342-345.

［12］趙小梅，謝曉芳，熊亮.益母草注射液主要提取成分對凝血系統(tǒng)影響的篩選［J］.中國實驗方劑學(xué)雜志，2014，20（4）：128-129.

［13］ Tsagalou EP，Anastasiou-Nana M，Agapitos E，et al.Depressed coronary flow reserve is associated with decreased myocardial capillary density in patients with heart failureduetoidio pathicdilated cardiomyopathy［J］.Am Coll Cardiol，2008，52（17）：1391-1398.

［14］ Arad M，F(xiàn)reimark D.Predicting prognosis in dilated cardiomyopathy［J］.Isr Med Assoc J，2012，14（11）：687-689.

［15］王深明，武日東.深靜脈血栓形成［J］.中國實用外科雜志，2015，35（12）：1264-1266.

［16］唐寧.血栓形成及抗組織因子藥物研究進(jìn)展［J］.中國老年學(xué)雜志，2013，1（33）222-224.

［17］姚天賜，許云祿.溶栓藥物的臨床應(yīng)用及其進(jìn)展［J］.海峽藥學(xué)，2010，22（6）：1-4.

［18］秦綱，呂吉元.凝血與血栓及抗血栓藥物的研究進(jìn)展［J］.心肺血管病雜志，2012，3（13）：348-350.