尹逸叢，馬超超，吳 潔*，禹松林，國秀芝，侯立安，由婷婷，王丹晨，李洪雷，徐 濤，邱 玲*

(1.中國醫(yī)學科學院 北京協(xié)和醫(yī)學院 北京協(xié)和醫(yī)院 檢驗科， 北京 100730；2.大連醫(yī)科大學 檢驗醫(yī)學院，遼寧 大連 116044；3.中國醫(yī)學科學院基礎醫(yī)學研究所 北京協(xié)和醫(yī)學院基礎學院 流行病及統(tǒng)計學系， 北京 100005)

高尿酸血癥及其引發(fā)的痛風給人類健康造成了嚴重的威脅，受到眾多研究者的關注。研究[1]表明尿結石和運動誘發(fā)的急性腎損傷 (exercise-induced acute kidney injury, EIAKI)是低尿酸血癥的并發(fā)癥。低尿酸血癥也是健康人發(fā)生腎功能異常的危險因素[2]。韓國、日本報道其低尿酸血癥患病率分別為0.53%和0.19%～0.58%[3- 4]。本研究團隊正在發(fā)表中的研究顯示寧夏人群低尿酸血癥的患病率為2.4%，遠高于日韓人群。

本研究擬借助低尿酸血癥高發(fā)的寧夏人群，探索低尿酸血癥相關的基因位點，從而為其診斷提供有效信息。本研究依據(jù)Merriman等[5]的研究結果，選取了最常見的影響尿酸水平的SLC22A12基因rs505802位點和SLC2A9基因rs6855911、rs737267、rs12498742、rs7442295、rs734553和rs16890979 位點進行單核苷酸多態(tài)性檢測。

1 材料與方法

1.1 研究對象

用多階段、分層、隨機整群抽樣的方法于2011年10月至11月在寧夏回族自治區(qū)納入受試者6 056例，將血尿酸水平低于2 g/L(119 μmol/L)作為低尿酸血癥的診斷標準，確定低尿酸血癥受試者98例。由于低尿酸血癥的患病率普遍較低，因此樣本例數(shù)較少。用1∶1配對病例對照研究方法，按照性別和年齡嚴格匹配84名血清尿酸正常人群作為對照組。所有研究對象均簽署知情同意書，并由北京協(xié)和醫(yī)院倫理委員會批準。

1.2 方法

1.2.1 體格檢查和生化指標檢測：測量血壓、身高、體質(zhì)量和腰圍，計算體質(zhì)指數(shù)(BMI)=質(zhì)量(kg)/身高2(m2)?？崭钩槿§o脈血5 mL×2(抗凝血和非抗凝血)，其中非抗凝血靜置30～45 min后分離血清，-80 ℃冰箱保存，抗凝血用于DNA提取，同批測量。尿酸(uric acid, UA)、血糖(blood glucose, Glu)、總膽固醇(total cholesterol, TC)、三酰甘油(triglyceride, TG)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein, LDL-C)、高密度脂蛋白(high density lipoprotein, HDL-C)、肌酐(creatinine, Cr)和尿素(BUN)用Beckman AU 5400生化分析儀測定。血脂檢測試劑為Sekisui公司產(chǎn)品，其余生化指標試劑為Beckman配套試劑。

1.2.2 SNP檢測: 使用天根血液基因組DNA提取試劑盒從抗凝血中提取基因組DNA作為模板。用Sequenom Mass ARRAY iPLEX GOLD 技術檢測SLC22A12基因rs505802位點和 SLC2A9 基因rs6855911、rs737267、rs12498742、rs7442295、rs734553和rs16890979 位點的單核苷酸多態(tài)性。通過Sequenom公司的Assay Design 3.1軟件對以上SNPs位點進行引物設計，引物序列(表1)。SNP檢測前處理分3步，PCR擴增、堿性磷酸酶消化及IPLEX 單堿基延伸后點樣進入Agena MassARRAY Analyzer 4基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜儀進行反應，確定SNP分型。

1.3 統(tǒng)計學分析

表1 引物序列Table 1 Primer sequence

2 結果

2.1 研究人群基本資料

低尿酸組98例，平均年齡(32.7±16.6)歲，對照組84名，平均年齡(32.8±17.2)歲，臨床及代謝指標(表2)。結果表明低尿酸組的TC、LDL-C及Cr均低于對照組(P<0.05)。

2.2 等位基因和基因型頻率

SLC22A12基因rs505802位點及SLC2A9基因rs6855911、rs737267、rs12498742、rs7442295、rs734553和rs16890979位點基因型頻率分布符合Hardy-Weinberg平衡定律(P>0.05)，所選擇的研究對象均具有群體代表性，可用來作為遺傳標記分析SLC22A12和SLC2A9基因與低尿酸血癥的相關性。等位基因分析結果(表3)顯示，SLC2A9基因的rs7442295位點與低尿酸血癥相關。rs7442295位點低尿酸組基因G的頻率高于對照組(6.00%vs1.00%,Pc<0.05)，A/G基因型在低尿酸組的分布頻率高于對照組。攜帶該位點的A/A基因型的人群低尿酸血癥患病風險低于含有A/G基因型的人群(Pc<0.05，OR=0.08，95%CI：0.01～0.66)。結果表明SLC2A9基因的rs7442295位點與低尿酸血癥相關，而SLC22A12基因rs505802位點及SLC2A9基因rs6855911、rs737267、rs12498742、rs734553和rs16890979位點與低尿酸血癥未見相關。

表2 低尿酸組與對照組一般體檢指標比較

*P<0.01 compared with control group.

3 討論

目前對低尿酸血癥的界值并沒有公認的標準，依據(jù)之前主流文獻對低尿酸血癥的定義，本研究將低尿酸血癥定義為血清尿酸水平低于2 g/L(119 μmol/L)[6-7]。腎性低尿酸血癥包括原發(fā)性和獲得性。原發(fā)性腎性低尿酸血癥是一種以腎小管尿酸轉(zhuǎn)運體缺陷為特征的遺傳性、異質(zhì)性疾病[8]，分為1型和2型，分別由SLC22A12基因和SCL2A9基因突變引起。

本研究檢測SLC22A12基因rs505802位點， 未發(fā)現(xiàn)其與低尿酸血癥的相關性。SLC2A9基因編碼的葡萄糖轉(zhuǎn)運體蛋白9(GLUT9)主要表達于腎小管細胞，參與尿酸重吸收，是血尿酸的主要遺傳決定因素。SLC2A9基因的rs7442295位點與血尿酸水平密切相關[9]。隨著rs7442295位點的主要等位基因A拷貝數(shù)目的增加，高尿酸血癥的風險增加[9]。同時在一項研究rs7442295與痛風關系的Meta分析結果表明含有該位點雜合基因的人群發(fā)生痛風的風險較低[10]。本研究結果顯示在rs7442295位點上，攜帶A/A基因型人群低尿酸血癥的患病風險低于攜帶A/G基因型人群，提示基因A突變?yōu)镚可能與低尿酸血癥發(fā)生相關。攜帶該位點A/A基因型的人群發(fā)生低尿酸血癥的風險較低，這一結果與上述兩項研究的結果相符。檢測SLC2A9基因的其余5個SNPs位點均未顯示與低尿酸血癥相關。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)低尿酸組的TC、LDL-C及Cr低于對照組，這和之前的報道[4]一致。低尿酸組的BMI水平低于對照組，可能由于樣本例數(shù)過少，并無統(tǒng)計學差異。低尿酸組的低BMI水平可能與血脂水平較低有關，Cr偏低可能是由于腎臟排泄增加所致。

表3 7個SNPs位點等位基因及基因型在低尿酸組和對照組的分布Table 3 Distribution of alleles and genotypes in hypouricaemia group and control group in 7 SNPs

Underline is of statistical significance (Pc<0.05，by the Bonferroni correction).

本研究的局限性在于病例數(shù)量較少，由于低尿酸血癥患病率低，國外報道其患病率均低于1.0%。本研究團隊分析中國6省(黑龍江、內(nèi)蒙古、四川、湖南、寧夏和云南)的大型流行病學調(diào)查數(shù)據(jù)顯示，中國地區(qū)低尿酸血癥的患病率約為0.7%，其中寧夏回族自治區(qū)人群患病率最高為2.4%，因此本研究選取寧夏人群進行了低尿酸血癥與SNPs位點關系的研究。

迄今為止，同類型的研究中尚未從SNPs的角度進行與低尿酸血癥相關基因的鑒定，本研究首次報道了SLC2A9基因rs7442295位點突變與中國寧夏地區(qū)人群低尿酸血癥相關，為后續(xù)中國地區(qū)低尿酸血癥的病因研究提供了有效的信息。

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