饒 紅 武福云 陳德森△

（1.湖北省十堰市太和醫(yī)院，湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬醫(yī)院，湖北 十堰 442000；2.湖北醫(yī)藥學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，湖北 十堰 442000）

淫羊藿又稱仙靈脾，為小檗科淫羊藿屬植物，藥用其全草，其味辛、甘、性溫，歸肝腎經(jīng)［1］。淫羊藿具有補(bǔ)腎壯陽(yáng)、強(qiáng)健筋骨、祛風(fēng)除濕之功效［2］。本研究中所用淫羊藿素是淫羊藿全草經(jīng)現(xiàn)代工藝提取的生物堿?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，淫羊藿素具有抗氧化、抗動(dòng)脈粥樣硬化、調(diào)節(jié)疫力、促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞增殖及遷移等藥理作用［3-4］。前列腺癌屬前列腺的惡性腫瘤，由前列腺腺泡細(xì)胞基因突變引發(fā)腺泡細(xì)胞異常生長(zhǎng)并最終導(dǎo)致癌變，前列腺癌以中老年男性為高危人群，占癌癥死亡的第2位，因此，積極防治前列腺癌對(duì)提高男性生命健康具有重要意義。研究表明，磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信號(hào)通路在抑制細(xì)胞凋亡、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖方面具有重要作用，與前列腺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，而鈣黏蛋白E（E-cadherin）在 PI3K/Akt信號(hào)通路活化中發(fā)揮關(guān)鍵作用，E-cadherin低表達(dá)提示腫瘤細(xì)胞周期發(fā)生改變，此時(shí)腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)［5-6］。很多中藥及其單體在體外實(shí)驗(yàn)中具有降低細(xì)胞侵襲能力和轉(zhuǎn)移作用，如在對(duì)中藥淫羊藿的單體淫羊藿素的研究中，有研究發(fā)現(xiàn)其在細(xì)胞培養(yǎng)中對(duì)LNCaP細(xì)胞前列腺癌細(xì)胞周期具有明顯的抑制作用［7-8］。但針對(duì)活體實(shí)驗(yàn)卻鮮有研究，本實(shí)驗(yàn)主要通過(guò)觀察淫羊藿素對(duì)雄激素依賴型前列腺癌模型小鼠前列腺癌組織PI3K/Akt信號(hào)通路及E-cadherin的影響?，F(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物及分組

雄性 BALB/c-nu裸鼠，SPF 級(jí)，40只，4～6周齡，體質(zhì)量20.5～21.5 g，隨機(jī)均分為空白對(duì)照組、荷瘤組、LY294002組和淫羊藿素組，每組10只。動(dòng)物購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，許可證號(hào)：SYXK（鄂）2017-0031。實(shí)驗(yàn)中將單只裸鼠置于隔離器中，用無(wú)特定病原體條件飼料飼養(yǎng)，室溫為26～28℃，相對(duì)溫度應(yīng)保持在40～60%，維持10 h光照，14 h無(wú)光的明暗周期。裸鼠采用脫臼法處死，本實(shí)驗(yàn)方法經(jīng)十堰市太和醫(yī)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理委員會(huì)批準(zhǔn)

1.2 試藥與儀器

人LNCaP前列腺癌細(xì)胞株購(gòu)自爾頓生物科技（上海）有限公司；淫羊藿素標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自成都瑞芬思生物科技有限公司；C4H10O（乙醚）購(gòu)自洛陽(yáng)昊華化學(xué)試劑有限公司；胎牛血清（FBS）由賽默飛公司提供；RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)基及EDTA購(gòu)自上海冠導(dǎo)生物工程有限公司；磷酸化雄激素受體AR（p-AR）、磷酸化蛋白激酶（p-Akt）、雄激素受體剪接變異體（AR-V7）、降鈣素（Calcitonin）和E-cadherin檢測(cè)用試劑盒由南京森貝伽生物科技有限公司提供。寶特ELX-808IU多功能酶標(biāo)儀，上海拜格生物科技發(fā)展有限公司。

1.3 雄激素依賴型前列腺癌模型制備

將人LNCaP前列腺癌細(xì)胞株速融、解凍，在RPMI-1640培養(yǎng)液中復(fù)蘇，24 h后倒入RPMI-1640培養(yǎng)液培養(yǎng)，3 d后用0.25%EDTA消化，收集培養(yǎng)好的人LNCaP前列腺癌細(xì)胞株并用RPMI-1640培養(yǎng)液調(diào)制成2×107個(gè)/mL的細(xì)胞懸液備用。造模時(shí)參考王金秋［9］的手術(shù)方法，將荷瘤組、LY294002組和淫羊藿素組BALB/c-nu裸鼠移出隔離柜，乙醚吸入麻醉，仰臥位固定小鼠四肢及頭部，碘伏消毒下腹部，從裸鼠髂前上棘正中腹白線切開(kāi)腹部皮膚、鈍性分離裸鼠腹膜、找到膀胱，將膀胱推向尾端、翻轉(zhuǎn)以暴露裸鼠生殖腺，用棉簽將生殖腺向左右腹壁推，暴露左右葉前列腺，裸鼠前列腺與周?chē)M織不同，顏色較周?chē)M織深，呈葉狀肉紅色。用微量注射器抽取50 μL備用的人LNCaP前列腺癌細(xì)胞株，左右葉前列腺腺體各注射25 μL，以前列腺葉包膜向上輕微鼓起為準(zhǔn)。注射完成后還納腹部組織器官，關(guān)閉腹腔、分層依次縫合腹膜、肌層及皮膚，碘伏消毒手術(shù)區(qū)皮膚即可?？瞻讓?duì)照組僅碘伏消毒手術(shù)區(qū)皮膚，不再做其他處理。

1.4 干預(yù)方法

注射造模2周后，淫羊藿素組按80 mg/kg劑量尾靜脈注射淫羊藿素，LY294002組尾靜脈注射P13K/Akt抑制劑LY294002，空白對(duì)照組、荷瘤組尾靜脈注射等體積生理鹽水。以上治療每天1次，共治療4周。

1.5 標(biāo)本采集與檢測(cè)

1.5.1 取材及標(biāo)本制作 于治療結(jié)束后脫臼法處死各組小鼠，仔細(xì)摘取小鼠前列腺，取20 mg前列腺瘤組織，10%甲醛固定，石蠟包埋，用顯微鏡下標(biāo)記，用組織芯片制備儀制備前列腺瘤組織芯片標(biāo)本，然后編號(hào)凍存?zhèn)溆?。另?0 mg組織用4℃PBS沖洗血跡，離心管加700 μL預(yù)冷4℃的PBS液，剪碎前列腺瘤組織，沖打、混勻，放入離心管，重復(fù)3次吸棄PBS液；勻漿10 min，4℃條件12000 r/min離心30 min；棄上層液、取中層液到標(biāo)記好的樣品管中，-80℃低溫凍存?zhèn)溆谩?/p>

1.5.2 Western blotting檢測(cè) 采用Western blotting檢測(cè)p-AR、p-Akt蛋白表達(dá)。取上述凍存?zhèn)溆玫那傲邢倭鼋M織勻漿液，樣品孔加50μg蛋白液進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳，濕轉(zhuǎn)到硝酸纖維膜，用5%脫脂奶粉封閉，加一抗 p-AR、p-Akt和 GAPDH（內(nèi)參），4 ℃孵育過(guò)夜，TBST液洗滌，加二抗搖床孵育60 min（室溫下），然后用TBST液洗滌（7 min），滴加ECL發(fā)光液避光反應(yīng)5 min，然后曝光顯影，以GAPDH為內(nèi)參，Image J軟件分析目標(biāo)條帶的相對(duì)表達(dá)量（光密度值）。

1.5.3 免疫熒光雙重染色 采用免疫熒光雙重染色法（FITC-CY3）檢測(cè)前列腺瘤組織芯片標(biāo)本中E-cadheri、AR-V7和Calctionin陽(yáng)性表達(dá)率。將編號(hào)凍存的前列腺瘤組織芯片標(biāo)本連續(xù)切片（4 μm），58℃烘烤18 h，常規(guī)脫蠟后用PBS液沖洗3遍。檸檬酸緩沖液抗原修復(fù)20 min，室溫冷卻20 min用PBS液沖洗3遍。滴加蛋清（20%）后于室溫下靜置30 min，再用PBS液沖洗3遍。滴加10%正常羊血后于室溫下溫靜置20 min。加鼠E-cadheri、AR-V7和Calctionin一抗混合物，室溫下孵育4 h，用PBS液沖洗3遍，封片，LeicaTCS SP2共聚焦顯微鏡（德國(guó)LEICA公司）下激光掃描，以E-cadherin細(xì)胞核內(nèi)可見(jiàn)紅色熒光為陽(yáng)性表達(dá)，AR-V7和Calctionin以胞核內(nèi)棕黃色顆粒為陽(yáng)性表達(dá)，計(jì)算機(jī)采集數(shù)據(jù)后記錄其陽(yáng)性表達(dá)率。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以（±s）表示，兩組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組p-Akt和p-AR相對(duì)表達(dá)量比較

見(jiàn)表1。荷瘤組前列腺組織p-Akt和p-AR均高表達(dá)，與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。LY294002組和淫羊藿素組前列腺組織p-Akt和p-AR均低表達(dá)，與荷瘤組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。淫羊藿素組與LY294002組組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.2 各組E-cadheri、AR-V7和Calctionin陽(yáng)性率比較

見(jiàn)表2。荷瘤組前列腺組織芯片標(biāo)本中AR-V7和Calctionin陽(yáng)性率明顯升高，E-cadherin陽(yáng)性率明顯降低，與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。淫羊藿素組AR-V7和Calctionin陽(yáng)性率明顯降低，E-cadherin陽(yáng)性率明顯升高，與荷瘤組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。LY294002組和淫羊藿素組組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表1 各組p-AR、p-Akt相對(duì)表達(dá)量比較（±s）

表1 各組p-AR、p-Akt相對(duì)表達(dá)量比較（±s）

與空白對(duì)照組比較，*P＜0.05；與荷瘤組比較，△P＜0.05。下同。

組別 n p-AR p-Akt空白對(duì)照組 40 0.67±0.05 0.90±0.10荷瘤組 40 3.21±0.19* 1.94±0.12*LY294002 組 40 0.43±0.02△ 0.65±0.09△淫羊藿素組 40 0.48±0.05△ 0.69±0.04△

表2 各組 E-cadheri、AR-V7和 Calctionin陽(yáng)性率比較（%，±s）

表2 各組 E-cadheri、AR-V7和 Calctionin陽(yáng)性率比較（%，±s）

組 別 n Calctionin E-cadheri AR-V7空白對(duì)照組 40 31.49±4.07荷瘤組 40 46.31±5.01*LY294002 組 40 30.29±1.92△82.82±7.21 19.41±2.29 22.93±1.96* 32.45±2.15*88.34±7.83△ 18.76±3.20△淫羊藿素組 40 29.76±2.74△86.27±6.75△ 17.02±1.23△

3 討 論

P13K/Akt信號(hào)通路廣泛存在于真核細(xì)胞內(nèi)，作為介導(dǎo)細(xì)胞存活的經(jīng)典信號(hào)通路之一，在機(jī)體生理功能中，對(duì)正常的細(xì)胞生長(zhǎng)、存活起關(guān)鍵作用，并在抑制細(xì)胞凋亡、促進(jìn)細(xì)胞增殖等方面也發(fā)揮重要作用，尤其與前列腺癌、肺癌、結(jié)直腸癌、乳腺癌、肝癌及卵巢癌等的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)［10］。大量研究表明，在基因變異、細(xì)胞缺氧或雄激素受體（AR）表達(dá)增加均可激活PI3K/Akt信號(hào)通路。PI3K/Akt信號(hào)通路被激活后會(huì)促使AR和Akt磷酸化生成p-AR和p-Akt，后者通過(guò)誘導(dǎo)抗凋亡蛋白表達(dá)和磷酸化凋亡調(diào)節(jié)蛋白產(chǎn)生抑制細(xì)胞凋亡作用［11］。近期有研究表明，PI3K/Akt信號(hào)通路通路抑制劑LY294002和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子抑制劑能有效抑制腫瘤血管形成和腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)［12］。AR-V7為AR的剪接變異體之一，在前列腺癌組織中，雄激素通過(guò)激活A(yù)R并使之進(jìn)入胞核來(lái)發(fā)揮生物學(xué)作用，但AR-V7在胞核中并不依賴雄激素，AR-V7處于持續(xù)激活狀態(tài)，因此，AR-V7高表達(dá)常預(yù)示患者復(fù)發(fā)及生存時(shí)間縮短［13］。E-cadherin在前列腺癌發(fā)展中發(fā)揮關(guān)鍵作用，E-cadherin屬于經(jīng)典的鈣黏附蛋白，E-cadherin高表達(dá)可增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞與間質(zhì)細(xì)胞黏附力，抑制腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移［14］。神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞（NE細(xì)胞）存在于正常前列腺組織，NE細(xì)胞可分泌Calctionin，研究發(fā)現(xiàn)，NE細(xì)胞在前列腺癌的進(jìn)展過(guò)程中表現(xiàn)活躍，免疫學(xué)檢測(cè)常見(jiàn)Calctionin分泌增加，Calctionin過(guò)表達(dá)會(huì)促使原發(fā)性前列腺癌發(fā)生去勢(shì)抵抗現(xiàn)象并增加腫瘤浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)［15］。研究表明，蛋白激酶B主要分布于細(xì)胞內(nèi)核、線粒體、微粒體和胞液中，在細(xì)胞存活和凋亡中起重要作用，因激酶被證明是反轉(zhuǎn)錄病毒安基因v-akt的編碼產(chǎn)物，故又稱 Akt［16］。AR為屬性激素受體，作為核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子，在正常情況下與雄激素結(jié)合并激活下游靶基因以維持前列腺干祖細(xì)胞的正常分化［17］。當(dāng)PI3K/Akt信號(hào)通路被激活后會(huì)促使其乙酰化（即p-AR和p-Akt），p-AR可促進(jìn)AR的核轉(zhuǎn)移從而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞分化和轉(zhuǎn)移，而p-Akt轉(zhuǎn)錄活性增強(qiáng)可誘導(dǎo)抗凋亡蛋白表達(dá)和磷酸化凋亡調(diào)節(jié)蛋白產(chǎn)生抑制細(xì)胞凋亡作用。本研究通過(guò)不同方法檢測(cè)前列腺組織p-Akt、p-AR、AR-V7、E-cadherin和Calctionin等指標(biāo)來(lái)分析淫羊藿素對(duì)P13K/Akt信號(hào)通路的影響機(jī)制。在本實(shí)驗(yàn)中，荷瘤組前列腺組織p-Akt和p-AR均高表達(dá)，前列腺瘤組織芯片標(biāo)本中AR-V7和Calctionin陽(yáng)性率明顯降低，E-cadherin陽(yáng)性率明顯升高，與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。這提示前列腺瘤組織PI3K/Akt信號(hào)通路激活，促使AR和Akt磷酸化生成p-Akt和p-AR，后者通過(guò)誘導(dǎo)抗凋亡蛋白表達(dá)和磷酸化凋亡調(diào)節(jié)蛋白產(chǎn)生抑制細(xì)胞凋亡作用。LY294002為PI3K/Akt信號(hào)通路抑制劑，可以阻斷PBK/Akt信號(hào)通路，對(duì)前列腺癌細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移能力有明顯的抑制作用［18］。在本實(shí)驗(yàn)中，與荷瘤組比，淫羊藿素組前列腺組織p-Akt和p-AR低表達(dá)，AR-V7和Calctionin陽(yáng)性率明顯降低，E-cadherin陽(yáng)性率明顯升高。而LY294002組和淫羊藿素組組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。這說(shuō)明淫羊藿素有與LY294002相同的作用，對(duì)PI3K/Akt信號(hào)通路也具有明顯的抑制作用，且作用的靶點(diǎn)與LY294002相同。淫羊藿素可阻止AR和Akt磷酸化生成反應(yīng)，經(jīng)淫羊藿素治療后p-Akt和p-AR均低表達(dá)。在臨床上，AR-V7常作為患者預(yù)后評(píng)估的重要參考信息，其檢出率增高常表明腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移、去勢(shì)抵抗及生存時(shí)間縮短。E-cadherin蛋白屬鈣依賴性黏附蛋白，主要分布在上皮細(xì)胞膜黏附區(qū)，在正常上皮組織上高表達(dá)，主要介導(dǎo)細(xì)胞與基質(zhì)之間的連接，調(diào)控腫瘤細(xì)胞的侵襲及轉(zhuǎn)移［19］。淫羊藿素組E-cadherin陽(yáng)性率提高，這可增加腫瘤細(xì)胞與基質(zhì)之間的黏附力，阻止原發(fā)性腫瘤細(xì)胞脫落而降低其轉(zhuǎn)移。另一方面，淫羊藿素還可抑制AR乙酰化（AR-V7陽(yáng)性率降低）而發(fā)揮抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。淫羊藿素在前列腺癌的進(jìn)展過(guò)程中也發(fā)揮了抑制作用，淫羊藿素可能在一定程度了降低了前列腺組織中神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞（NE細(xì)胞）活性，使Calctionin分泌減少，這也在一定程度了降低了原發(fā)性前列腺癌發(fā)生去勢(shì)抵抗現(xiàn)象和轉(zhuǎn)移的可能。

綜上所述，淫羊藿素具有調(diào)控PI3K/Akt信號(hào)通路的作用，主要通過(guò)調(diào)控p-Akt、p-AR、AR-V7和Calctionin水平而影響前列腺癌LNCaP細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移。在這一過(guò)程中，淫羊藿素可阻止AR和Akt磷酸化生成反應(yīng)來(lái)實(shí)現(xiàn)抑制腫瘤生長(zhǎng)的作用，并通過(guò)提高E-cadherin來(lái)增加腫瘤細(xì)胞與基質(zhì)之間的黏附力，降低Calctionin分泌，從而阻止原發(fā)性腫瘤細(xì)胞脫落而降低其轉(zhuǎn)移［20］。這一實(shí)驗(yàn)結(jié)果也提示PI3K/Akt信號(hào)通路可抑制E-cadherin和pAkt等因子轉(zhuǎn)錄，這為后期開(kāi)發(fā)淫羊藿素應(yīng)用于治療列腺癌提供了一定的理論依據(jù)。

［1］賴新強(qiáng)，黃秀艷，曾耀英，等.淫羊藿素、脫水淫羊藿素對(duì)T淋巴細(xì)胞的比較研究［J］.暨南大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2013，34（3）：353-358.

［2］張淑琴，贠向陽(yáng)，鄭倩，等.淫羊藿素對(duì)3種人腫瘤細(xì)胞增殖抑制作用的比較［J］.中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2015，32（8）：1919-1921.

［3］張黎聲，韓小晶，羅志榮，等.淫羊藿苷對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞遷移作用的影響［J］.中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2017，24（2）：44-48.

［4］王紅麗，劉效栓，沈濤，等.脫水淫羊藿素對(duì)老年大鼠的抗氧化作用［J］.中成藥，2017，39（8）：1698-1700.

［5］張洪英，陳軍寶，盧宏柱，等.PI3K/Akt信號(hào)通路在腫瘤血管形成中的作用研究進(jìn)展［J］.山東醫(yī)藥，2012，52（47）：98-100.

［6］匡小跟，張暉輝，許韓峰.鈣黏蛋白E、橋粒芯糖蛋白 2、磷酸化Akt和轉(zhuǎn)錄因子Snail在侵襲性前列腺癌中的作用［J］.中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2016，26（8）：38-42.

［7］曹愛(ài)嬌，邵瑞，王彧，等.中藥通過(guò)調(diào)節(jié)雄激素受體信號(hào)通路治療前列腺癌的研究進(jìn)展［J］.中國(guó)臨床藥理學(xué)雜志，2017，33（13）：1263-1266.

［8］張溫花，張文超，于遠(yuǎn)東，等.淫羊藿素對(duì)前列腺癌細(xì)胞株活力、遷移與侵襲的作用［J］.中國(guó)病理生理雜志，2017，33（6）：1017-1020.

［9］王金秋，李志，何丹，等.SCID小鼠原位接種LNCaP前列腺癌模型的建立術(shù)［J］.北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，26（5）：19-22.

［10］蘭鳳鳴，岳曉，韓磊.P13K/Akt信號(hào)通過(guò)介導(dǎo)E-catenin通路的活性影響膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)［J］.中華神經(jīng)外科雜志，2012，28（3）：275-278.

［11］Chao X，Zao J，Xiao-Yi G，et al.Blocking of P13K/AKT induces apoptosis by its effect on NF-κB activity in gastric carcinoma cell line SGC7901［J］.Biomed Pharm，2010，64（9）：600-604.

［12］張洪英，陳軍寶，盧宏柱，等.P13K/Akt信號(hào)通路在腫瘤血管形成中的作用研究進(jìn)展［J］.山東醫(yī)藥，2012，52（47）：98-100.

［12］Hornberg E，Ylitalo EB，Crnalic S，et al.Expression of androgen receptor splice variants in prostate cancer bone metastases is associated with castration-resistance and short smwival［J］.PLoS One，2011，6（4）：e19059.

［13］瞿元元，葉定偉，戴波，等.前列腺癌組織中雄激素受體剪接變異體7的表達(dá)對(duì)轉(zhuǎn)移性前列腺癌患者總生存的影響［J］.中華外科雜志，2014，52（8）：622-626.

［14］楊春華，劉寧，曹航，等.特異性核基質(zhì)結(jié)合區(qū)結(jié)合蛋白1與E-鈣黏蛋白、波形蛋白在前列腺癌組織的表達(dá)及相關(guān)性［J］.中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2015，32（12）：2950-2952.

［15］王霞，章明放，張玉潔，等.鈣黏附蛋白及Calctionin在前列腺癌組織中的表達(dá)及意義［J］.山東醫(yī)藥，2010，50（43）：34-36.

［16］Dehm SM，Tindall DJ.Molecular regulation of androgen action in prostate cancer［J］.J Cell Biochem，2006，99（2）：333-344.

［17］Shiota M，Yokomizo A，Masubuchi D，et al.Tip60 promotes prostate cancer cell proliferation by translocation of androgen receptor intothe nucleus［J］.Prostate，2010，70（5）：540-554.

［18］方芳，趙臣，郝峰，等.CD147對(duì)前列腺癌細(xì)胞雄激素受體磷酸化的影響及其作用機(jī)制［J］.山東醫(yī)藥，2017，57（28）：9-11.

［19］Nisha Bansal MD，Vimala Yendluri MD，Robert M，et al.MD，MS The Molecular Biology of Endometrial Cancers and the Implications for Pathogenesis，Classification［J］.Targeted Therapies January，2009，16（1）：58-63.

［20］李釗，王雄彪.淫羊藿甙的研究進(jìn)展［J］.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2015，4（8）：908-910.