干建偉 錢廣生△ 胡 敏 韋 婷

［1.四川大學(xué)華西藥學(xué)院，四川 成都 610000；2.華潤三九（雅安）藥業(yè)有限公司，四川 雅安625000］

參麥注射液是由紅參和麥冬兩味藥材提取而成［1］，其中不同外觀性狀的麥冬藥材會直接影響參麥注射液的質(zhì)量。本文研究的麥冬藥材選用百合科植物麥冬Ophiopogon japonicus（L.f） Ker-Gawl的干燥塊根，主產(chǎn)于四川，習(xí)稱川麥冬。麥冬始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，具有養(yǎng)陰生津，潤肺清心之功效［2］，主要含有麥冬多糖、黃酮類、皂苷類、揮發(fā)油類、蛋白質(zhì)、氨基酸、微量元素等有效成分，其中麥冬多糖、總皂苷、總黃酮的含量與采收期有較大的相關(guān)性［3-6］。麥冬主要為川麥冬和浙麥冬，其中的化學(xué)成分有較顯著差異，主要通過指紋圖譜、皂苷、黃酮類成分評價麥冬質(zhì)量，與相關(guān)制劑的關(guān)聯(lián)分析較少［7-14］。麥冬由于栽種、炮制、儲存等問題，主要出現(xiàn)紅銹、泛油的問題［15-16］，該類麥冬在市場中混雜在符合規(guī)定的麥冬中出現(xiàn)，可能對參麥注射液的質(zhì)量產(chǎn)生影響。由于不同廠家購買的麥冬品質(zhì)不同，因此導(dǎo)致產(chǎn)品中糖含量的差異［17］。本研究主要是通過醇溶性浸出物、果糖等指標(biāo)研究正常麥冬、紅銹麥冬、泛油麥冬質(zhì)量差異，進(jìn)而明確參麥注射液用麥冬藥材的醇溶性浸出物控制范圍。

1 儀器與試藥

1.1 藥材

麥冬，購于雅安三九中藥材科技產(chǎn)業(yè)化公司麥冬GAP 種植基地，共 6 批（批號：130401、130402、130403、130404、130405、130406），按照 2015 年版《中華人民共和國藥典（一部）》麥冬質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢測均符合規(guī)定，以上藥材經(jīng)四川大學(xué)華西藥學(xué)院錢廣生教授鑒定，其中批號為 130401、130402、130403、130404 的麥冬為性狀正常麥冬，批號為130405的麥冬為紅銹麥冬，批號為130406的麥冬為泛油麥冬。

1.2 試劑及儀器

果糖對照品購自中國食品藥品檢定研究院（批號：100231-200904）；魯斯可皂苷對照品購自中國食品藥品檢定研究院（批號：111909-201204）。電子天平（德國賽多利斯）；水浴鍋；乙醇為AR級。

2 方 法

2.1 醇溶性浸出物測定［2］

將麥冬（批號：130401、130402、 130403、130404、130405、130406）按照 2015 年版《中國藥典（四部）》通則2201項下醇溶性浸出物測定法測定，用乙醇作溶劑，即得。

2.2 果糖含量測定

2.2.1 供試品溶液制備 取麥冬藥材（批號：130401）低溫烘干（40℃），打粉后，過6號篩。取麥冬粉末約0.35 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50 mL純化水，密塞，稱定質(zhì)量，超聲提取15 min，取出冷卻后用水補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，過濾取續(xù)濾液，作為供試品溶液。其他批次麥冬（批號：130402、130403、130404、130405、130406）按照同法制備，即得。

2.2.2 對照品溶液制備 精密稱取果糖對照品適量，加5%甲醇溶解，配成約0.5 mg/mL的對照品溶液，即得。

2.2.3 色譜條件 色譜柱：Prevail Carbohydrate ES（250 mm×4.6 mm，5 μm）。 流動相：水∶乙腈=25∶75。流速：1 mL/min。柱溫：35℃。檢測器：蒸發(fā)光散射檢測器（Alltech ELSD 2000ES），分流模式，漂移管溫度：50 ℃，氮氣流速：1.5 L/min。理論板數(shù)按果糖峰計算不得低于5000。

2.2.4 精密度試驗 見表1。取“2.2.2”項下果糖對照品溶液，連續(xù)6次進(jìn)樣，分別為10 μL。計算果糖峰面積的RSD%值，結(jié)果儀器精密度良好。

表1 精密度試驗結(jié)果（n=6）

2.2.5 重復(fù)性試驗 見表2。精密稱取麥冬粉末6份，每份0.35 g，依法提取，作供試品溶液。分別用高效液相色譜儀檢測，麥冬果糖提取穩(wěn)定，重復(fù)性好。

表2 麥冬藥材果糖含量（n=6）

2.2.6 穩(wěn)定性試驗 見表3。精密稱取麥冬藥粉0.3792 g，依法制備成供試品溶液，分別在 0、4、8、16、24、36、48 h進(jìn)樣測定果糖的含量，樣品中果糖含量在48 h內(nèi)穩(wěn)定。

表3 樣品穩(wěn)定性試驗結(jié)果

2.2.7 線性關(guān)系考察 分別精密吸取“2.2.2”項下果糖對照品溶液 1、2、4、8、16、24、32 μL 依次進(jìn)樣， 測定峰果糖面積。再分別以果糖峰面積-果糖進(jìn)樣量取對數(shù)做圖，回歸線性見圖1，線性方程為y＝1.408734x+5.171397，R＝0.9998（y：面積取對數(shù) lgA；x：濃度取對數(shù)lgC），果糖進(jìn)樣量在 0.35585～8.5404 μg 時，雙對數(shù)呈良好的線性關(guān)系。

圖1 lgC-lgA線性回歸方程圖

2.2.8 加樣回收率試驗 見表4。精密稱取麥冬粉末350 mg，供6份，每份加入果糖對照品27.53 mg，按方法提取，檢測并計算回收率為112%，RSD%達(dá)1.50，回收率穩(wěn)定。

表4 麥冬果糖加樣回收率試驗

2.3 水溶性浸出物測定［2］取麥冬（批號：130401、130402、130403、130404、130405、130406）按照 2015 年版《中國藥典（四部）》通則2201項下水溶性浸出物測定法中的熱浸法測定，即得。

2.4 魯斯可皂苷元測定［2］

2.4.1 對照品溶液制備 取魯斯可皂苷元對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含50 μg的溶液，即得。

2.4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 精密量取對照品溶液0.5、1、2、3、4、5、6 mL，分別置具塞試管中，于水浴中揮干溶劑，精密加入高氯酸10 mL，搖勻，于熱水中保溫15 min，取出，冰水冷卻，以相應(yīng)的試劑為空白，照紫外-可見分光光度法（《中國藥典》2015年版）測定，在397 nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.4.3 含量測定 取2.2.1項下麥冬（批號：130401、130402、130403、130404、130405、130406） 細(xì)粉約 3 g， 精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定質(zhì)量，加熱回流2 h，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25 mL，回收溶劑至干，殘渣加水10 mL使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取5次，每次10 mL，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次5 mL，棄去氨液，正丁醇液蒸干。殘渣用80%甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至50 mL量瓶中，加80%甲醇至刻度，搖勻。精密量取供試品溶液2～5 mL，置10 mL具塞試管中，照“2.4.2”項下的方法，自“于水浴中揮干溶劑”起，依法測定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中魯斯可皂苷元的量，計算，即得。

3 結(jié)果與分析

3.1 果糖標(biāo)準(zhǔn)曲線

見圖2。分別精密吸取2.2.2項下果糖對照品溶液2、5、8、10 μL，注入液相色譜儀，以果糖峰面積-果糖進(jìn)樣量取對數(shù)做圖，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，其中R2=0.999相關(guān)性較好。

圖2 果糖標(biāo)準(zhǔn)曲線

3.2 魯斯可皂苷元標(biāo)準(zhǔn)曲線

見圖3。精密量取2.4.1項下對照品溶液0.5、1、2、3、4、5、6 mL， 按照 2.4.2 項下制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，R2=0.999相關(guān)性較好。

圖3 魯斯可皂苷元標(biāo)準(zhǔn)曲線

3.3 測定結(jié)果

不同麥冬藥材（批號：130401、130402、130403、130404、130405、130406）按照醇溶性浸出物、水溶性浸出物、魯斯可皂苷、果糖檢測方法測定含量，見表5。

表5 不同麥冬浸出物、魯斯可皂苷及果糖含量

3.4 結(jié)果

3.4.1 麥冬原料中，水溶性浸出物按照T檢驗，P＞0.05，無顯著差異，采用中國藥典標(biāo)準(zhǔn)檢測水溶性浸出物不能區(qū)別不同麥冬原料品質(zhì)差異。通過對比，區(qū)別正常麥冬與紅銹麥冬、泛油麥冬，可通過醇溶性浸出物、魯斯可皂苷元及果糖含量的差異來判斷。

3.4.2 紅銹麥冬醇溶性浸出物與正常麥冬醇溶性浸出物基本無差異，只是略微偏高，但果糖含量明顯升高。泛油麥冬醇溶性浸出物、魯斯可皂苷、果糖含量均顯著高于正常麥冬。分析認(rèn)為主要是麥冬在較高水分時，通過堆置或密閉導(dǎo)致自發(fā)熱，淀粉等有機(jī)物降解轉(zhuǎn)化導(dǎo)致指標(biāo)差異。

4 討 論

雖然參麥注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中沒有麥冬的含量檢測，現(xiàn)有指紋圖譜中也未體現(xiàn)麥冬藥材的色譜峰，但通過對麥冬藥材的醇溶性浸出物、魯斯可皂苷元、果糖的數(shù)據(jù)分析，針對參麥注射液質(zhì)量而言，麥冬原料各指標(biāo)應(yīng)建立內(nèi)控質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，指標(biāo)范圍應(yīng)控制在正常麥冬檢測范圍內(nèi)。

參麥注射液用麥冬藥材應(yīng)選用性狀符合要求的原料，避免類似紅銹類的麥冬原料大量混入，雖然紅銹麥冬醇溶性浸出物在正常麥冬范圍內(nèi)，但是從顏色、魯斯可皂苷元來說是顯著異常的，給產(chǎn)品質(zhì)量帶來較高的安全風(fēng)險。

建議麥冬藥材增加醇溶性浸出物的檢測項目，加強(qiáng)對麥冬藥材的質(zhì)量控制，同時進(jìn)一步研究不同采收期麥冬藥材的醇溶性浸出物，以便有效獲得需要的控制范圍。

企業(yè)應(yīng)根據(jù)具體品種的具體要求制定適用的中藥材進(jìn)廠內(nèi)控檢驗標(biāo)準(zhǔn)，避免劣質(zhì)藥材進(jìn)入生產(chǎn)環(huán)節(jié)。

［1］國家食品藥品監(jiān)督管理總局.國家藥品標(biāo)準(zhǔn)·參麥注射液［S］.WS3-B-3428-98-2010.

［2］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（四部）［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015.

［3］王遠(yuǎn)，秦民堅，戚進(jìn)，等.不同采收期及加工條件對川麥冬多糖含量的影響［J］.現(xiàn)代中藥研究與實踐，2009，23（2）：3-6.

［4］姜國志，孫勝斌，劉鐵軍，等.參麥注射液用麥冬藥材不同采收期的研究［J］.現(xiàn)代中藥研究與實踐，2013，27（6）：24-27.

［5］蔣暢，王遠(yuǎn)，秦民堅，等.不同采收期及加工條件對川麥冬總黃酮和總皂苷含量的影響［J］.中國中藥雜質(zhì)，2010，35（7）：821-823.

［6］徐建中，李振豐，俞旭平，等.浙麥冬不同生長周期及不同采收期研究［J］.中國現(xiàn)代中藥，2014，16（6）：466-472.

［7］蔣慧蓮.麥冬特征性成分及其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［D］.杭州：浙江中醫(yī)藥大學(xué)，2013.

［8］王永毅.參麥注射液組方藥材浙麥冬的質(zhì)量控制方法研究［D］.杭州：浙江大學(xué)，2012.

［9］王玉霞.麥冬藥材質(zhì)量評價及道地性初步研究［D］.北京：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院，2014.

［10］李正，陳勇，馬臨科，等.浙麥冬質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定及探討［J］.中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2016，33（6）：795-799.

［11］王進(jìn)，劉漢清，劉霖，等.HPLC定量指紋圖譜法評價川麥冬質(zhì)量研究［J］.中藥材，2013，36（5）：721-725.

［12］金虹，王化東，何禮，等.川麥冬及其須根組織學(xué)與麥冬皂苷量的對比研究［J］.中草藥，2014，45（7）：1002-1005.

［13］吳發(fā)明，楊瑞山，李敏，等.麥冬主流品種藥材質(zhì)量對比研究［J］.中國藥學(xué)雜志，2017，52（6）：447-451.

［14］吳發(fā)明，楊海燕，楊瑞山，等.四川麥冬質(zhì)量評價研究［J］.中藥材，2016，39（8）：1803-1808.

［15］李敬安.貯藏與加工對麥冬品質(zhì)影響的實驗研究［D］.成都：西南交通大學(xué)，2009-5-16.

［16］雷飛益，馬留輝，吳海軍，等.干燥方法對川麥冬藥材品質(zhì)的影響［J］.中藥材，2017，40（5）：1078-1083.

［17］許妍，吳毅，趙雯，等.參麥注射液中糖類成分含量測定研究［J］.齊魯藥事，2011，30（11）：636-638.