郝芯緲段亞南魏來(lái)李杰李彥東劉志平

(1.東北林業(yè)大學(xué)野生動(dòng)物資源學(xué)院，哈爾濱，150040；2.哈爾濱華隆藍(lán)狐育種有限公司，哈爾濱，150129；3.陜西佛坪國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)管理局，佛坪，723400；4.東北林業(yè)大學(xué)醫(yī)院，哈爾濱，150040)

藍(lán)狐(Alopexlagopus)發(fā)情期陰道細(xì)菌感染為養(yǎng)狐場(chǎng)常見(jiàn)疾病，多表現(xiàn)為外陰可見(jiàn)膿狀分泌物。其預(yù)防與治療多憑經(jīng)驗(yàn)使用抗生素，因沒(méi)有針對(duì)性，同時(shí)長(zhǎng)期、濫用抗菌藥物宜造成細(xì)菌對(duì)許多藥物產(chǎn)生耐藥性，所以效果往往不佳。綠膿桿菌、大腸桿菌、沙門(mén)氏菌及陰道加德納氏菌等均可引起藍(lán)狐繁殖障礙，且往往一種細(xì)菌感染后，造成機(jī)體免疫力降低，從而促使其他細(xì)菌繼發(fā)感染，表現(xiàn)出復(fù)雜的臨床癥狀，帶來(lái)嚴(yán)重的危害和損失[1]。

常規(guī)診斷、治療多采用分離致病菌后再做藥敏試驗(yàn)的方法，如此耗時(shí)較長(zhǎng)，往往耽誤治療。本次研究旨在應(yīng)用快速藥敏試驗(yàn)減少細(xì)菌耐藥性分析所需的時(shí)間，準(zhǔn)確篩選出有針對(duì)性的藥物，為藍(lán)狐陰道細(xì)菌性疾病的早期治療提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病料

試驗(yàn)用藍(lán)狐陰道分泌物20份，分別來(lái)自哈爾濱市某養(yǎng)狐場(chǎng)20只母狐，于2017年4月5～7日無(wú)菌采集。20份樣本顏色不一，包括綠色、紅色、黃色及白色，形態(tài)有膿狀、膠凍狀。對(duì)樣本分別編號(hào)，裝入EP管，置于-20℃冰箱內(nèi)冷凍保存。

1.1.2 藥敏紙片

共12種，包括氨芐西林、青霉素、亞胺培南、頭孢他啶、頭孢西丁、氯霉素、四環(huán)素、氧氟沙星、頭孢呋辛、阿奇霉素、恩諾沙星、多粘菌素B。均購(gòu)自北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司。

1.1.3 培養(yǎng)基、試劑

普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基購(gòu)自青島海博生物科技有限公司、生理鹽水由實(shí)驗(yàn)室自行配制。

1.2 方法

藥敏試驗(yàn)采用紙片擴(kuò)散法[2]。在20份樣品中分別加入少量滅菌生理鹽水充分稀釋?zhuān)魅? μL稀釋液到新的EP管中，混勻后取50 μL均勻涂布于直徑90 mm的普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，待自然干燥后，用無(wú)菌鑷子將各藥敏紙片貼在培養(yǎng)基表面，每個(gè)平板均勻分布貼6張，置37℃恒溫培養(yǎng)24 h后，分別測(cè)定各抑菌圈直徑，以抑菌圈直徑的大小判定細(xì)菌對(duì)藥物的敏感度。

2 結(jié)果

2.1 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

所檢測(cè)的12種抗生素中，細(xì)菌對(duì)亞胺培南敏感性最高，無(wú)耐藥菌株產(chǎn)生，抑菌圈直徑為26 mm；對(duì)頭孢西丁和頭孢呋辛有一定敏感性，抑菌圈直徑分別為8 mm和12 mm；對(duì)氨芐西林、青霉素、頭孢他啶、氯霉素、四環(huán)素、氧氟沙星、阿奇霉素、恩諾沙星和多粘菌素B具有較強(qiáng)的耐藥性，耐藥率為100%，表現(xiàn)為0抑菌圈(表1)。

表1 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

Tab.1 Results of antibiotics susceptibility test

2.2 治療結(jié)果

根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果，使用敏感性最高的藥物亞胺培南對(duì)20只陰道分泌物異常的母狐進(jìn)行治療，1 g/只·d，靜脈滴注。1周后，20只母狐陰道分泌物均明顯減少或消失，且再無(wú)癥狀出現(xiàn)(圖1～4)。

圖1 治療前Fig.1 Before the treatment

圖2 治療前Fig.2 Before the treatment

圖3 治療后Fig.3 After the treatment

圖4 治療后Fig.4 After the treatment

3 討論

隨著藍(lán)狐規(guī)?；B(yǎng)殖業(yè)的不斷擴(kuò)大和人工授精技術(shù)的廣泛應(yīng)用，母狐發(fā)情期生殖系統(tǒng)細(xì)菌性疾病頻頻發(fā)生，現(xiàn)已成為影響母狐繁殖率的重要因素。Gierloff 和Lefmann在1976年首次報(bào)道丹麥養(yǎng)狐場(chǎng)發(fā)生的綠膿桿菌引起母狐化膿性子宮內(nèi)膜炎[3]。高玉蘭等[4]、尹燕博等[5]、蘇振渝等[6]也相繼證實(shí)了母狐人工授精的二次污染可引起綠膿桿菌感染。1987年，嚴(yán)忠誠(chéng)等[7]從我國(guó)進(jìn)口狐的流產(chǎn)胎兒及其流產(chǎn)狐的陰道分泌物中分離到陰道加德納氏菌共145株，感染率0.9%～21.9%。于國(guó)內(nèi)外首次揭示，該菌是引起母狐空懷和流產(chǎn)的重要原因之一。除此之外，大腸桿菌、沙門(mén)氏菌、鏈球菌和葡萄球菌等均可引起母狐發(fā)生空懷、死胎和流產(chǎn)。以上多種細(xì)菌性疾病的發(fā)生日益頻繁、越來(lái)越普遍，尤其是以綠膿桿菌感染為主的混合感染，已成為影響藍(lán)狐養(yǎng)殖疫病的主要原因之一，嚴(yán)重地威脅到藍(lán)狐養(yǎng)殖業(yè)的持續(xù)發(fā)展。

近年來(lái)，大量研究報(bào)道表明，隨著多重耐藥菌在世界范圍內(nèi)的散播，細(xì)菌耐藥日趨嚴(yán)重，準(zhǔn)確且快速的抗菌藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果對(duì)于指導(dǎo)治療臨床各種類(lèi)型細(xì)菌感染顯得更加重要[8]。常規(guī)方法需將病料接種于培養(yǎng)基分離培養(yǎng)后進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，而本研究所采用的直接藥敏試驗(yàn)省去繁瑣的步驟，方便易操作，臨床適用性強(qiáng)，可提前2 d報(bào)告結(jié)果。通過(guò)亞胺培南的臨床應(yīng)用，表現(xiàn)出較好的治療效果，有效地控制了疫情的發(fā)生。當(dāng)母狐陰道分泌物異常或增多時(shí)，通過(guò)該方法一次性篩選出對(duì)混合細(xì)菌都敏感的兩種或兩種以上的藥物，為臨床治療提供有效的依據(jù)，對(duì)及早制定正確的治療方案具有重要意義。