新輔助化療（neoadjuvant chemotherapy，NAC）已成為非早期乳腺癌的重要治療方法［1］。研究顯示，乳腺癌新輔助化療獲得病理完全緩解（pathologic complete response，pCR）對于化療藥物敏感性及患者預后具有重要的提示作用［2］。人表皮生長因子受體-2（human epidermal growth factor receptor-2，HER-2）基因定位于人染色體17q21，在正常乳腺組織中通常為陰性或微量表達，但在部分乳腺癌組織中卻過量表達，與不良預后相關。研究顯示，HER-2基因拷貝數(shù)的增加主要通過染色體基因片段優(yōu)勢復制和染色體非整體數(shù)目變化［3］。17號染色體多體性為17號染色體著絲粒（chromosome 17 centromere，CEP17）探針信號數(shù)目增加，是乳腺癌中常見遺傳變異［4］，影響HER-2基因擴增的判讀，導致HER-2基因擴增假陽性的增加［5］。既往研究顯示，乳腺癌新輔助化療療效中HER-2/CEP17信號比對于HER-2基因擴增可能具有提示作用［6-7］，但其與新輔助化療療效相關性尚無定論。本研究將HER-2/CEP17信號比作為分子生物學指標，評價其與乳腺癌新輔助化療后病理完全緩解的相關性和預測作用。

1 材料與方法

1.1 病例資料

回顧性分析中山大學孫逸仙紀念醫(yī)院2013年1月至2017年12月635例浸潤性乳腺癌新輔助化療患者的臨床資料，均為女性。根據(jù)患者新輔助化療后手術病理標本，分為病理完全緩解（pCR）組117例和非pCR組518例。入組標準：初發(fā)診斷臨床分期為ⅡB～Ⅲ期浸潤性乳腺癌，年齡18～69歲，就診前未行化療、放療及內分泌治療等。排除標準：發(fā)生遠處轉移者，合并嚴重全身疾病或其他部位惡性腫瘤者，雙側乳腺癌、妊娠或哺乳期乳腺癌及HER-2基因的免疫組織化學檢測結果與FISH檢測結果不相符者。

1.2 方法

化療方案劑量及療程均依據(jù)NCCN乳腺癌臨床實踐指南（2012～2017年）?；熀笕橄僭l(fā)病灶臨床緩解的評價標準，依據(jù)實體腫瘤療效評估標準1.1版（RECIST 1.1）［8］。pCR定義為原發(fā)病灶及區(qū)域淋巴結經(jīng)術后病理檢查均無浸潤性癌細胞殘留，但原發(fā)病灶可殘留原位癌細胞。免疫組織化學法檢測結果：ER、PR陽性細胞表達≥1%為陽性，陽性細胞表達＜1%為陰性；Ki-67陽性細胞≥20%為高表達，陽性細胞＜20%為低表達；TOPOⅡα和P53陽性細胞表達≥10%為陽性，陽性細胞表達＜10%為陰性；HER-2染色0/+為陰性，++為不確定，+++為陽性。FISH雙探針法采用PathVysionTM HER-2探針檢測試劑盒（美國雅培公司）檢測，其結果判定依據(jù)ASCO/CAP乳腺癌HER-2檢測指南（2013年）［9］，對40個細胞核內的HER-2信號（紅色）和CEP17信號（綠色）的總數(shù)分別計數(shù)，再計算HER-2/CEP17信號比，判定FISH檢測結果，對于不確定者需重新計數(shù)。依據(jù)ASCO/CAP乳腺癌HER-2檢測指南（2013年）和既往研究［6］結果，對HER-2/CEP17信號比與pCR率相關性進行進一步亞組分析。

1.3 統(tǒng)計學分析

采用SPSS 24.0軟件進行統(tǒng)計學分析。計數(shù)資料采用表示，采用t檢驗；計量資料采用χ2檢驗或Fisher確切概率法。通過單因素和多因素Logistic回歸模型篩選出pCR的獨立預測因子，采用Spearman秩相關檢驗分析不同HER-2/CEP17信號比與pCR率相關性。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 臨床病理學特征

635例行新輔助化療前浸潤性乳腺癌患者中，臨床分期ⅡB期為374例、ⅢA期為183例、ⅢB期為53例、ⅢC期為25例。經(jīng)新輔助化療后pCR率為18.4%（117/635），而未獲得 pCR 率為 81.6%（518/635）。pCR組的平均年齡為（46.68±9.50）歲，非pCR組為（47.47±10.07）歲，兩組比較差異無統(tǒng)計學意義（P=0.438）。pCR組的體質量指數(shù)為（23.04±2.97）kg/m2，非pCR組為（23.40±3.51）kg/m2，兩組比較差異無統(tǒng)計學意義（P=0.305）。依據(jù)HER-2基因拷貝數(shù)及HER-2/CEP17信號比判定FISH檢測結果，HER-2基因拷貝數(shù)≥6為231例，拷貝數(shù)＜6為404例；HER-2/CEP17信號比≥2為241例，信號比＜2為394例（圖1）。

圖1 HER-2雙探針FISH檢測浸潤性乳腺癌患者結果

2.2 新輔助化療獲得病理完全緩解的預測因子

單因素分析結果顯示，T分期、臨床分期、ER、PR、HER-2、Ki-67表達、分子分型、靶向治療、HER-2基因拷貝數(shù)及HER-2/CEP17信號比與獲得pCR顯著相關（P＜0.1，表1）。多因素Logistic回歸分析結果顯示，T分期（OR為0.500，95%CI為0.350～0.712，P＜0.001），Ki-67表達（OR為3.461，95%CI為1.891～6.333，P＜0.001），分子分型（OR為1.458，95%CI為1.188～1.791，P＜0.001，），HER-2基因拷貝數(shù)（OR為6.173，95%CI為2.110～17.857，P=0.001）及HER-2/CEP17信 號 比（OR 為 9.076，95%CI為 3.142～26.215，P＜0.001）為新輔助化療后pCR的獨立預測因子（表2）。

2.3 新輔助化療聯(lián)合與未聯(lián)合曲妥珠單抗靶向治療后病理完全緩解的預測因子比較

新輔助化療聯(lián)合曲妥珠單抗靶向治療患者共134例，其中獲得pCR者為34例、未獲得pCR者為100例。多因素Logistic回歸分析結果顯示，臨床分期（OR為0.433，95%CI為 0.186～1.009，P=0.052）和 HER-2/CEP17信號比（OR為4.925，95%CI為1.595～15.205，P=0.006）為新輔助化療聯(lián)合靶向治療后pCR的獨立預測因子（表3）。未聯(lián)合曲妥珠單抗靶向治療患者共501例，其中獲得pCR者為83例、未獲得pCR者為418例。多因素Logistic回歸分析結果顯示，T分期（OR為0.338，95%CI為0.223～0.675，P=0.001），Ki-67表達（OR為3.257，95%CI為1.587～6.686，P=0.001），TOPOⅡα表達（OR為1.509，95%CI為1.055～2.159，P=0.024），分子分型（OR為1.444，95%CI為1.169～1.784，P=0.001），HER-2/CEP17信號比（OR為1.718，95%CI為1.005～2.939，P=0.048）為新輔助化療未聯(lián)合靶向治療后pCR的獨立預測因子（表4）。

表1 635例乳腺癌患者新輔助化療獲得病理完全緩解預測因子的單因素分析

表1 635例乳腺癌患者新輔助化療后病理完全緩解預測因子的單因素分析（續(xù)表1）

表2 乳腺癌患者新輔助化療后病理完全緩解預測因子的多因素Logistic回歸分析

表3 新輔助化療聯(lián)合曲妥珠單抗靶向治療后病理完全緩解預測因子的多因素Logistic回歸分析

表4 新輔助化療未聯(lián)合曲妥珠單抗靶向治療后病理完全緩解預測因子的多因素Logistic回歸分析

2.4 HER-2/CEP17信號比與新輔助化療后病理完全緩解的相關性

HER-2/CEP17信號比＜2患者獲得pCR率為13.2%（52/394），HER-2/CEP17信號比為2～6患者獲得pCR率為22.0%（18/82），HER-2/CEP17信號比＞6患者獲得pCR率29.6%（47/159），三者比較差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.001）。Spearman秩相關性分析顯示，新輔助化療后pCR率與HER-2/CEP17信號比具有相關性（r=0.235，P＜0.001）。

3 討論

既往研究顯示，臨床病理指標，腫瘤生物學指標及循環(huán)生物學指標都可能作為乳腺癌新輔助化療療效的預測指標［10-11］。然而這些預測指標對于乳腺癌新輔助化療療效預測較為局限。因此尋找更多有效的分子生物學指標對于制定個體化治療方案和提供精準治療具有重要的臨床意義。本研究表明，乳腺癌的新輔助化療療效與腫瘤大小，Ki-67及分子分型相關，這與之前的學者研究結果基本相同［12-14］。本研究顯示，乳腺癌患者的新輔助化療、新輔助化療聯(lián)合靶向治療與未聯(lián)合靶向治療中HER-2/CEP17信號比均為病理完全緩解的獨立預測因子，提示高HER-2/CEP17信號比的乳腺癌不僅對于化療聯(lián)合靶向治療敏感，同時對于單純化療也較敏感，并且pCR率與HER-2/CEP17信號比具有相關性。既往研究也證實，HER-2/CEP17信號比為新輔助化療聯(lián)合曲妥珠單抗靶向治療獲得pCR的預測因子［6-7］。一項預測模型顯示，HER-2/CEP17信號比為HER-2陽性乳腺癌新輔助化療獲得pCR的預測指標［15］。盡管NCCN乳腺癌臨床實踐指南（2017年）推薦，對于HER-2陽性乳腺癌應行新輔助化療聯(lián)合靶向治療。但在我國因經(jīng)濟水平等多方面因素影響，部分HER-2陽性乳腺癌患者并未選擇聯(lián)合曲妥珠單抗的新輔助治療方案。本研究顯示，高HER-2/CEP17信號比對于新輔助化療未聯(lián)合靶向治療的患者也具有良好的敏感性和預測效果。因此FISH雙探針檢測HER-2/CEP17信號比作為預測乳腺癌新輔助化療的預測因子具有較好的準確性和較大的價值。

綜上所述，乳腺癌新輔助化療療效的預測是一個復雜并且涉及多種因素的過程。本研究為單中心回顧性的病例對照研究，存在一定的局限性，需要大樣本多中心前瞻性研究進一步驗證，并且因納入標本的組織學分級、TOPOⅡα及P53表達等因素不完全或部分缺失，可能在一定程度上影響結果的準確性。HER-2/CEP17信號比與乳腺癌新輔助化療后病理完全緩解具有相關性，是其獲得病理完全緩解的獨立預測因子。