徐偉娜，劉葵葵，顏 紅，劉 林，楊清華

（山東省藥學(xué)科學(xué)院 山東省化學(xué)藥物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 濟(jì)南250101）

爐甘石為臨床常用的外用藥，其主要成分為碳酸鋅及少量的氧化鈣、氧化鎂、氧化鐵等。爐甘石最常見(jiàn)的劑型為洗劑，是《中國(guó)醫(yī)院制劑規(guī)范》收載的品種，已有長(zhǎng)時(shí)間的臨床應(yīng)用，在治療皮膚瘙癢、潰瘍和紅腫方面有良好的效果[1-3]。但爐甘石洗劑由于含藥粉末較多，放置易出現(xiàn)沉淀、結(jié)塊、不易搖勻等現(xiàn)象，影響藥物分劑量的準(zhǔn)確性和臨床療效。為此可將其制成凝膠或乳膏，使其具備穩(wěn)定性良好，易于涂布，方便攜帶等優(yōu)點(diǎn)。苯酚是爐甘石乳膏中重要的成分之一，可起到抑菌、殺菌、止癢作用。迄今為止，爐甘石乳膏中苯酚的含量測(cè)定未見(jiàn)報(bào)道。本文研究爐甘石乳膏中苯酚的提取方法，建立高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定爐甘石乳膏中苯酚的含量。測(cè)定了3批自制樣品中苯酚的含量，并與原研產(chǎn)品含量進(jìn)行比較。該方法簡(jiǎn)單、方便，準(zhǔn)確性高，可為爐甘石乳膏中苯酚的含量測(cè)定提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津高效液相色譜儀（日本島津）；BT125D電子天平（Sartorius）；臺(tái)式離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；KQ200B型超聲波清洗器（昆山超聲儀器公司）。

1.2 試藥

苯酚對(duì)照品（國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心，批號(hào)A1705109）；甲醇（國(guó)藥集團(tuán)）；爐甘石乳膏原研產(chǎn)品（批號(hào)：1L，The Boots Company PLC Nottingham）；爐甘石乳膏（自制，批號(hào)171101，171102，171103）；爐甘石乳膏陰性對(duì)照（自制，不含苯酚）；水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

采用Agilent XDB C18（250 mm × 4.6 mm，5 μm）色譜柱，以甲醇-水（40:60）為流動(dòng)相，流速1.0 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)271 nm，柱溫30 ℃，進(jìn)樣體積50 μl。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 取苯酚對(duì)照品20 mg，精密稱定，置入100 ml量瓶，甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，作為貯備液；精密移取貯備液2.5 ml至100 ml量瓶，流動(dòng)相定容至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品約0.5 g，精密稱定，置入具塞錐形瓶，精密加入流動(dòng)相 40 ml，超聲5 min，至軟膏在溶液中分散均勻。3000 r/min離心5 min，取上清，0.45 μm濾膜過(guò)濾，精密量取續(xù)濾液2 ml至10 ml量瓶，流動(dòng)相定容至刻度，搖勻。

2.2.3 陰性對(duì)照液的制備 取爐甘石乳膏陰性對(duì)照約0.5 g，精密稱定，按2.2.2項(xiàng)方法操作，制備陰性對(duì)照液。

2.3 方法學(xué)試驗(yàn)

2.3.1 專屬性試驗(yàn) 分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照液各50 μl，注入液相色譜儀，結(jié)果見(jiàn)圖1～3。結(jié)果表明，基質(zhì)峰與溶劑均不干擾苯酚的測(cè)定。

圖1 對(duì)照品溶液HPLC圖譜

圖2 供試品溶液HPLC圖譜

圖3 陰性對(duì)照溶液HPLC圖譜

2.3.2 檢測(cè)限和定量限 精密稱取苯酚適量，甲醇溶解，加流動(dòng)相定量稀釋成不同倍數(shù)的系列溶液，按2.1項(xiàng)色譜條件測(cè)定。測(cè)得苯酚的定量限為3.12 ng（S/N≈10），檢測(cè)限為0.94 ng（S/N≈3）。

2.3.3 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液和供試品溶液分別于0，2，4，6，8，12，18，24 h進(jìn)樣，考察對(duì)照品溶液和供試品溶液的穩(wěn)定性，結(jié)果表明，24 h內(nèi)對(duì)照品和供試品溶液均穩(wěn)定，峰面積的RSD分別為1.21 %和0.78 %。

2.3.4 線性試驗(yàn) 分別精密移取2.2.1項(xiàng)下對(duì)照品貯備液1，2，2.5，3，5，6 ml至100 ml量瓶，流動(dòng)相定容至刻度，搖勻，以濃度對(duì)峰面積做線性回歸，得回歸方程：A=43 439x-6628.8，r=0.9993。結(jié)果表明，苯酚濃度在2.058～12.348 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.5 精密度實(shí)驗(yàn) 取2.2.1項(xiàng)下對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次測(cè)定，計(jì)算苯酚的峰面積RSD為0.70 %，表明儀器精密度良好。

2.3.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取供試品（批號(hào)171101）約0.5 g，精密稱定，按2.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，平行配制6份，分別取50 μl注入液相色譜儀，考察方法的重復(fù)性，計(jì)算含量RSD為1.02 %，表明方法重復(fù)性良好。

2.3.7 中間精密度實(shí)驗(yàn) 取供試品（批號(hào)171101）約0.5 g，精密稱定，按2.2.2項(xiàng)方法制備供試品溶液，平行配制6份，分別取50 μl注入液相色譜儀，外標(biāo)法計(jì)算苯酚含量；取同一批號(hào)（批號(hào)171101）樣品約0.5 g，精密稱定，另一名分析員獨(dú)立建立系統(tǒng)，在不同儀器、不同日期進(jìn)行含量測(cè)定研究。按2.2.2項(xiàng)下方法平行配制6份供試品溶液，分別取50 μl注入液相色譜儀，外標(biāo)法計(jì)算苯酚含量。12次進(jìn)樣結(jié)果的RSD為1.52 %，表明含量測(cè)定的中間精密度良好。

2.3.8 回收率試驗(yàn) 取3份已知苯酚含量的爐甘石乳膏（批號(hào)171101），每份約0.5 g，精密稱定，每份分別精密加入含1 mg/ml的苯酚溶液0.8，1.0，1.2 ml，按2.2.2項(xiàng)方法制備供試品溶液，每個(gè)濃度平行制備3份溶液，按2.1項(xiàng)色譜條件測(cè)定苯酚含量，并計(jì)算加樣回收率。苯酚的平均回收率為100.2 %，RSD為0.98 %。

2.3.9 耐用性試驗(yàn) 比較不同廠家的十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱（Agilent XDB 250 mm×4.6 mm，5 μm；Kromasil 250 mm×4.6 mm，5 μm；Alltima 250 mm×4.6 mm，5 μm），不同的色譜柱對(duì)苯酚含量測(cè)定沒(méi)有較大影響。微調(diào)流動(dòng)相比例，不同柱溫（25，30，35 ℃），不同流速（0.8，1.0，1.2 ml/min），苯酚的保留時(shí)間略有變化，對(duì)苯酚含量測(cè)定沒(méi)有較大影響。乳膏超聲提取時(shí)間（2，5，8 min）不同，超聲提取時(shí)間為2 min，乳膏分散不均勻，苯酚不能從乳膏中充分提取；超聲提取時(shí)間為5 min和8 min，苯酚可達(dá)到充分提取，因此選擇超聲提取時(shí)間為5 min。

2.3.10 樣品測(cè)定 分別取自制樣品和原研產(chǎn)品，按2.2.2項(xiàng)方法制備供試品溶液，測(cè)得3批樣品中苯酚的含量分別為2.04，2.07，2.06 mg/g，原研產(chǎn)品的含量為2.02 mg/g，原研產(chǎn)品與自制樣品中苯酚含量相差不大，說(shuō)明本測(cè)定方法準(zhǔn)確可行。

3 討論

在爐甘石乳膏中加入苯酚可延長(zhǎng)制劑使用的有效期限，保持制劑穩(wěn)定，同時(shí)增強(qiáng)其殺菌、抑菌、止癢作用[4]，但有文獻(xiàn)報(bào)道苯酚濃度在0.5 %～1.5 %即會(huì)對(duì)皮膚黏膜有強(qiáng)烈刺激性及腐蝕性[5]，需對(duì)苯酚濃度進(jìn)行監(jiān)測(cè)，防止苯酚濃度過(guò)高對(duì)皮膚產(chǎn)生損害。苯酚含量的測(cè)定方法很多，2015版中國(guó)藥典中苯酚含量測(cè)定方法為滴定法，文獻(xiàn)報(bào)道有紫外分光光度法[6-7]、毛細(xì)管氣相色譜法[8]及HPLC[9-12]等。采用滴定法測(cè)定含苯酚制劑的含量，操作復(fù)雜、花費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)，不易判斷終點(diǎn)顏色變化；爐甘石乳膏基質(zhì)成分復(fù)雜，毛細(xì)管氣相色譜法不適合本品中苯酚的含量測(cè)定。我們采用HPLC測(cè)定乳膏中苯酚的含量，方法準(zhǔn)確、簡(jiǎn)單。

根據(jù)苯酚的特性，我們采用流動(dòng)相溶液經(jīng)超聲提取乳膏中的苯酚，超聲使乳膏均勻分散，苯酚溶解在甲醇-水溶液中。本法操作簡(jiǎn)便、快捷，準(zhǔn)確性高、重復(fù)性好，基質(zhì)對(duì)苯酚含量測(cè)定無(wú)干擾。因此，可作為爐甘石乳膏中苯酚含量測(cè)定的方法。