張 燕， 馬艷艷， 斯地克·麥麥提， 翟筱妍， 李雅婷， 張之

(1烏魯木齊新疆軍區(qū)總醫(yī)院兒科， 烏魯木齊 830000； 2新疆醫(yī)科大學(xué)臨床14-5定向班， 烏魯木齊 830011；3新疆喀什地區(qū)維吾爾醫(yī)醫(yī)院骨科， 新疆 喀什 844000； 4新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院藥理教研室， 烏魯木齊 830011)

胃潰瘍是在多種致病因子的作用下，發(fā)生的胃黏膜炎性反應(yīng)與壞死性病變，臨床癥狀主要為長期性、周期性、節(jié)律性的上腹部隱痛或燒灼樣疼痛[1]。胃潰瘍是臨床常見病，具有發(fā)病率高，胃出血、穿孔等并發(fā)癥多，容易反復(fù)發(fā)作，纏綿難愈等特點。西醫(yī)治療主要以抑酸藥來解除胃酸對潰瘍面的刺激和腐蝕，臨床效果顯著, 但復(fù)發(fā)率較高,不良反應(yīng)較大[2]。 中醫(yī)藥在治療胃潰瘍尤其防止復(fù)發(fā)方面具有獨特的優(yōu)勢[3]。比黑馬爾江散(BHM)由沒食子、黑種草子、菝契、海螵蛸、珊瑚等8味藥材組成，臨床上多用于消化性潰瘍的治療。目前對BHM的研究主要集中在抗菌作用[4]和含量測定[5]方面，本研究采用水浸應(yīng)激和吲哚美辛藥物致大鼠胃潰瘍模型，探究BHM的抗胃潰瘍及抗炎、鎮(zhèn)痛作用，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1動物KM小鼠，雌雄兼有，體質(zhì)量( 20±2)g；清潔級雄性SD大鼠，體質(zhì)量 (200±20) g，由新疆醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供，合格證號SCXK(新) 2016-0004。

1.2藥物比黑馬爾江散由喀什地區(qū)維吾爾醫(yī)醫(yī)院制劑中心提供，批號 MZJ-W-0321-2009 ；吲哚美辛為廣東華南藥業(yè)集團有限公司生產(chǎn)，批號：國藥準(zhǔn)字H44020701。

1.3儀器GL522-1SCN型電子分析天平 ( 德國賽多利斯有限公司 )，RL118121型電子顯微鏡(河北德科機械科技有限公司)。

1.4抗胃潰瘍作用實驗

1.4.1 水浸應(yīng)激誘發(fā)大鼠胃潰瘍模型建立 取35只SD大鼠禁食不禁水48 h，隨機分為正常對照組、模型組、BHM低劑量組、BHM高劑量組、陽性對照組，每組7 只，BHM高、低劑量組分別灌胃給予比黑瑪爾江散6.250、3.125 g/kg體質(zhì)量，陽性對照組灌胃枸櫞酸鉍鉀顆粒0.012 5 g/kg體質(zhì)量，模型組、正常對照組灌胃等量蒸餾水10 mL/kg體質(zhì)量。除正常組外其他各組大鼠灌胃后，將大鼠固定于鼠板上，垂直浸入20℃的水中，水面浸至劍突處，12 h后取出，麻醉處死，摘取全胃放入蒸餾水漂洗干凈，浸入1%甲醛溶液輕微固定。

1.4.2 吲哚美辛致大鼠胃潰瘍模型 取21只SD大鼠禁食不禁水48 h，隨機分為正常對照組、模型組、BHM給藥組，每組7 只，BHM給藥組大鼠灌胃給予比黑馬爾江散6.25 g/kg體質(zhì)量，1 h后模型組、BHM給藥組大鼠灌胃給予吲哚美辛0.04 g/kg致胃潰瘍。

1.4.3 觀察指標(biāo) (1) 沿胃大彎刨開胃，肉眼觀察胃黏膜整體外觀情況：胃粘膜水腫情況，點狀或條狀出血和潰瘍情況，拍照，千分尺測量胃壁厚度。 (2) 胃黏膜潰瘍指數(shù)(UI)評定 : 測量每個潰瘍的長徑，計算潰瘍指數(shù)。按Guth標(biāo)準(zhǔn)計數(shù)胃黏膜UI并累計計分：斑點糜爛計1分；糜爛長度<1 mm計2分；1～2 mm計3分；2～3 mm計4分；>4 mm計5分；寬度>2 mm時分值乘2。(3)胃黏膜組織病理學(xué)標(biāo)本制備及觀察:于胃黏膜損傷最明顯處取0.5 cm×1.0 cm組織塊，10%甲醛溶液固定，石蠟包埋、切片、HE染色，觀察胃黏膜病理組織學(xué)變化 。

1.5鎮(zhèn)痛實驗取18 只KM小鼠隨機分為模型組、BHM給藥組，每組9 只，BHM給藥組小鼠灌胃給予比黑馬爾江散30 g/kg體質(zhì)量，每天1 次，連續(xù)3 d，模型組小鼠給予蒸餾水10 mL/kg體質(zhì)量，每天1 次，連續(xù)3 d，末次給藥1 h后，2組小鼠均腹腔注射0.7%醋酸溶液0.2 mL，觀察記錄各組扭體潛伏期，15 min內(nèi)小鼠發(fā)生的扭體反應(yīng)(腹部收縮內(nèi)凹、伸展后肢、臀部抬高、蠕行)的鼠數(shù)和各鼠扭體次數(shù)。扭體反應(yīng)抑制率%=(對照組平均扭體數(shù)-給藥組平均扭體數(shù))/對照組平均扭體數(shù)×100%。

1.6抗炎實驗取18 只KM小鼠，測定小鼠給藥前左后足跖厚度后，隨機分為模型組、BHM給藥組，每組9 只，BHM給藥組小鼠灌胃給予比黑馬爾江散3 g/kg體質(zhì)量，模型組小鼠給予蒸餾水10 mL/kg體質(zhì)量，每天1 次，連續(xù)3 d，末次給藥1 h后，左后足跖皮下注射0.1 m L蛋清致炎，觀察記錄致炎2 h后左后足趾厚度，比較足跖腫脹度，計算腫脹抑制率。腫脹抑制率%=(對照組平均腫脹度-給藥組平均腫脹度)/對照組平均腫脹度×100 %。

2 結(jié)果

2.1BHM對胃潰瘍模型大鼠胃外觀的影響

2.1.1 BHM對水浸應(yīng)激誘發(fā)胃潰瘍模型大鼠胃外觀的影響 正常對照組大鼠胃腔無血性積液，黏膜呈淡紅色，光滑完整；模型組大鼠胃腔內(nèi)有大量血性積液，黏膜表面附著大量血痂，黏膜充血水腫，呈深紅色，見彌漫性點線狀出血、糜爛及潰瘍形成；BHM低劑量組大鼠胃腔內(nèi)有中量血性積液，黏膜面附著中量血痂，胃黏膜有充血水腫，但程度較潰瘍模型組略輕，見散在斑點狀糜爛；BHM高劑量組大鼠胃腔內(nèi)有少量血性積液，黏膜面附著少量血痂，胃黏膜雖有充血水腫，但程度較潰瘍模型組減輕，見圖1。

2.1.2 BHM對吲哚美辛誘發(fā)胃潰瘍模型大鼠胃外觀的影響 正常對照組大鼠胃腔無血性積液，黏膜呈淡紅色，光滑完整；模型組大鼠胃腔內(nèi)有大量血性積液，黏膜表面附著大量血痂，黏膜充血水腫，胃壁厚度增厚，呈深紅色，見彌漫性點線狀出血、糜爛及潰瘍形成；BHM給藥組大鼠胃腔內(nèi)有少量血性積液，黏膜面附著少量血痂，胃黏膜輕度充血水腫，見圖2。

a: 正常對照組

b: 模型組

c: BHM高劑量組

d: BHM低劑量組

e: 陽性對照組

圖1對水浸應(yīng)激誘發(fā)胃潰瘍實驗各組大鼠胃黏膜外觀圖

a: 正常對照組

b: 模型組

c: BHM組

圖2吲哚美辛誘發(fā)胃潰瘍實驗各組大鼠胃黏膜外觀圖

2.2BHM對胃潰瘍模型大鼠胃潰瘍指數(shù)的影響

2.2.1 BHM對水浸應(yīng)激誘發(fā)胃潰瘍模型大鼠胃潰瘍指數(shù)的影響 與正常對照組比較，模型組大鼠胃壁厚度增厚，潰瘍指數(shù)為12.4，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。與模型組比較,BHM高劑量組大鼠胃壁腫脹厚度降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，BHM高、低劑量組大鼠潰瘍指數(shù)減小，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05，P<0.01)，見表1。

組 別劑量/(g/kg)潰瘍指數(shù)胃壁厚度/mm抑制率/%正常對照組10(蒸餾水) 00.223±0.016-模型組10(蒸餾水)12.4±3.4#0.279±0.050#0BHM低劑量組3.1257.4±2.4*0.271±0.03158.0BHM高劑量組6.2505.8±3.2**0.183±0.041*53.2陽性對照組0.012 57.0±4.8*0.235±0.041*43.5

注：與正常對照組比較，#P<0.05，##P<0.01； 與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

2.2.2 BHM對吲哚美辛誘發(fā)胃潰瘍模型大鼠胃潰瘍指數(shù)的影響 與正常對照組比較,模型組大鼠平均潰瘍指數(shù)為40.3,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);與模型組比較,BHM給藥組大鼠潰瘍指數(shù)為12.8,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

組別劑量/(g/kg) 體質(zhì)量/g潰瘍指數(shù)抑制率/%正常對照組0198±15.00-模型組0.04201±18.840.3±9.0#0BHM給藥組6.25204±13.412.8±10.1*68.2

注：與正常對照組比較，#P<0.05；與模型組比較，*P<0.05。

2.3大鼠胃黏膜病理組織學(xué)變化

2.3.1 BHM對水浸應(yīng)激誘發(fā)胃潰瘍模型大鼠胃病理組織學(xué)的影響 正常對照組大鼠胃黏膜結(jié)構(gòu)完整，腺體排列整齊，未見炎性細胞浸潤及黏膜下出血；模型組大鼠胃黏膜毛細血管擴張、充血及出血，間質(zhì)見炎性細胞浸潤，部分區(qū)域黏膜壞死、脫落，潰瘍形成；BHM低劑量組大鼠胃黏膜血管輕度擴張、充血，部分區(qū)域黏膜表層上皮細胞壞死、脫落，間質(zhì)見少許炎性細胞浸潤，未見明顯潰瘍灶，損傷略輕于潰瘍模型組；BHM高劑量組大鼠胃黏膜血管輕度擴張、充血，部分區(qū)域黏膜表層上皮細胞脫落，損傷輕于潰瘍模型組，見圖3。

a: 正常對照組

b: 模型組

c: BHM低劑量組

d: BHM高劑量組

e: 陽性對照組

圖3應(yīng)激胃潰瘍實驗各組大鼠胃組織病理圖(HE×200)

2.3.2 BHM對吲哚美辛誘發(fā)胃潰瘍模型大鼠胃病理組織學(xué)的影響 模型組大鼠胃黏膜充血，炎性細胞浸潤，部分區(qū)域黏膜脫落，潰瘍形成；BHM給藥組大鼠胃黏膜血管輕度擴張、部分區(qū)域黏膜表層上皮細胞脫落，未見潰瘍灶，見圖4。

a: 模型組

b: BHM給藥組

圖4吲哚美辛誘發(fā)胃潰瘍實驗各組大鼠胃組織病理圖(HE×200)

2.4BHM鎮(zhèn)痛實驗結(jié)果與模型組比較,BHM給藥組小鼠潛伏期延長, 30 min扭體次數(shù)減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

表3 BHM對醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響

注：與模型組比較，*P<0.05。

2.5BHM對小鼠足跖炎癥腫脹的影響與模型組比較,BHM給藥組小鼠足跖腫脹度減少輕，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表4。

表4 BHM對蛋清致小鼠足趾腫脹的影響

注：與模型組比較，*P<0.05。

3 討論

精神緊張、應(yīng)激壓力性焦慮[6]和服用非甾體類解熱藥物是引起胃黏膜糜爛、胃潰瘍的重要因素，根據(jù)胃潰瘍的這2種主要發(fā)病機制，本實驗成功建立了應(yīng)激性和化學(xué)藥物誘發(fā)的胃潰瘍大鼠模型。鑒于近年來植物藥對慢性疾病的化學(xué)預(yù)防成為研究熱點，加之潰瘍的高復(fù)發(fā)率特點[7]，本研究考察了BHM對胃潰瘍的預(yù)防作用，結(jié)果表明大鼠預(yù)先灌胃給予BHM可減輕由于化學(xué)藥物或應(yīng)激刺激引起的潰瘍，改善胃水腫和出血癥狀；鎮(zhèn)痛實驗和抗炎實驗表明BHM具有抗炎鎮(zhèn)痛作用。

BHM復(fù)方的抗?jié)儭⒖寡祖?zhèn)痛作用與其組方中的沒食子酸、海螵鞘、黑種草子等物質(zhì)的作用密不可分。有研究表明，沒食子是多酚類物質(zhì)，有抗氧化抗炎作用[8-9]，海螵蛸有中和胃酸、保護黏膜、收斂止血、清創(chuàng)等作用[10-11]，鄭紅[12]通過動物實驗發(fā)現(xiàn), 海螵蛸可調(diào)節(jié)胃黏膜組織中的一氧化氮含量, 加強胃黏膜的屏障功能,促進胃組織中前列腺素E2的合成, 加速潰瘍的愈合, 清除氧自由基和減輕脂質(zhì)過氧化反應(yīng), 并參與調(diào)節(jié)胃黏膜損傷的炎癥反應(yīng)。黑種草子具有抗氧化[13]、抗炎[14]、促進血管新生[15]等多方面藥理作用。這些組方藥物及其活性成分構(gòu)成了BHM防治胃潰瘍的物質(zhì)基礎(chǔ)。