劉 嬌 王大明 宋春麗 劉 青 肖利佳 柯娟玉

南方醫(yī)科大學(xué)深圳醫(yī)院臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心，廣東深圳 518000

乙肝作為一種病毒性肝炎，是我國臨床上一類傳染性疾病，對患者的生命健康造成極大威脅[1-2]。在對該項(xiàng)疾病進(jìn)行診斷時(shí)，主要是采用HBV-M診斷方法，來判定患者的病情嚴(yán)重及傳染度情況，通過檢測結(jié)果能夠直觀的反映出患者的免疫應(yīng)答狀態(tài)[3-4]。近年來，隨著生物學(xué)及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的快速發(fā)展，RT-PCR被廣泛應(yīng)用于臨床疾病診斷中，能夠高效的檢測出乙肝患者的各項(xiàng)指標(biāo)，為臨床治療工作的開展提供可靠的依據(jù)[5-6]。本文將4355例乙肝患者作為研究對象，探究熒光定量PCR法及ELISA法在乙肝病毒DNA（HBV-DNA）和乙肝病毒標(biāo)志物（HBV-M）中的臨床診斷價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料及方法

1.1 一般資料

本研究選取于2016年1月～2018年2月在本院檢測出來的乙肝患者共4355例，男2532例，女1823例，年齡6～68歲，平均（42.3±2.5）歲。身高108～180cm，平均（162.3±2.5）cm；體重為16.2 ～ 100kg，平均（50.0±3.5）kg。在本次檢測中，所使用的檢測儀器為基因擴(kuò)增分析儀（廠家：伯樂Bio-Rad，型號CFX96），ELISA試劑盒（默沙克生物apom）。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）經(jīng)診斷，患者被診斷為乙肝病毒患者，在近期內(nèi)未接受抗病毒治療者；（2）患者自愿參與到本次調(diào)查中，并簽署知情同意書者。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）患有嚴(yán)重精神疾病者；（2）同時(shí)伴有甲、丙、丁等其他類型的肝炎患者；（3）并發(fā)囊腫及惡性腫瘤患者；（4）存在嚴(yán)重心腦血管疾病患者。

1.2 方法

在本次檢測中，主要是采用HBV免疫學(xué)檢測方法，使用ELISA法對患者進(jìn)行HBV-M模式的定性檢測，檢測的乙肝病毒主要包括乙型肝炎e抗體、乙型肝炎病毒表面抗原、乙肝表面抗體等，在對檢測結(jié)果進(jìn)行對比時(shí)，主要是運(yùn)用酶標(biāo)儀進(jìn)行比色，在開展一系列的操作工作時(shí)，要求嚴(yán)格按照試劑說明書的要求，對檢測結(jié)果進(jìn)行評定。在操作過程中應(yīng)嚴(yán)格按照說明書中的評定結(jié)果及檢驗(yàn)操作要求做好各項(xiàng)操作。采用HBV-DNA定量測定方法，使用FQ-PCR法測定患者的病毒水平，使用Roche LightCycler480型號的儀器，及FQ-PCR試劑盒，將試劑盒的定量測定范圍控制在103-107copies/mL，在開展操作時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格按照說明書的內(nèi)容進(jìn)行操作，以確保檢測結(jié)果的真實(shí)性及可信性。按照陰陽性進(jìn)行分組，分成大三陽及小三陽。其中，大三陽包括：[1（+）、3（+）、5（+）]。小三陽包括：[1（+）、4（+）、5（+）模式 ]、[1（+）、4（+）模式 ]、[1（+）、3（+）模式 ]、[2（+）、4（+）、5（+）模式 ]、[2（+）、4（+）模式 ]、[5（+）模式 ]、[4（+）、5（+）模式 ]。

1.3 觀察指標(biāo)[7]

觀察在 1（+）、3（+）模式，1（+）、4（+）模式，1（+）、3（+）、5（+）模式，1（+）、4（+）、5（+）模式，2（+）、4（+）模式，2（+）、4（+）、5（+）模式，4（+）、5（+）模式，5（+）模式等不同 HBV-M 模式下，各組間的陽性率；觀察在不同的HBV-M模式下，HBV-DNA含量分布情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

本研究數(shù)據(jù)通過SPSS18.0軟件統(tǒng)計(jì)處理，計(jì)量資料以（±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以百分?jǐn)?shù)表示，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同HBV-M模式下RT-PCR陽性的檢測結(jié)果比較

4355 例乙肝患者，1（+）、3（+）、5（+）模式的陽性率最高，與其他組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 不同HBV-M模式下檢測結(jié)果比較

2.2 不同模式下HBV-DNA含量分布情況

4355 例乙肝患者，1（+）、4（+）、5（+）模式的患者數(shù)量最多，2（+）、4（+）模式患者數(shù)量最少，與其他組間對比有差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 不同模式下HBV-DNA含量分布情況

3 討論

乙肝是臨床上一項(xiàng)常見的疾病，通過檢驗(yàn)，乙肝病毒呈陽性者，在臨床上表現(xiàn)出慢性肝炎的患者，病程時(shí)間超過發(fā)病日期或半年者[8-9]?；颊叩呐R床癥狀表現(xiàn)出腹脹、畏食、乏力、惡心、腹脹等癥[10-11]。通過對該項(xiàng)疾病的發(fā)病原因進(jìn)行了解可知，HBV攜帶者及乙型肝炎患者是疾病的主要傳染源，傳染源為血液制品、血、母嬰、皮膚黏膜及性接觸傳播等[12-13]。為了提升疾病治療效果，需要做好臨床診斷工作。傳統(tǒng)的乙肝病毒檢查方法無法直接的反映出患者疾病的具體情況，無法為乙肝疾病的治療提供可靠的依據(jù)。目前，臨床上乙肝病毒主要采用熒光定量PCR法及ELISA法，為乙肝病毒的高效治療提供依據(jù)。PCR法在使用過程中能夠有效的檢測出患者機(jī)體內(nèi)的HBV-DNA水平，可以早期病毒擴(kuò)增，為患者提供指導(dǎo)用藥，但是也存在一定的窗口期。而ELISA檢測方法能夠直觀的反映出乙肝患者機(jī)體的免疫應(yīng)答狀態(tài)，檢測靈敏度高，能夠直觀的反應(yīng)出患者疾病的具體情況[14]。

本文共選取4355例乙肝患者，將HBV-M模式公分為 1（+）、3（+）模式，1（+）、4（+）模式，1（+）、3（+）、5（+）模式，1（+）、4（+）、5（+）模式，2（+）、4（+）模式，2（+）、4（+）、5（+）模式，4（+）、5（+）模式，5（+）模式8種模式，本文表1中研究結(jié)果顯示，1（+）、3（+）、5（+）模式的陽性率最高，2（+）、4（+）模式，4（+）、5（+）模式，5（+）模式的陽性率為0，與其他組間對比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。本文表2中研究結(jié)果顯示，4355例乙肝患者，1（+）、4（+）、5（+）模式的患者數(shù)量最多，2（+）、4（+）模式患者數(shù)量最少，與其他組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。此項(xiàng)研究結(jié)果說明在患者機(jī)體內(nèi)的HBV-DNA水平判斷上，PCR能夠直觀的反映出患者的機(jī)體水平，而ELISA完成了對患者HBV-M的判斷，對兩種方法聯(lián)合使用，為臨床確診及治療工作提供了指導(dǎo)性意義。

綜上所述，在患者病情不嚴(yán)重及傳染度低的情況下可采用傳統(tǒng)測量方法。反之則需要使用PCR法聯(lián)合ELISA法。在不同的HBV-DNA定量測定模式下，所測量出來的陽性率及HBV-DNA水平存在著一定的差異，為了提升乙肝病毒的臨床診斷準(zhǔn)確率，在乙肝病毒DNA（HBV-DNA）和乙肝病毒標(biāo)志物(HBV-M)中的臨床診斷中，應(yīng)采用熒光定量PCR法及ELISA法，為乙肝病毒的高效治療提供依據(jù)。尤其是在患者抗體的窗口期，使用PCR聯(lián)合ELISA檢測方法，有助于確保輸血的安全性。