□ 劉家慧 四川省內(nèi)江市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心

1 引言

實(shí)際檢測(cè)食品中的金黃色葡萄球菌時(shí)，必須嚴(yán)格遵循法律規(guī)定與標(biāo)準(zhǔn)，逐步提高檢測(cè)水平與監(jiān)測(cè)質(zhì)量。一般情況下，檢驗(yàn)人員會(huì)利用科學(xué)的鑒定系統(tǒng)完成盲菌的鑒定及分型工作，反復(fù)對(duì)比檢測(cè)與鑒定結(jié)果后，明確被檢測(cè)食品中的金黃色葡萄球菌數(shù)量。能力驗(yàn)證是一種客觀的實(shí)驗(yàn)方法，是控制試驗(yàn)室準(zhǔn)確度及精確度的重要途徑，有利于修正實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)中可能存在的誤差。為此，文章以能力驗(yàn)證為核心，對(duì)食品中的金黃色葡萄球菌定量檢測(cè)及結(jié)果進(jìn)行了分析。這不僅可以改善實(shí)驗(yàn)室工作質(zhì)量，也可提高實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)水平[1]。

2 檢測(cè)材料與方法

2.1 材料

實(shí)際進(jìn)行能力驗(yàn)證時(shí)，選取由我國(guó)研究院統(tǒng)一發(fā)放的6個(gè)金黃色葡萄球菌樣品，分為1～6進(jìn)行編號(hào)，6個(gè)金黃色葡萄球菌樣品均為肉眼可見的球狀，顏色為白色；選取6袋質(zhì)量為25 g的奶樣品，按照同樣的方式進(jìn)行編號(hào)，同一編碼的金黃色葡萄球菌樣品及奶樣品為一組。配置所需的培養(yǎng)基：無菌生理鹽水、BP瓊脂平板、顯色培養(yǎng)基、血瓊脂平板、革蘭氏染色液、腦心浸出液肉湯BHI與凍干兔血漿等。

2.2 方法

實(shí)際實(shí)驗(yàn)過程中，應(yīng)嚴(yán)格遵循相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)與要求，將稀釋液從金黃色葡萄球菌樣品瓶中取出，取出的稀釋液應(yīng)嚴(yán)格控制在225 mL，然后將其與稀釋液一同放置于均質(zhì)袋內(nèi)，直至其完全溶解，然后將稀釋液與奶樣品均勻混合，逐一按照編號(hào)統(tǒng)一處理6組樣品。本次研究以平板計(jì)數(shù)方式為核心對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)對(duì)金黃色葡萄球菌盲樣的評(píng)估，盡量選擇稀釋度范圍較大一些，盡量使同一稀釋度3個(gè)平板上的菌落在20～200 CFU。每個(gè)稀釋度吸取1 mL均液以0.3、0.3、0.4 mL接種量分別加入到3個(gè)BP瓊脂平板上。在實(shí)驗(yàn)過程中要注意的是：新配置的BP瓊脂平板有水珠，應(yīng)放置于生物安全柜吹干或者放在25～50 ℃培養(yǎng)箱中烘干，計(jì)數(shù)時(shí)菌落不會(huì)蔓延；涂布時(shí)用一次性塑料涂布棒，注意不要觸及平板邊緣，計(jì)數(shù)時(shí)菌落清晰便于計(jì)數(shù)；涂布后，靜置10 min，待樣液完全吸收后再倒置于36 ℃下培養(yǎng)45～48 h。結(jié)合研究目的選擇與實(shí)驗(yàn)研究相符的樣品勻液，合適的樣品混合液有利于加快稀釋速度，然后吸取1 mL的樣品勻液，注意所選樣品勻液稀釋度不同，將0.3 mL樣品勻液直接放入金黃色葡萄球菌顯示培養(yǎng)基中，緩慢攪拌，均勻后停止。金黃色葡萄球菌的靈敏度會(huì)直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，為此，可反復(fù)對(duì)比其靈敏度，從而提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，確保其精準(zhǔn)、可行[2]。

3 結(jié)果與討論

據(jù)本次實(shí)驗(yàn)得出，不同稀釋度的平板當(dāng)中，菌落數(shù)存在較大差異。一般情況下，金黃色葡萄球菌菌落呈球狀，顏色不一，大致表現(xiàn)為從灰到黑的過渡，表面有濕潤(rùn)現(xiàn)象，較為光滑。未實(shí)驗(yàn)之前，需以冷凍的形式保存金黃色葡萄球菌，以免損傷樣品，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。但是，這種保存方式仍舊會(huì)對(duì)菌株造成一定損傷，致使菌落形態(tài)與金黃色葡萄球菌菌落出現(xiàn)差異，不再以球狀出現(xiàn)，而是呈不規(guī)則形態(tài)。受到干擾菌的影響，6組樣品均出現(xiàn)不同程度的透明圈，計(jì)數(shù)難度大幅提升。位于低稀釋度平板中的金黃色葡萄球菌的顏色會(huì)發(fā)生變化，以緩慢的速度從紫色向紅色轉(zhuǎn)變，其余細(xì)菌的顏色也會(huì)發(fā)生變化，但并不固定。

就上述分析可知，初期，金黃色葡萄球菌的分離并不復(fù)雜。要想明確結(jié)果，必須基于菌落計(jì)數(shù)進(jìn)行規(guī)范的操作與詳細(xì)的計(jì)算。不同編碼樣品的金黃色葡萄球菌基本一致，未出現(xiàn)明顯差異。平板具有成本低、耗時(shí)長(zhǎng)的特征，作為一種保守的培養(yǎng)基，存在特異性過低的問題。要想獲得準(zhǔn)確、可行的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，必須進(jìn)行補(bǔ)充性實(shí)驗(yàn)，從而達(dá)成有效區(qū)分菌落形態(tài)的目的。不同的培養(yǎng)基靈敏性也不同。顯色培養(yǎng)基具備十分明顯的優(yōu)勢(shì)，不僅可以簡(jiǎn)化操作，還可節(jié)約實(shí)驗(yàn)時(shí)間。分離培養(yǎng)不會(huì)對(duì)檢驗(yàn)人員提出過高的要求，利用基本的手段即可完成檢測(cè)。同時(shí)，可進(jìn)行多次實(shí)驗(yàn)，避免假陰性問題，提升結(jié)果的準(zhǔn)確性。

4 結(jié)語

綜上所述，實(shí)驗(yàn)涉及的金黃色葡萄球菌菌落數(shù)十分接近，這是在驗(yàn)證后反復(fù)比對(duì)得出的結(jié)果。實(shí)驗(yàn)過后，培養(yǎng)基顏色全部發(fā)生變化，均為十分鮮明的紅色，顯色狀態(tài)良好。需要注意的是，干擾菌會(huì)直接影響典型菌落的辨識(shí)度，尤其是在稀釋度較低的平板上，干擾菌出現(xiàn)了大面積的透明圈。因此，后續(xù)的檢驗(yàn)過程中，應(yīng)慎重選擇平板，避免菌落出現(xiàn)互相干擾的問題。提高菌落的辨識(shí)度，有效區(qū)分金黃色葡萄球菌及其他菌落。