劉文鳳，鄧 歡，頡鴻笙，鄭祝莉，王蕓蕓

(南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院，南昌 330006)

伯基特淋巴瘤(Burkit lymphoma，BL)最早由Dennis Burkitt描述，是一種高度侵襲性的非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma，NHL)，具有明顯的分子細(xì)胞遺傳學(xué)、免疫學(xué)和流行病學(xué)特征。BL腫瘤細(xì)胞為中小細(xì)胞，胞漿嗜堿性，常含脂肪空泡，核圓，染色質(zhì)濃縮，通常表達(dá)免疫球蛋白IgM，B細(xì)胞標(biāo)記物、生發(fā)中心母細(xì)胞標(biāo)志物和生發(fā)中心相關(guān)淋巴瘤蛋白[1]。

BL患者臨床常表現(xiàn)為實(shí)體腫瘤或淋巴結(jié)巨塊或類似急性白血病癥狀，超過25%患者有骨髓侵犯。根據(jù)臨床和生物學(xué)特征將BL分為3個(gè)亞型：地方性，散發(fā)性和免疫缺陷相關(guān)性BL[2]。地方性BL主要發(fā)生于赤道非洲和新幾內(nèi)亞巴布亞瘧疾帶的4～7歲兒童，表現(xiàn)為顯著的結(jié)外侵犯，50%腫瘤出現(xiàn)在下頜或腎，但也可能發(fā)生于回腸末端、盲腸、大網(wǎng)膜、卵巢、腎和乳房，并已證明與EBV感染有關(guān)。散發(fā)性BL分布于全世界，主要見于美國(guó)和歐洲，占成人NHL的1%～2%和兒童NHL的30%～40%，大多數(shù)腫瘤發(fā)生在腸道和上呼吸道的淋巴組織，且往往累及腹部。免疫缺陷性BL多發(fā)生于HIV感染者，占免疫缺陷相關(guān)淋巴瘤的30%。

以往研究表明90% BL病例存在c-myc基因易位，然而有研究表明在正常人類細(xì)胞和小鼠腫瘤模型的正常癌前細(xì)胞即可檢測(cè)到c-myc/IgG易位[3]，由此推測(cè)出c-myc癌基因易位本身不足以引起B(yǎng)L。此外，幾乎所有地方性BL患者存在EBV感染，免疫缺陷相關(guān)性BL多發(fā)生于HIV感染患者，然而這些現(xiàn)象的具體機(jī)制還未完全闡明。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，逐漸對(duì)BL中c-myc等基因突變有了更深入理解，也發(fā)現(xiàn)一些新的致瘤機(jī)制如ID3、Tcf3、CCND3突變，miRMA、lncRNA等表觀調(diào)控改變。下面將重點(diǎn)從基因突變和表觀調(diào)控兩個(gè)方面闡述近些年BL發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展，望為BL的診斷和治療提供新的理論依據(jù)。

1 基因突變與BL

1.1 c-myc基因突變

c-myc是一種堿性螺旋-環(huán)-螺旋(basic Helix-loop-Helix，bHLH)亮氨酸拉鏈轉(zhuǎn)錄因子，影響細(xì)胞周期調(diào)節(jié)、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞生長(zhǎng)、細(xì)胞粘附和分化的各種蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)錄。作為BL特征性標(biāo)志之一，c-myc易位在三種BL亞型中均可檢測(cè)到。BL中發(fā)生的三種c-myc易位：80%為t(8；14)易位，即8號(hào)染色體的c-myc基因與14號(hào)染色體上免疫球蛋白重鏈增強(qiáng)子并置；剩下的20%為2號(hào)和8號(hào)染色體之間的易位t(2；8)(p12；q24)，即c-myc與κ-輕鏈增強(qiáng)子元件并置，或8號(hào)和22號(hào)染色體易位t(8；22)(q24；q11)，使得與λ-輕鏈增強(qiáng)子元件并置[4]。

Luo[5]在小鼠中將c-myc基因放置在免疫球蛋白重鏈增強(qiáng)子下游，4～6月后小鼠產(chǎn)生B細(xì)胞淋巴瘤。致瘤原理是作為一個(gè)轉(zhuǎn)錄因子，c-myc的高表達(dá)可導(dǎo)致下游基因及信號(hào)通路激活。PI3k-Akt-mTOR是已知的c-myc下游信號(hào)通路之一，mTORP70S6激酶(P70S6 kinase，P70S6K)、S6核糖體蛋白(S6 ribosomal protein，S6RP)和真核起始因子4(Eukaryotic initiation factor 4，eIF4)等，參與翻譯和蛋白質(zhì)合成，調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化、凋亡及細(xì)胞周期等過程。Sander[6]通過轉(zhuǎn)基因大鼠模型同時(shí)激活c-myc表達(dá)及PI3k-Akt-mTOR信號(hào)通路，所誘導(dǎo)出的淋巴瘤具有與人類BL極其相似的組織學(xué)特征、細(xì)胞表面標(biāo)志以及基因表達(dá)譜。李純團(tuán)等[7]通過實(shí)驗(yàn)表明與反應(yīng)性淋巴結(jié)增生的組織相比，BL組織中Akt、mTOR、S6RP的表達(dá)有所升高，這證明了PI3k-Akt-mTOR信號(hào)通路在BL中異常活化。并且周倫歡[8]使用mTOR抑制劑雷帕霉素處理Raji細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)S6RP磷酸化水平降低，細(xì)胞增殖降低。故c-myc基因突變及其下游信號(hào)通路的激活在BL的形成過程中起著極其重要的作用。

現(xiàn)在觀點(diǎn)認(rèn)為c-myc癌基因失調(diào)本身不足以引起B(yǎng)L，需要額外的分子改變充當(dāng)“第二次打擊”。所以c-myc突變不是BL發(fā)生的始作俑者，而是作為一個(gè)通用的轉(zhuǎn)錄活躍基因的“放大器”，即c-myc直接結(jié)合并放大了多種調(diào)控細(xì)胞周期基因，從而促進(jìn)腫瘤發(fā)生。例如在c-myc誘導(dǎo)的腫瘤發(fā)生的動(dòng)物模型發(fā)現(xiàn)抗凋亡基因Bcl-2家族過表達(dá)，促凋亡基因puma、Noxa和BIM失活，進(jìn)一步論證了c-myc的通用轉(zhuǎn)錄基因的“放大器”作用[9]。

1.2 ID3、Tcf3、CCND3突變

Dunleavy[10]表明BL中ID3、Tcf3、CCND3突變概率為分別為13%和78%，36%，提示BL新的發(fā)病機(jī)制。Tcf-3是一個(gè)對(duì)正常中心母細(xì)胞具有決定性作用的bHLH轉(zhuǎn)錄因子，通過HLH結(jié)構(gòu)域同二聚化和本身的基本結(jié)構(gòu)改變使其與決定性BL生物學(xué)特征的DNA或DNA大溝聯(lián)系。DNA結(jié)合抑制因子3(inhibitors of DNA binding 3，ID3)是Tcf-3的負(fù)性調(diào)節(jié)因子之一，并且Tcf-3又可反式激活負(fù)調(diào)節(jié)因子ID3以及相關(guān)的家庭成員ID1和ID2，從而誘導(dǎo)其自身的負(fù)調(diào)節(jié)因子的表達(dá)。而CCND3編碼的cyclin D3，是細(xì)胞周期G1-S期進(jìn)程重要分子之一。

BL中的Tcf3突變及ID3突變后失去抑制Tcf-3功能，均導(dǎo)致Tcf-3含量增加。上調(diào)的Tcf-3可以直接激活CCND3，另外Tcf3 / ID3基因的突變還可能通過激活免疫球蛋白上調(diào)B細(xì)胞受體BCR表達(dá)，導(dǎo)致大范圍的PI3K激活。并且在c-myc重排陽(yáng)性的BL中，Tcf3 / ID3突變與該疾病的更高級(jí)階段相關(guān)，而Tcf3 / ID3突變?cè)趶浡驜細(xì)胞淋巴瘤幾乎是不存在的，這表明tcf-3 / ID3在BL的發(fā)病機(jī)制中起著決定性的作用，并可以由此鑒別這兩種腫瘤。

CCND3突變會(huì)使Cyclin D3穩(wěn)定高表達(dá)， cyclin D3與CDK6結(jié)合后調(diào)節(jié)酶的活性推動(dòng)細(xì)胞周期進(jìn)程，促進(jìn)細(xì)胞大量增殖，因此可能參與了BL的發(fā)生發(fā)展過程。Schmitz[11]用CDK6抑制劑PD 0332991處理BL小鼠模型，不僅引起細(xì)胞周期阻滯，還成功的誘導(dǎo)體外細(xì)胞凋亡并導(dǎo)致腫瘤腫塊減小。此外，Robaina[12]表明41%BL細(xì)胞核中缺失抑制cyclin D3和CDK6結(jié)合的p16蛋白，進(jìn)一步證實(shí)了cyclin D3在BL發(fā)生發(fā)展中的作用，并由此推斷Cyclin D3及其調(diào)控因子可以作為BL治療靶點(diǎn)。

1.3 其他基因突變

近些年在BL中還發(fā)現(xiàn)了其他許多基因突變，例如PTEN、p53、TFAP4、AICDA、SIN3A、USP7等基因突變[13]，并證實(shí)與BL一定相關(guān)性。

2 表觀調(diào)控與BL

2.1 miRNA

微小RNA(microRNA，簡(jiǎn)稱miRNA)是一類長(zhǎng)度約為20個(gè)核苷酸的小的非編碼RNA[14]。成熟的miRNA雖然不編碼蛋白質(zhì)，但是能夠調(diào)節(jié)機(jī)體內(nèi)30%基因的mRNA切割或翻譯過程，參與細(xì)胞周期演進(jìn)、調(diào)控細(xì)胞分化和細(xì)胞凋亡等。

BL腫瘤細(xì)胞與淋巴結(jié)反應(yīng)性增生細(xì)胞在某些miRNA含量方面有所不同，提示miRNA可能參與了BL發(fā)生。Wang等[14]在28例c-myc易位陽(yáng)性BL病例中觀察到miR17，miR19a，miR19b，miR-20均明顯上調(diào)，其中已經(jīng)證明上調(diào)的miR-19a通過下調(diào)PTEN引起PI3K / Akt通路的激活參與BL細(xì)胞增殖，miR-19b通過與c-myc的共表達(dá)協(xié)同促進(jìn)細(xì)胞增殖。Ni等[15]使用紫草素處理BL細(xì)胞后，miR-19a含量下降，PTEN通路解除抑制，Akt磷酸化減少，BL瘤體減小。而Mazzoccoli[16]發(fā)現(xiàn)在c-myc易位陽(yáng)性BL中miR-29低表達(dá)，用成熟miR-29轉(zhuǎn)染BL細(xì)胞，Western blotting分析表明周期蛋白依賴性激酶6(cyclin-dependent kinases 6，CDK6)、p-Akt、MCL-1含量減少，BIM增多，說明BL中miR-29低表達(dá)促進(jìn)了BL發(fā)生發(fā)展。而高琴麗[17]表明miR-155/bic則可能通過下調(diào)c-myc拮抗物表達(dá)，反過來促進(jìn)c-myc的作用，進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)化，以發(fā)揮原癌基因的作用。

在EBV陽(yáng)性和EBV陰性BL中某些miRNA表達(dá)水平不同也提示了不同類型腫瘤發(fā)生機(jī)制不同。例如miR-127在EBV陰性的BL中的表達(dá)與淋巴結(jié)反應(yīng)性增生的表達(dá)相似，而在EBV陽(yáng)性BL中高表達(dá)，上調(diào)的miR-127可增加c-myc、Bcl-6和CD10含量[18]。而Leucci[19]用miR-127抑制劑處理EBV陽(yáng)性B細(xì)胞發(fā)現(xiàn)IRF-4高表達(dá)，而IRF-4在B細(xì)胞分化為漿細(xì)胞過程中發(fā)揮重要作用，由此可見miR-127通過抑制B細(xì)胞分化和凋亡，促進(jìn)了腫瘤發(fā)展。因此miRNA表觀調(diào)控多種途徑影響細(xì)胞周期進(jìn)展、細(xì)胞分化和凋亡等過程參與BL發(fā)生發(fā)展，并有可能作為腫瘤標(biāo)記物和治療靶點(diǎn)。

此外，近些年在BL中還發(fā)現(xiàn)了許多miRNA水平改變，例如miR-150、miR-181b、miR-4728等通過表觀調(diào)控作用于細(xì)胞增殖和凋亡分子，促進(jìn)BL的發(fā)生[20-22]。

2.2 lncRNA

長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long non-coding RNA，lncRNA)是一類轉(zhuǎn)錄本長(zhǎng)度大于200 nt，能夠調(diào)控基因的表達(dá)水平的非編碼RNA。lncRNA 雖不參與蛋白質(zhì)的表達(dá)，但能刺激轉(zhuǎn)錄因子組合、招募染色質(zhì)修飾酶、修飾組蛋白等方式，以RNA形式在表觀遺傳學(xué)等多種層面調(diào)控基因的表達(dá)。

許多證據(jù)表明lncRNAs與B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞生物學(xué)的發(fā)展相關(guān)。相比于正常人，BL患者lncRNA DLEU1表達(dá)下調(diào)，可能是由于位于13q14.3區(qū)編碼基因缺失造成[23]。DLEU1的作用類似腫瘤抑制因子，誘導(dǎo)微管蛋白β2C和泛素連接酶E3成分N-識(shí)別蛋白1表達(dá)，參與NF-kB信號(hào)通路，p53蛋白質(zhì)降解途徑，調(diào)節(jié)程序性細(xì)胞死亡。Lee等[24]利用序列特異性轉(zhuǎn)錄激活因子實(shí)現(xiàn)了Raji細(xì)胞中DLEU1的敲除和過表達(dá)，發(fā)現(xiàn)DLEU1敲除Raji細(xì)胞中IKB-α和Akt磷酸化水平顯著升高，抗凋亡基因Bcl-2、MCL-1的表達(dá)顯著增加，而促凋亡基因Bax的mRNA水平降低， caspase 3/7-依賴性凋亡顯著減少。有此證明lncRNA DLEU1下調(diào)在BL發(fā)病中的重要作用。

2.3 其他

研究發(fā)現(xiàn)在BL中CHD8、KMT2D、HIST1H1E、BCL7A等分子含量和結(jié)構(gòu)異常[25]，這些分子也可能經(jīng)表觀調(diào)控方式參與BL發(fā)生。

3 結(jié)論

本文重點(diǎn)從基因突變和表觀調(diào)控方面闡述了近些年BL發(fā)生機(jī)制的研究進(jìn)展，希望對(duì)BL有更深一步的認(rèn)識(shí)。但是BL的發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，將來應(yīng)該深入探索，從而為BL診斷和治療提供根本依據(jù)。

在細(xì)胞系和動(dòng)物模型中已證明PI3k-Akt-mTOR抑制劑和miRNA相關(guān)抑制劑可以抑制細(xì)胞增殖促進(jìn)凋亡，未來可嘗試將這些抑制劑用于臨床試驗(yàn)，但其安全性還有待研究。此外還應(yīng)該大力研發(fā)針對(duì)c-myc、ID3、Tcf3、CCND3抑制劑，和表觀調(diào)控相關(guān)抑制劑等，使BL治療方案更有針對(duì)性。