張崇英，劉 偉，宋金秋

（1.重慶三峽職業(yè)學(xué)院，重慶 404155；2.重慶市云陽(yáng)縣高陽(yáng)鎮(zhèn)農(nóng)技服務(wù)中心，重慶 404507；3.湘西民族職業(yè)技術(shù)學(xué)院，湖南 416000）

在當(dāng)前環(huán)保發(fā)展形勢(shì)下，我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)逐漸由傳統(tǒng)粗放養(yǎng)殖轉(zhuǎn)向集約化、環(huán)境友好化養(yǎng)殖方式轉(zhuǎn)變。但由于高密度的養(yǎng)殖產(chǎn)生大量殘餌糞便，引起養(yǎng)殖水質(zhì)惡化，從而導(dǎo)致水生動(dòng)物疾病。傳統(tǒng)養(yǎng)殖往往采用消毒劑或抗生素來(lái)控制疾病爆發(fā)（楊移斌等，2014）。大量使用抗生素和消毒劑等增強(qiáng)動(dòng)物耐藥性，并影響動(dòng)物體內(nèi)菌落平衡，同時(shí)魚體藥殘會(huì)大大降低經(jīng)濟(jì)價(jià)值或達(dá)不到質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（王玉堂，2012）。

益生菌（probiotic）泛指能在動(dòng)物體腸道內(nèi)生存，對(duì)動(dòng)物機(jī)體健康有益的微生物統(tǒng)稱。Fuller（1989）將益生菌定義為通過(guò)調(diào)節(jié)動(dòng)物腸道菌落平衡而對(duì)生物體有益且可制作動(dòng)物飼料添加劑的一種活性微生物。同樣Gatesoup（1999）將益生菌概括為一類具有活性的微生物飼料添加劑，能寄宿于畜禽腸道內(nèi)，且能有效增強(qiáng)動(dòng)物機(jī)體免疫能力。而Verschuere 等（2000）在前人基礎(chǔ)上得出益生菌通過(guò)調(diào)節(jié)養(yǎng)殖動(dòng)物體內(nèi)或其環(huán)境的微生物組成，進(jìn)而提高餌料利用率，提高養(yǎng)殖動(dòng)物的抗病能力。WHO 和FAO（2001 年）把益生菌定義為充足條件下對(duì)宿主有益的微生物。目前，在魚飼料中添加益生菌的研究報(bào)道較為常見(jiàn)，而將益生菌作為營(yíng)養(yǎng)劑添加到蝦料中的應(yīng)用研究較少。本試驗(yàn)在大棚養(yǎng)殖環(huán)境下，分別在南美白對(duì)蝦（Penaeus vannamei）飼料中添加嗜酸乳桿菌、枯草芽孢桿菌及其混合菌作為試驗(yàn)組，探討益生菌對(duì)大棚養(yǎng)殖白對(duì)蝦的生長(zhǎng)效果及血液免疫指標(biāo)的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)環(huán)境 試驗(yàn)選址在云陽(yáng)縣某水產(chǎn)養(yǎng)場(chǎng)，選取4 口規(guī)格相似的水泥池塘（塘深1.5 m，坡比1 ∶1.5，面積約450 m2/ 口）進(jìn)行試驗(yàn)。塘底設(shè)中央排污設(shè)施，同時(shí)設(shè)底部爆氣管和水面水車式增氧機(jī)。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物 蝦苗由某苗種公司提供的同一批蝦苗，規(guī)格在1 cm 左右。進(jìn)苗暫養(yǎng)1 周后，于4 月14 日按每口池塘7 萬(wàn)尾的密度投喂養(yǎng)殖91 d。

1.3 試驗(yàn)飼料 基礎(chǔ)日糧配方及營(yíng)養(yǎng)成分見(jiàn)表1，在基礎(chǔ)日糧中分別添加不同濃度（0.6%、1.2%、1.8%）的嗜酸乳桿菌和枯草芽孢桿菌混合物（質(zhì)量比1 ∶1），分別設(shè)置成試驗(yàn)組A、試驗(yàn)組B、試驗(yàn)組C（有效活菌均為1010CFU/g）。每2 天換水一次，換水頻率以水渾濁程度適當(dāng)調(diào)整。飼料投放量為蝦體重的10% ～12%，根據(jù)攝食量和外環(huán)境適當(dāng)調(diào)節(jié)。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)成分 %

1.4 指標(biāo)測(cè)定 從5 月5 日（養(yǎng)殖20 d）后開(kāi)始，每隔10 d 分別從各池塘中隨機(jī)抽100 尾南美白對(duì)蝦，測(cè)量其體長(zhǎng)和體重，取平均值。每隔20 d，每個(gè)池塘隨機(jī)取南美白對(duì)蝦40 尾，參照吳志新等（1997）的方法。用5 號(hào)針頭的1 mL 無(wú)菌注射器從蝦圍心腔內(nèi)抽血樣，將40 尾魚蝦的血液充分混合后在室溫下靜置凝固，然后置4℃冰箱保藏4 h后，4000 r/min 離心10 min，收集上層血清，4℃冰保存?zhèn)溆?。本試?yàn)采用磷酸苯二鈉法測(cè)定酸性磷酸酶（ACP）和堿性磷酸酶（AKP）活性（王冬冬，2008），采用愈創(chuàng)木酚法測(cè)定過(guò)氧化物酶（POD）活性（李忠光等，2008）。

2 結(jié)果與分析

2.1 大棚養(yǎng)殖效果 由表2 可知，本次研究中，大棚養(yǎng)殖南美白對(duì)蝦的平均產(chǎn)量達(dá)476.9 kg，平均成活率70.16%。試驗(yàn)組池塘的餌料系數(shù)隨益生菌添加量的增加逐漸下降，降低幅度達(dá)到6.3% ；試驗(yàn)組C 產(chǎn)量和成活率均顯著高于其他各組（P ＜0.05），因此，本試驗(yàn)表明，添加益生菌試驗(yàn)餌料利用率更好，且有利用效果更好的趨勢(shì)。2.2 生長(zhǎng)指標(biāo) 結(jié)合養(yǎng)殖過(guò)程觀察和圖1、圖2可知，5 月15 日前各組白對(duì)蝦生長(zhǎng)無(wú)明顯差異，分析可能是雖然大棚養(yǎng)殖，但整體環(huán)境水溫較低，影響生長(zhǎng)攝食；5 月15 ～25 日，隨季節(jié)環(huán)境升溫，白對(duì)蝦生長(zhǎng)速度加快明顯，且各組間開(kāi)始出現(xiàn)一定差異，而此時(shí)試驗(yàn)組與對(duì)照組白對(duì)蝦的生長(zhǎng)指標(biāo)基本一致，體長(zhǎng)保持在6.2 cm 左右，平均體重3.85 g ；5 月25 日后，試驗(yàn)組南美白對(duì)蝦生長(zhǎng)速度較對(duì)照組出現(xiàn)明顯提升。

表2 養(yǎng)殖效果對(duì)比

圖1 南美白對(duì)蝦平均體長(zhǎng)動(dòng)態(tài)變化

圖2 南美白對(duì)蝦平均體重動(dòng)態(tài)變化

2.3 血清免疫指標(biāo)

2.3.1 益生菌對(duì)南美白對(duì)蝦AKP 活性的影響 由圖3 可 以 看 出，從5 月5 日（養(yǎng)殖第20天）起，試驗(yàn)組AKP 活性就已顯著高于對(duì)照組（P ＜0.05），且隨著益生菌含量增加，AKP 活性升高幅度明顯，3 個(gè)試驗(yàn)組AKP 活性均顯著大于對(duì)照組（P ＜0.05），且對(duì)照組AKP 活性在整個(gè)試驗(yàn)周期內(nèi)增長(zhǎng)緩慢，而添加益生菌的試驗(yàn)組活性升高明顯。整個(gè)試驗(yàn)期間試驗(yàn)組C 和試驗(yàn)組B 均與試驗(yàn)組A 有顯著差異（P ＜0.05），且添加益生菌試驗(yàn)組一直顯著高于對(duì)照組（P ＜0.05）。

圖3 益生菌對(duì)南美白對(duì)蝦對(duì)蝦AKP 影響

2.3.2 益生菌對(duì)南美白對(duì)蝦ACP 活性的影響 圖4 可見(jiàn)，監(jiān)測(cè)初始（5 月5 日），添加益生菌的試驗(yàn)組ACP 活性顯著大于對(duì)照組（P ＜0.05），試驗(yàn)組B 活性最大，顯著大于除試驗(yàn)組C 外的其他各組（P ＜0.05）。6 月15 日試驗(yàn)組B 的ACP 活性活性達(dá)到最大。

圖4 益生菌對(duì)南美白對(duì)蝦對(duì)蝦ACP 影響

2.3.3 益生菌對(duì)南美白對(duì)蝦POD 活性的影響 圖5 所示，投喂初期益生菌試驗(yàn)組對(duì)南美白對(duì)蝦POD 活性影響不明顯，各組未出現(xiàn)顯著差異（P ＞0.05）。隨著試驗(yàn)的進(jìn)行，試驗(yàn)組POD 活性升高趨勢(shì)明顯，到5 月25 日（第41 天）試驗(yàn)B 組和C 組的POD 活性顯著大于對(duì)照組（P ＜0.05），6 月15 日（第62 天）所有益生菌試驗(yàn)組的POD活性均顯著高于對(duì)照組（P ＜0.05）。

3 討論與小結(jié)

圖5 益生菌對(duì)南美白對(duì)蝦對(duì)蝦POD 影響

在水產(chǎn)品及蝦類實(shí)際養(yǎng)殖生產(chǎn)中，成活率和生長(zhǎng)速度是判斷養(yǎng)殖效益的重要指標(biāo)。本試驗(yàn)顯示，益生菌試驗(yàn)組的南美白對(duì)蝦成活率均高于對(duì)照組，且試驗(yàn)期間成活率的變化隨益生菌添加量的增加有增大趨勢(shì)。生長(zhǎng)指標(biāo)方面，益生菌試驗(yàn)組相較于對(duì)照組南美白對(duì)蝦體長(zhǎng)體重增加更快，餌料系數(shù)更低，實(shí)際生產(chǎn)中試驗(yàn)組能提前上市，從而達(dá)到降低相關(guān)管理和飼料等成本，增加收益效果。同時(shí)本試驗(yàn)在基礎(chǔ)日糧中添加益生菌后，其表現(xiàn)出的腥香味更加濃郁，這對(duì)動(dòng)物飼料，尤其是水產(chǎn)飼料的誘食作用至關(guān)重要。

益生菌作為目前抗生素的主要替代品之一，其主要作用主要表現(xiàn)在防治動(dòng)物消化道疾病、促進(jìn)消化吸收和提高動(dòng)物體免疫能力等方面（周國(guó)勤等，2006），近年來(lái)得到快速的推廣應(yīng)用和發(fā)展（盧國(guó)民等，2014）。高進(jìn)（2010）在大黃魚基日糧中添加不同梯度的益生菌后發(fā)現(xiàn)，益生菌能顯著提高大黃魚稚魚的存活能力和抗脅迫能力。類似結(jié)果也在對(duì)大菱鲆（高鳳祥等，2011）、草魚（沈文英等，2012）、青魚（沈斌乾等，2013）、吉富羅非魚（劉小玲等，2013）等水產(chǎn)品的飼料營(yíng)養(yǎng)劑研究中得出。本試驗(yàn)中，各試驗(yàn)組南美白對(duì)蝦的成活率和生長(zhǎng)性能均優(yōu)于對(duì)照組，與以往得出結(jié)論一致。

另外的研究也報(bào)道，養(yǎng)殖青魚的體增重和飼料系數(shù)未受到飼料中不同濃度的枯草芽孢桿菌的顯著影響（沈斌乾等，2013），養(yǎng)殖的吉富羅非魚增重和飼料系數(shù)也未在不同濃度的嗜酸乳酸菌下產(chǎn)生顯著變化（劉小玲等，2013），而枯草芽孢桿菌顯著提高凡納濱對(duì)蝦的生長(zhǎng)性能（WGR、SGR），但未影響飼料系數(shù)（Zokaeifar 等，2012）。上述研究結(jié)果的差異可能是養(yǎng)殖環(huán)境、使用益生菌種類和添加量或試驗(yàn)對(duì)象規(guī)格的不同引起（程遠(yuǎn)等，2014）。過(guò)往研究得出益生菌促生長(zhǎng)的機(jī)理主要在于進(jìn)入動(dòng)物消化道的益生菌易吸收，且富含優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)，其次益生菌能在水產(chǎn)動(dòng)物消化道定植一段時(shí)間，從而能有效的對(duì)抗有害菌，保證腸內(nèi)菌群的平衡，有益于動(dòng)物對(duì)飼料營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收（郭升偉，2010）。除此之外，腸道內(nèi)的益生菌在魚體腸道內(nèi)會(huì)分泌酶類，其中就有能將日糧中某些大分子營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)酶解成小分子，幫助魚類消化吸收。

酸性磷酸酶（ACP）、過(guò)氧化物酶（POD）和堿性磷酸酶（AKP）等非特異性免疫因子的水平在一定程度上反映甲殼動(dòng)物機(jī)體免疫能力大小（沈文英，2012）。過(guò)氧化氫酶（POD）是一種抗氧化酶，是對(duì)蝦重要的防御和識(shí)別系統(tǒng)（孫國(guó)銘，2002），其通過(guò)清除機(jī)體內(nèi)的超氧自由基來(lái)避免機(jī)體內(nèi)生物分子損傷。堿性磷酸酶（AKP）是一種膜結(jié)合酶，參與機(jī)體內(nèi)物質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝、轉(zhuǎn)化魚類骨骼發(fā)育所需的鈣（Blasco，1993）。酸性磷酸酶（ACP）也能催化磷酸單脂的水解，在動(dòng)物體內(nèi)直接參與磷酸基團(tuán)的運(yùn)轉(zhuǎn)（劉樹(shù)青等，1999）。

試驗(yàn)周期內(nèi)，試驗(yàn)組的酸性磷酸酶（ACP）、過(guò)氧化物酶（POD）和堿性磷酸酶（AKP）均顯著高于對(duì)照組。說(shuō)明本試驗(yàn)中益生菌在南美白對(duì)蝦大棚養(yǎng)殖中的應(yīng)用在一定程度上能改善白對(duì)蝦體內(nèi)微生物的平衡，起到提高南美白對(duì)蝦成活率和生長(zhǎng)的作用；同時(shí)，益生菌通過(guò)自身成分來(lái)刺激非特異性免疫系統(tǒng)，提高養(yǎng)殖南美白對(duì)蝦抗應(yīng)激和免疫能力，進(jìn)一步提高南美白對(duì)蝦的養(yǎng)殖效益。