謝忠民，朱 旬*

（1.鹽城市婦幼保健醫(yī)院乳腺外科，江蘇 鹽城 224002； 2.蘇州大學(xué)附屬第二醫(yī)院普外科，江蘇 蘇州 215006）

FBXL5在多種癌細胞系中異常表達，其可以識別和降解多種癌蛋白，從而參與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)、DNA損傷修復(fù)、轉(zhuǎn)錄調(diào)控等過程，參與對腫瘤發(fā)生發(fā)展的調(diào)控[1]。本實驗旨在探討FBXL5在三陰性乳腺癌組織中的表達情況，并探索其機制與價值。

1 資料和方法

1.1 一般資料

收集2014年8月～2017年8月鹽城市婦保院收治的病理學(xué)檢查證實的女性乳腺癌患者36例，術(shù)中選取癌組織（實驗組）及癌旁3 cm以上病理學(xué)檢測為正常組織（對照組）各一塊，大小約0.5×0.5×0.2 cm，并將新鮮標本妥善凍存于-80℃冰箱內(nèi)?；颊咝g(shù)前均未接受全身放化療、內(nèi)分泌等治療。

1.2 細胞的培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染

MDA-MB-231乳腺癌細胞在含10%的小牛血清的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，穩(wěn)定傳代。

1.3 侵襲實驗

在細胞轉(zhuǎn)染后進行Transwell小室遷移實驗。

1.4 劃痕實驗

使用ImageJ軟件計算細胞愈合率

1.5 蛋白表達測定

乳腺癌、癌旁組織及細胞組織裂解，收集蛋白。

1.6 統(tǒng)計學(xué)分析

實驗采用SPSS 17.0軟件統(tǒng)計分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 FBXL5的mRNA和蛋白水平在乳腺癌細胞及正常組織細胞中表達水平

結(jié)果發(fā)現(xiàn)FBXL5在乳腺癌組織中的蛋白水平表達量（0.076±0.018）明顯低于癌旁組織中的（0.150±0.020）蛋白表達量，且表達差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。運用RT-PCR的方法檢測了36例癌組織與癌旁組織中的FBXL5的mRNA水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)BXL5的mRNA水平在癌組織中降低，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001）。

2.2 FBXL5蛋白水平在不同分子分型的細胞系中表達

本實驗分別對4個不同分子分型的細胞系中表達的FBXL5進行檢測。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，其在三陰性乳腺癌細胞中，F(xiàn)BXL5的表達水平降低最明顯，且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

3 討 論

乳腺癌是女性高發(fā)的惡性腫瘤，嚴重威脅女性健康。三陰性乳腺癌較其他類型乳腺癌有更強的轉(zhuǎn)移能力。其最重要的是EMT過程，使得細胞遷移能力增強。因此，對腫瘤細胞EMT過程中發(fā)揮關(guān)鍵調(diào)控作用的因子及機制進行研究，有重要意義

E3泛素連酶泛素化修飾密切參與了細胞周期調(diào)控、DNA修復(fù)及免疫等過程。已有研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)BXL5在胃癌、肺癌等癌細胞系中異常表達，F(xiàn)BXL5在乳腺癌中的表達及研究甚少，故本實驗主要為探討FBXL5在三陰性乳腺癌組織中的表達情況，并探索其機制與治療價值。本研究發(fā)現(xiàn)，過表達FBXL5可以抑制三陰性乳腺癌細胞的侵襲及轉(zhuǎn)移能力。

總之，我們發(fā)現(xiàn)FBXL5參與了對腫瘤EMT的調(diào)控，其可能的機制是抑制MAPK通路的活化，調(diào)節(jié)E-cadherin及Vimentin的表達而實現(xiàn)的。我們的研究可能為抑制乳腺癌的EMT提供新的干預(yù)靶點，而提高乳腺癌患者的預(yù)后。