高紅旗 支 勇 曹式麗

天津中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院 天津 300193

系膜增生性腎小球腎炎（MsPGN）是臨床常見的腎小球疾病的病理類型，在我國原發(fā)性腎病綜合征中MsPGN高達30%，是導致腎小球硬化，發(fā)展為終末期腎臟病的主要疾病。MsPGN的病理學特征為腎小球系膜細胞的異常增生和系膜基質的病理性積聚。在MsPGN的病變過程中，IL-1、IL-6等細胞因子起到重要作用。本研究采用抗大鼠胸腺細胞抗體（Anti-Thy-1）誘發(fā)MsPGN大鼠模型，觀察以辛通暢絡立法的中藥復方腎絡寧對血清、腎組織IL-1和IL-6表達的調節(jié)作用，以及對腎小球細胞外基質的影響。

1 實驗材料

1.1 實驗動物：健康雄性日本大耳白兔4只，體重1250±250g，普通級；遠交系健康雄性SD大鼠40只（10周齡/體重150±10g），幼齡SD大鼠10只（4周齡），SPF/VAF級。以上實驗動物均由中國醫(yī)學科學院放射醫(yī)學研究所動物中心提供(合格證號：SCXK津2005-0001)。

1.2 實驗試劑：完全福氏佐劑與不完全福氏佐劑（Sigma公司）；IL-1、IL-6試劑盒（尚柏生物醫(yī)學技術北京公司）。

1.3 實驗藥物：腎絡寧：由柴胡12g，生黃芪30g，黃芩、當歸、水蛭各10g，女貞子、澤蘭各15g，細辛3g等組成，煎煮濃縮(含0.85g生藥/ml)，裝瓶密封，置4℃冰箱保存?zhèn)溆谩Ｋ幬镔徸蕴旖蛑嗅t(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院中藥房，加工由天津中醫(yī)藥大學藥廠協助完成。貝那普利：瑞士諾華制藥有限公司產品，規(guī)格：10㎎/片，批號：06031404。

2 實驗方法

2.1 動物分組：40只大鼠適應性飼養(yǎng)1周后，按體重分層隨機分為正常組、模型組、西藥組和中藥組，每組各10只。實驗全程給予普通飼料喂養(yǎng)，自由進水。

2.2 模型復制：參考有關文獻復制抗Thy-1系膜增生性腎炎模型大鼠模型[1-2]。大鼠30只，經尾靜脈注射兔抗鼠胸腺細胞抗體血清（ATS），每周1次，連續(xù)3周，初次注 射 ATS（1:32）1.0ml/只 ，加 強 注 射 ATS（1:16）1.0ml/只。

2.3 給藥方法：自MsPGN模型制備第1天起，中藥組每日1次以3.5g/100g體重灌服腎絡寧，西藥組每日1次以0.33mg/100g體重灌服貝那普利混懸液，對照組與模型組每日1次灌服等量生理鹽水，共進行6周。實驗全程各組均給予普通飼料喂養(yǎng)，自由進水。實驗過程中因灌胃誤入氣管，中藥組于治療第4周初死亡1只，其他各組實驗過程中無動物死亡。

2.4 標本采集：于給藥后第6周末殺檢全部大鼠，打開腹腔，摘取腎臟，迅速剪取部分腎組織放入凍存管并置于液氮中凍存，用于腎組織IL-1、IL-6檢測；另再取部分腎臟組織置于10%福爾馬林中固定，用于腎小球細胞外基質的檢測。

2.5 觀測指標：血清和腎組織IL-1、IL-6檢測：采用雙抗體夾心ELISA法；腎小球細胞外基質檢測：采用免疫組化ABC法。

2.6 病理圖像分析：采用HMIAS-2000高清晰度彩色病理圖像分析系統，于400倍高倍鏡下，每個標本隨機選取10個視域，測量細胞外基質表達的陽性反應物信號的總面積和陽性信號物質占腎小球體的面積百分比，評價各組腎小球ECM增殖程度。

2.7 統計學方法：實驗數據應用SPSS13.0統計軟件進行分析，各組實驗數據以平均數±標準差（xˉ±s）表示，對實驗數據進行單因素方差分析，檢驗結果以P＜0.05為有統計學意義。

3 實驗結果

3.1 各組血清、腎組織IL-1、IL-6的表達比較：見表1。

表1 各組血清、腎組織IL-1、IL-6的表達比較（xˉ± s，pg/ml）

3.2 腎組織細胞外基質分析結果：見表2。

表2 腎組織細胞外基質增殖程度（xˉ±s，%）

4 討論

IL-1、IL-6是MsPGN中參與免疫調節(jié)和介導炎癥反應的細胞因子，也是重要的系膜細胞增殖促進因子，是導致ECM積聚發(fā)展成腎小球硬化的重要原因。IL-1和IL-6是促進系膜細胞增殖的重要細胞因子，而且系膜細胞通過自分泌方式產生具有生物活性的IL-1并表達其受體，如在免疫復合物性腎炎大鼠腎小球系膜細胞的IL-1 mRNA表達量比正常大鼠增加2～3倍，提示系膜細胞能夠持續(xù)分泌大量的IL-1，刺激系膜細胞增殖及增加ECM合成[3]。IL-6也是系膜細胞自分泌調節(jié)因子，通過參與和維持系膜細胞高活性狀態(tài)的自分泌途徑，促進系膜細胞和ECM增生，IL-6在腎臟中的高表達與腎小球系膜基質增生呈正相關[4]。因此，通過調控IL-1、IL-6的表達，抑制系膜細胞增殖，對防治MsPGN具有重要意義。

中醫(yī)學認為，絡脈是氣血運行通道，亦是病邪傳變途徑，具有邪易滯易瘀、邪易入難出、邪易積成形的病理特點[5]，腎絡郁滯是MsPGN等多種慢性腎臟病的共同病理基礎，腎絡寧是以“辛通腎絡，標本兼治”為治法的中藥復方制劑。方中柴胡、黃芩疏利少陽，樞轉氣機；黃芪、當歸、女貞子補益脾腎，扶正理虛；澤蘭、細辛、水蛭辛通暢絡，化瘀消滯。諸藥協同，疏導調節(jié)，養(yǎng)臟和絡，促進腎絡氣血調暢。本課題前期研究提示，以辛通暢絡立法的中藥復方腎絡寧，具有減輕腎小球FN、LN、ColIV等ECM成分的表達量，改善系膜基質增生的作用[6-7]。本研究結果顯示,腎絡寧能夠顯著降低MsPGN大鼠血清和腎組織IL-1、IL-6的表達量，減輕腎組織細胞外基質的增殖程度，提示抑制MsPGN大鼠IL-1、IL-6的表達，減輕其對系膜細胞增殖的病理性作用，阻抑腎小球系膜基質增生，是腎絡寧防治MsPGN的重要機制。

5 參考文獻

[1]Nomura K,Liu N,Nagai K,et al.Roles of coagulation pathway and factor Xa in rat mesangioproliferative glomerulonephritis[J].Lab Invest，2007,87(2)：150-160.

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[3]Werber HI,Emancipator SN,Tykocinski ML,et al.The interleukin 1 gene is expressed by rat glomerular mesangial cells and is augmented in immune complex glomerulonephritis[J].J Immunol,1987，138(10)：3207-12.

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[5]王少墨,王慶其.絡脈理論與腫瘤臨床運用芻議[J].浙江中醫(yī)雜志,2012,47(3)：157-159.

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[7]竇一田，高先樓，曹式麗．腎蘇Ⅱ對系膜增生性腎炎模型大鼠腎病變及白細胞介素-6的影響[J].中醫(yī)雜志，2011，52(13)：1131-1134.