黃鋆　石安然　肖思聰

[摘要] 目的 應(yīng)用EP10-A3文件對(duì)酶法檢測糖化白蛋白（GA）的臨床應(yīng)用性能進(jìn)行初步評(píng)價(jià)，并對(duì)糖尿病患者糖化血紅蛋白（HbA1c）和糖化白蛋白（GA）的一致性、相關(guān)性及陽性率進(jìn)行分析，評(píng)價(jià)其臨床應(yīng)用價(jià)值。方法 使用酶法測定GA濃度，采用美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（CLSI）頒布的《定量臨床檢驗(yàn)方法的初步評(píng)價(jià);批準(zhǔn)指南EP10-A3》文件中規(guī)定的方法對(duì)其總不精密度、非線性、偏差、互染率、斜率、漂移等指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià)。并通過測定90例糖尿病患者的HbA1c和GA濃度，對(duì)兩者相關(guān)性、一致性以及陽性率進(jìn)行分析。 結(jié)果 低，中，高GA樣本濃度偏差分別為-0.61，-0.28，0.34 μmol/L。總不精密度分別為1.48%，1.37%，0.84%。斜率、互染率、非線性、漂移（t=1.380，0.097，-1.370，0.013）差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。GA與HbA1c回歸分析方程為Y=2.805X-0.268（r2= 0.714）。GA與HbA1c一致性采用Kappa檢驗(yàn)，Kappa值為0.655，說明兩者一致性較好。HbA1c檢測結(jié)果陽性率與GA檢測結(jié)果陽性率，兩者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。 結(jié)論 糖化白蛋白試劑盒準(zhǔn)確度、精密度良好，均在允許范圍內(nèi)，線性良好，攜帶污染率低，穩(wěn)定性較好，性能指標(biāo)符合臨床應(yīng)用要求。GA可作為糖尿病診斷的補(bǔ)充指標(biāo)，并用于臨床糖尿病療效監(jiān)測。

[關(guān)鍵詞] 糖化白蛋白;糖化血紅蛋白;方法學(xué)評(píng)價(jià);糖尿病

[中圖分類號(hào)] R587.1;R446.1? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1672-4062（2019）12（b）-0011-04

Preliminary Evaluation of Glycosylated Albumin Assay and Its Correlation with Glycosylated Hemoglobin

HUANG Yun1， SHI An-ran1， XIAO Si-cong2

1.Department of Clinical Laboratory， Union Hospital， Fujian Medical University， Fuzhou， Fujian Province， 350001 China; 2.School of Medical Technology and Engineering， Fujian Medical University， Fuzhou， Fujian Province， 350000 China

[Abstract] Objective To evaluate the clinical application performance of enzymatic detection of glycated albumin （GA） by EP10-A3 and to compare the consistency and correlation between glycated hemoglobin （HbA1c） and glycated albumin （GA） in diabetic patients. The positive rate was analyzed to evaluate its clinical application value. Methods The GA concentration was determined by enzymatic method， and the total imprecision， nonlinearity， and the method specified in the “Preliminary Evaluation of Quantitative Clinical Test Methods; Approval Guide EP10-A3” document issued by the American Committee for Clinical Laboratory Standards （CLSI）. Indicators such as deviation， mutual dyeing rate， slope， and drift were evaluated. The correlation， consistency and positive rate of the two patients were determined by measuring the concentrations of HbA1c and GA in 90 patients with diabetes. Results It showed low， medium and high GA sample concentration deviations of -0.61， -0.28， and 0.34 μmol/L， respectively. The total imprecision was 1.48%， 1.37%， and 0.84%， respectively. The differences in slope， mutual staining rate， nonlinearity， and drift（t=1.380， 0.097， -1.370，0.013） were not statistically significant （P>0.05）. The regression equation for GA and HbA1c is Y=2.805X-0.268 （r2=0.714）. The consistency of GA and HbA1c was Kappa test， and the Kappa value was 0.655， indicating that the two were consistent. There was no significant difference between the positive rate of HbA1c test and the positive rate of GA test （P>0.05）. Conclusion The glycated albumin kit has good accuracy and precision， all within the allowable range， good linearity， low carrying pollution rate， good stability， and performance indicators meet the requirements of clinical application. GA can be used as a supplementary indicator for the diagnosis of diabetes and used for clinical diabetes monitoring.

[Key words] Glycated albumin; Glycated hemoglobin; Methodological evaluation; Diabetes

隨著人們生活水平的提升，糖尿病患者的數(shù)目也在不斷增加。有報(bào)告顯示[1]，全球患糖尿病人數(shù)已經(jīng)超過1.2億，而我國糖尿病發(fā)病率高達(dá)9.6%。眾所周知，糖尿病是一種內(nèi)分泌代謝障礙性疾病，主要與長期血糖控制不佳有關(guān)[2]。長期的高血糖容易引發(fā)糖尿病足和視網(wǎng)膜病變等并發(fā)癥，因此及時(shí)調(diào)整血糖，使其保持在正常水平具有重要的意義。血糖檢測是糖尿病治療的重要風(fēng)向標(biāo)，能幫助醫(yī)生及時(shí)了解患者的疾病發(fā)展情況，制定合理的給藥方案從而給予更好的治療[3]。

糖化白蛋白（glycated albumin，GA）測定是以糖化血清白蛋白測定值與血清總白蛋白值（ALB）之間的比值來表示GA的濃度，可反映人體過去2～3周前的平均血糖水平。《中國血糖監(jiān)測臨床應(yīng)用指南》（ 2015年）已將其列為血糖控制監(jiān)測的有效方法之一[4]。有文獻(xiàn)[5]表明，對(duì)2型糖尿病患者采用胰島素加強(qiáng)療法進(jìn)行初始治療，治療2周后，GA的變化率約為糖化血紅蛋白（Glycated hemoglobin，HbA1c）的10倍左右。因此，GA能在血糖變化最顯著時(shí)反映血糖濃度，特別適合初診為糖尿病的患者降糖治療的療效觀察。對(duì)于血紅蛋白異常和肝功能不佳的糖尿病患者，用GA監(jiān)測治療效果具有更好的價(jià)值。GA的檢測方法主要有干化學(xué)法、固體酶法、高壓液相色譜法（ HPLC）和液體酶法等，目前臨床應(yīng)用最廣泛的方法為改良的液體酶法。

EP10-A3是臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)（CLSI）對(duì)一項(xiàng)新的體外診斷檢測方法、試劑盒或或儀器設(shè)備進(jìn)行初步評(píng)價(jià)的方案。該方案主要是通過實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和數(shù)據(jù)分析，對(duì)某項(xiàng)目檢測系統(tǒng)進(jìn)行單因素短期評(píng)價(jià)，在進(jìn)行完整方法學(xué)評(píng)價(jià)前用來快速鑒別該方法是否適用于臨床實(shí)踐。該法簡單便利，操作時(shí)間短暫，臨床實(shí)用性較高。

通過EP10-A3文件初步評(píng)價(jià)酶法測定GA的方法學(xué)性能，驗(yàn)證其作為臨床應(yīng)用性能，并分析糖尿病患者 HbA1c和 GA 的一致性、相關(guān)性，為糖尿病早期診斷和治療效果監(jiān)測提供更有意義的借鑒。

1? 材料與方法

1.1? 樣品來源

1.1.1? 患者樣品? 收集2019年1—3月在該院明確診斷為糖尿病患者（診斷參照2013年WHO糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)），并排除存在血紅蛋白低（<90 g/L）或白蛋白低（<30 g/L）和變異體等影響檢測結(jié)果因素的患者共90例。這90例患者中，男性47例，女性43例，男∶女=1.09∶1，年齡31～94歲，中位年齡57歲。

1.1.2? 用于方法學(xué)評(píng)估樣品? 日本積水株式會(huì)社定值質(zhì)控血清（批號(hào)：805RLP 使用期限2020.02）。GA低值樣品標(biāo)定值為13.4%。GA高值樣品標(biāo)定值為28.5%。將上述高值樣品和低值樣品等比混合為中值樣品，GA標(biāo)定值為21%。高、中、低3個(gè)濃度的樣品每種按0.1 mL分裝，放入-40℃冰箱保存。

1.2? 儀器

羅氏Modular P8000全自動(dòng)生化分析儀檢測GA，伯樂Variant II Turbo糖化血紅蛋白分析儀檢測HbA1c。

1.3? 試劑

1.3.1? GA試劑? GA酵素液（批號(hào)：805RLP），ALB顯色液（批號(hào)：805RLP），試劑：日本積水株式會(huì)社。

1.3.2? HbA1c試劑? （批號(hào)：64182048），試劑：伯樂生命醫(yī)學(xué)產(chǎn)品有限公司

1.4? 方法

①測定方法及順序：依照EP10-A3文件的規(guī)定，每天測定10個(gè)樣品，按中、高、低、中、中、低、低、高、高、中的順序測定各GA質(zhì)控品濃度，共測定5 d。其中第1個(gè)中值作為測定起始用，不在統(tǒng)計(jì)范圍內(nèi)，后9個(gè)數(shù)據(jù)中的任何1個(gè)數(shù)據(jù)不合格，都必須放棄該批次的所有數(shù)據(jù)，重新測定。

②判斷標(biāo)準(zhǔn)：按照 CLSI EP10-A3 文件計(jì)算總不精密度以美國臨床實(shí)驗(yàn)室改進(jìn)修正法案（CLIA'88）分析質(zhì)量要求規(guī)定的允許誤差的1/2，判斷檢測系統(tǒng)精密度的可接受性。以各濃度5 d檢測結(jié)果的算術(shù)平均值與其對(duì)應(yīng)設(shè)定值計(jì)算偏移，以CLIA'88 分析質(zhì)量要求為允許誤差，判斷檢測系統(tǒng)偏移的可接受性; 截距、斜率、非線性、互染率、漂移性按 CLSI EP10-A3 文件計(jì)算及判斷。

③分別檢測90例糖尿病患者血清標(biāo)本的HbA1c和GA值。

1.5? 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)算偏差、總不精密度。對(duì)斜率、互染率、非線性、攜帶污染作回歸分析，其校正回歸值做t檢驗(yàn)，當(dāng)t<-4.6或t>4.6時(shí)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。GA和HbA1c之間的相關(guān)性采用回歸分析。

2? 結(jié)果

2.1? 應(yīng)用EP10-A3進(jìn)行初步評(píng)價(jià)結(jié)果

2.1.1? 偏差分析? 以各濃度樣本5 d的測定結(jié)果均值與其對(duì)應(yīng)設(shè)定值計(jì)算偏差，偏差均未超過設(shè)定的±5%范圍，臨床均可接受。見表1。

表1? ?GA偏差結(jié)果分析[（x±s），%]

2.1.2? 總不精密度分析? 按照EP10-A3文件提供的方法，計(jì)算總不精密度。各濃度總不精密度均未超過允許誤差，臨床均可接受。見表2。

表2? ? GA總不精密度分析結(jié)果

2.1.3? 測定結(jié)果多元回歸分析? 按EP10-A3中的方法對(duì)斜率、互染率、非線性、漂移性差異進(jìn)行多元回歸計(jì)算，結(jié)果顯示斜率、互染率、非線性、漂移的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（-4.60.05）。見表3。

表3? ?多元回歸分析匯總

2.2? GA和HbA1c檢測結(jié)果相關(guān)性分析

GA和HbA1c檢測結(jié)果的回歸分析方程為Y = 2.805X-0.268，相關(guān)系數(shù)（r2=0.714），見圖1。

圖1? ?GA和HbA1c相關(guān)性分析

2.3? GA和HbA1c的一致性分析

以超過GA和HbA1c參考區(qū)間的上限（ GA>16%;HbA1c>6.0%）判定為陽性，90例明確診斷為糖尿病的患者中 HbA1c陽性結(jié)果有59例（65.56%），陰性有31例（34.44%）。GA 陽性結(jié)果有59例（65.56%），陰性有31例（34.44%）。兩種方法陽性符合率57.8%，陰性符合率為26.6%，總符合率為84.4%。一致性檢驗(yàn)Kappa值為0.655，提示兩種方法一致性較好。見表4。

表4? ?GA和HbA1c檢測結(jié)果比較[n（%）]

2.4? GA和HbA1c檢測結(jié)果陽性率比較

HbA1c檢測結(jié)果陽性率與GA檢測結(jié)果陽性率，兩者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表5。

表5? ?GA和HbA1c檢測結(jié)果陽性率比較（例）

3? 討論

糖化血清白蛋白對(duì)于血糖監(jiān)控，指導(dǎo)臨床診斷，評(píng)價(jià)降糖療效指導(dǎo)治療，對(duì)糖尿病血管并發(fā)癥的評(píng)估都有很好的臨床意義。該研究通過參照EP10-A3文件對(duì)酶法測定糖化白蛋白的臨床性能初步評(píng)估。偏差評(píng)價(jià)結(jié)果顯示低、中、高濃度的絕對(duì)偏差和總不精密度均在允許范圍之內(nèi)，能達(dá)到臨床檢測的要求。并且多元回歸總結(jié)分析結(jié)果顯示斜率、互染率、非線性、漂移性的t 值均在-4.6～4.6之間，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），說明試劑準(zhǔn)確度好，線性能力良好，攜帶污染率低，能較好地滿足臨床常規(guī)檢測要求。使用EP10-A3文件能夠在短期內(nèi)對(duì)單個(gè)因素進(jìn)行較為準(zhǔn)確的判斷，方便省時(shí)，受到外界因素影響較小，分析結(jié)果較為全面。但這僅僅只是實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)累積分析的開始，想要進(jìn)行完整的方法學(xué)評(píng)價(jià)，還需要各個(gè)文件對(duì)單個(gè)項(xiàng)目的更加精確完整的分析。例如評(píng)價(jià)線性可以使用EP-6;評(píng)價(jià)干擾影響可以使用EP-7和EP-14;評(píng)價(jià)總誤差可以使用EP-21;還可以使用EP-15進(jìn)行恒定和比例偏移的評(píng)價(jià)。另外，還應(yīng)當(dāng)著重研究如何實(shí)現(xiàn)糖化白蛋白的標(biāo)準(zhǔn)化?？梢酝ㄟ^長期對(duì)大量自然人群的隨訪調(diào)查，然后進(jìn)行多中心協(xié)作研究。標(biāo)準(zhǔn)操作和標(biāo)準(zhǔn)可以通過質(zhì)譜技術(shù)建立[6]。

在該次研究中HbAlc與GA呈正相關(guān)（r2=0.714），說明二者有一定的關(guān)聯(lián)性，同時(shí)通過采用Kappa一致性檢驗(yàn)和配對(duì)χ2檢驗(yàn)，得出兩者一致性較好，陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。糖化血紅蛋白（HbA1c）是血糖與血紅蛋白結(jié)合的產(chǎn)物，其含量主要取決于血糖濃度與血紅蛋白的接觸時(shí)間。由于人體內(nèi)紅細(xì)胞的壽命約為120 d，因此HbA1c水平反映的是檢測前2～3個(gè)月內(nèi)的平均血糖水平[7]。HbA1c優(yōu)點(diǎn)是不受短期內(nèi)血糖變化的影響，可作為長期血糖控制的重要監(jiān)測指標(biāo)。糖化血清白蛋白（GA）可反映人體過去2～3周前的平均血糖水平，可評(píng)估患者短期內(nèi)糖代謝控制情況。糖化白蛋白對(duì)于監(jiān)測血糖水平、評(píng)估糖尿病及其并發(fā)癥、評(píng)估血糖控制的療效和指導(dǎo)臨床診斷方面擁有較高的臨床意義。由于HbA1c水平因?yàn)榉从车氖乔?～4個(gè)月血糖水平，無法顯示短期內(nèi)血糖的波動(dòng)和變化，對(duì)于血糖水平的評(píng)估存在“延遲效應(yīng)”，而不能及時(shí)顯現(xiàn)出治療效果。對(duì)于短期住院治療的糖尿病患者，GA可能比HbA1c更具有參考價(jià)值[8-9]。另外有研究報(bào)道[10]指出GA不僅能反映平均血糖水平，更能反映餐后血糖水平。HbA1c檢測還會(huì)受變異體和溶血性貧血及腎病貧血等能縮短紅細(xì)胞壽命的疾病的影響，不能真實(shí)反映血糖控制水平[11]。此時(shí)GA測定不受這些因素的影響，應(yīng)用GA來調(diào)整降糖方案會(huì)更有幫助。因此GA是一個(gè)很有意義的臨床診斷治療的補(bǔ)充。

GA的檢測結(jié)果同樣會(huì)受到血清白蛋白更新速度、體質(zhì)指數(shù)（BMI）、ALB 代謝等因素的影響[12]。因此。臨床上可通過實(shí)際情況選擇檢測HbA1c或GA，用來排除干擾因素的影響，從而獲得正確的血糖監(jiān)測結(jié)果。但是慢性肝病患者體內(nèi)白蛋白合成能力降低導(dǎo)致白蛋白半衰期延長，又因脾機(jī)能亢進(jìn)使紅細(xì)胞半衰期縮短，這些導(dǎo)致HbA1c較血糖水平偏低，GA水平較血糖水平偏高，所以對(duì)慢性肝病患者的血糖監(jiān)控較困難，目前尚無準(zhǔn)確反映血糖水平的標(biāo)志物。

[參考文獻(xiàn)]

[1]? 朱景麗，冀麗彬，孫東梅.糖化血清蛋白及血糖、糖化血紅蛋白聯(lián)合測定對(duì)糖尿病診治的臨床意義[J].中外女性健康研究，2016（10）：204-207.

[2]? 沈霞，王連升，黎明.酶法測定糖化白蛋白及其臨床意義[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2006，21（2）：132-135.

[3]? 汪梅.糖尿病病人血糖監(jiān)測的重要性[J].臨床醫(yī)學(xué)，2015，（12）：93-94.

[4]? 中華醫(yī)學(xué)會(huì)糖尿病學(xué)分會(huì).中國血糖監(jiān)測臨床應(yīng)用指南[J].糖尿病臨床，2016，10（5）：205-218.

[5]? 李青，吳松華，潘潔敏，等.酶法測定糖化血清白蛋白的初步評(píng)價(jià)[J].上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2007，27（7）： 785-787.

[6]? 趙亮，魯旭，肖虎，等.應(yīng)用EP10-A2對(duì)膠體金免疫層析法測胃蛋白酶原進(jìn)行方法學(xué)評(píng)價(jià)[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2017， 38（5）：622-624.

[7]? 賈偉平， 李紅. 中國血糖監(jiān)測臨床應(yīng)用指南（2011年版）[J]. 中華醫(yī)學(xué)雜志， 2011， 3（10）：62-72.

[8]? 李青，吳松華，屠印芳，等. 評(píng)價(jià)糖尿病患者住院期間降糖療效的有效指標(biāo)——糖化血清白蛋白[J]. 上海醫(yī)學(xué)， 2009， 32（12）：1083-1085.

[9]? 2型糖尿病患者液態(tài)酶法測定糖化血清白蛋白的臨床觀察[J]. 中華醫(yī)學(xué)雜志， 2009， 89（22）：1570-1572.

[10]? Rhee SY， Woo JT.The Prediabetic Period： Review of Clinical Aspects[J].Diabetes & Metabolism Journal， 2011， 35（2）：107-116.

[11]? Klingensmith， Gestational diabetes mellitus， Type SOIT. Standards of Medical Care in Diabetes[J].Diabetes Care， 2006， 33（Suppl 1）：S11-S61.

[12]? Koga M. Glycated albumin; clinical usefulness[J].Clinica Chimica Acta， 2014， 433（7）：96-104.

（收稿日期：2019-09-19）