劉虹 趙俊

甜蜜素的全稱為環(huán)己氨基磺酸鈉，又稱甜精，近年來一直廣泛用于食品工業(yè)中。《國(guó)標(biāo)檢測(cè)方法》為：利用甜精在H+介質(zhì)中與NaNO2反應(yīng)生成環(huán)己醇亞硝酸酯，經(jīng)正己烷提取后，通過GC測(cè)定正己烷中甜精的濃度。但是該衍生反應(yīng)的反應(yīng)過程復(fù)雜，副產(chǎn)物繁多。通過控制反應(yīng)條件（如：反應(yīng)溫度、H2SO4溶液和NaNO2溶液的用量、提取時(shí)間等），采用GC檢測(cè)衍生物的A值，得到較為理想的S值和RSD值。

實(shí)驗(yàn)儀器與試劑

儀器：帶有FID的GC7890；PF1XXXXM1超純水機(jī)；LT- BDX 120F精密可編程熱風(fēng)循環(huán)烘箱；梅特勒MS 304S電子天平、賽多利斯CPA 225D電子天平（0.01 mg）。

試劑：正己烷、H2SO4溶液、NaNO2溶液和超純水，甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：SDC- 281220，純度99.52%，Stanford Analytical Chemicals。

實(shí)驗(yàn)方法

實(shí)驗(yàn)步驟。精確吸取配制好的10.00 mg/mL甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)溶液200 μL于50 mL比色管中，并用超純水定容至25 mL，移入5mL 200 g/L H2SO4溶液，漩渦混合后置于30 ℃下穩(wěn)定10 min，移入5 mL 50 g/ L NaNO2溶液，漩渦混合后迅速置于冰浴中反應(yīng)30 min，準(zhǔn)確移入10.00 mL正己烷，漩渦震蕩提取分層后，馬上取上層正己烷，用GC檢測(cè)。

儀器條件。Agilent7890，F(xiàn)ID，分流比49，進(jìn)樣口180℃ ，柱溫80℃，檢測(cè)器200℃，柱流量1.78mL/min，氫氣36mL/min，空氣320mL/min，1μL進(jìn)樣量。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

衍生化溫度的影響。其他操作步驟不變，加入H2SO4溶液后分別在10、20、30、40℃和50℃下穩(wěn)定10 min，進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果見圖1。

由圖1可知，隨著反應(yīng)溫度的上升，環(huán)己醇亞硝酸鈉的A值增大。溫度越大越有利于形成環(huán)己醇，但是溫度稍高重氮鹽不穩(wěn)定，會(huì)分解成正碳離子并釋放出氮?dú)?，有大量氣泡生成，溢出液面造成樣品的流失，?0 ℃是較為適宜的溫度。

酸度的影響。其他操作步驟不變，分別移入5mL 0、100、200、300 g/L和400 g/L H2SO4溶液后，在30 ℃下穩(wěn)定10 min，進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果見圖2。

由圖2可知，H2SO4的濃度從50～200 g/ L，環(huán)己醇亞硝酸酯的A值逐漸增大，200 g/L以上濃度峰面積有緩慢下降的趨勢(shì)。針對(duì)0.2 mg/mL甜蜜素，H2SO4的濃度在200 g/L最合適，利于衍生物的生成。

亞硝酸鹽用量的影響。其他操作步驟不變，移入5 mL 200 g/L H2SO4溶液，在30 ℃下穩(wěn)定10 min，分別移入1、2、3、4、5、7 min和10 mL 50g/L NaNO2溶液，進(jìn)行檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖3。

由圖3可知，隨著NaNO2溶液用量的增加，環(huán)己醇亞硝酸酯峰的A值增大，在5 mL用量時(shí)A值達(dá)到最大，而后A值迅速降低。針對(duì)0.2 mg/mL的甜蜜素，5 mL 50 g/L NaNO2溶液最合適。

冰浴中反應(yīng)時(shí)間的影響。其他操作步驟不變，移入5 mL 50g/L NaNO2溶液，漩渦混合后，分別在冰浴中反應(yīng)15，30，45，60 min，取正己烷檢測(cè)，結(jié)果如圖4。

由圖4可知，冰浴中反應(yīng)15～45 min環(huán)己醇亞硝酸酯的A值無明顯變化，45min 以后A值大幅度下降。所以冰浴中反應(yīng)15～45 min都可行。

漩渦振搖提取時(shí)間的影響。其他操作步驟不變，準(zhǔn)確移入10.00 mL正己烷，分別漩渦震蕩15、30、45、60、90、120、150 s和180 s后，立馬取正己烷檢測(cè)，結(jié)果見圖5。

由圖5可知，隨著提取時(shí)間的增加，環(huán)己醇亞硝酸酯的A值逐漸增大，當(dāng)提取時(shí)間在150s時(shí)A值逐漸趨于穩(wěn)定，故至少漩渦振搖150s。

線性、檢出限、準(zhǔn)確性、精密度。依據(jù)前六步選取的優(yōu)化條件，分別準(zhǔn)確吸取20、40、80、120、160 μL和200 μL于50 mL比色管中，以標(biāo)準(zhǔn)濃度的甜蜜素（mg/L）為x坐標(biāo)，環(huán)己醇亞硝酸酯的A值為y坐標(biāo)，作標(biāo)準(zhǔn)曲線，n=7（包括樣品空白），r=0.9997，回歸方程y=159.29 + 89.33x。通過使用S/N=3計(jì)算，獲得1.1μg的檢出限。平行測(cè)量3次，RSD=1.2%；重復(fù)測(cè)量3次，RSD=2.1%。

實(shí)驗(yàn)結(jié)論

優(yōu)化條件如下：（1）在30 ℃下反應(yīng)比較適宜。（2）H2SO4的濃度在200g/L時(shí)最合適。（3）5 mL 50 g/L NaNO2溶液最合適。（4）冰浴中反應(yīng)15～45min都可行。（5）至少漩渦振搖150s。

作者簡(jiǎn)介：

劉虹（1989-），女，碩士，助理工程師；專業(yè)方向?yàn)槭称窓z測(cè)。