王 崇 王秀華 劉 爽 桑松文 張慶利①

(1.青島海洋科學(xué)與技術(shù)試點(diǎn)國(guó)家實(shí)驗(yàn)室海洋漁業(yè)科學(xué)與食物產(chǎn)出過(guò)程功能實(shí)驗(yàn)室 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部海水養(yǎng)殖病害防治重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 青島市海水養(yǎng)殖流行病學(xué)與生物安保重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所 青島 266071；2.上海海洋大學(xué) 上海 201306)

對(duì)蝦偷死病(Covert mortality disease，CMD)是近年來(lái)嚴(yán)重危害中國(guó)對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)的一種新發(fā)疫病(章秋虎,2004; 邢華,2004; 徐志進(jìn)等,2009; Zhanget al,2014)。2003年或更早的時(shí)候，海南、廣西等地高密度池塘養(yǎng)殖的凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeus vannamei)出現(xiàn)“偷死”現(xiàn)象，2008～2009年該病在中國(guó)南方多 省市的養(yǎng)殖凡納濱對(duì)蝦中大規(guī)模暴發(fā)，2010年后開(kāi)始傳播到山東、河北和天津等地(Zhanget al,2017)。發(fā)病對(duì)蝦主要在池底深水區(qū)陸續(xù)死亡，不容易被觀察到，因此，被稱(chēng)為“偷死病”或“死底癥”(邢華,2004; 徐志進(jìn)等,2009; Zhanget al,2014)?；疾€(gè)體表現(xiàn)出肝胰腺顏色變淺、萎縮，空腸空胃，生長(zhǎng)緩慢等癥狀，很多時(shí)候還可見(jiàn)病蝦腹節(jié)肌肉不透明或局部發(fā)白。患病對(duì)蝦在水溫較高(28℃以上)時(shí)，死亡率升高，累計(jì)死亡率可達(dá)80%(Zhanget al,2014)。

Zhang等(2014)研究證實(shí)，CMD是由“偷死野田村病毒(Covert mortality nodavirus，CMNV)”引起的一種病毒性疾病。為了說(shuō)明該疫病的病原學(xué)特征，CMD又被稱(chēng)為病毒性偷死病(Viral covert mortality disease,VCMD)。CMNV屬于野田村病毒科α野田村病毒屬(Nodaviridae,Alphanodavirus)，是一種單鏈RNA病毒，病毒粒子為球形(二十面體)，無(wú)囊膜，蔗糖密度梯度離心純化的病毒粒子直徑約為32 nm。CMNV主要感染養(yǎng)殖蝦類(lèi)，目前尚未見(jiàn)有感染魚(yú)類(lèi)的報(bào)道。

對(duì)2013～2015年間在中國(guó)沿海11省市145個(gè)采樣點(diǎn)收集的發(fā)病蝦類(lèi)樣品開(kāi)展的分子流行病學(xué)研究顯示，養(yǎng)殖凡納濱對(duì)蝦、中國(guó)明對(duì)蝦(Fenneropenaeus chinensis)、日本囊對(duì)蝦(Penaeus japonicus)、斑節(jié)對(duì)蝦(Penaeus monodon)和羅氏沼蝦(Macrobrachium rosenbergii)中均可檢測(cè)到CMNV陽(yáng)性，其中，日本對(duì)蝦的CMNV陽(yáng)性檢出率高達(dá)60%，中國(guó)明對(duì)蝦和羅氏沼蝦的檢出率較低，分別為22%和24%；2013、2014和2015年樣品的CMNV陽(yáng)性檢出率分別為45.9%、27.9%和20.9%；來(lái)自遼寧、河北、天津、山東、江蘇、浙江、福建、廣東、廣西和海南的蝦類(lèi)樣品均可檢測(cè)到CMNV陽(yáng)性，其中，以廣東和海南的檢出率最高，達(dá)52.6%和50.8%，而遼寧、天津等地的檢出率最低，為10%和9.9%；CMNV的檢出率基本呈現(xiàn)華南高于華東和華北的趨勢(shì)(Zhanget al,2017)。2015年，本實(shí)驗(yàn)室在來(lái)自越南、厄瓜多爾和墨西哥的發(fā)病養(yǎng)殖對(duì)蝦樣品中檢出CMNV。2016年，Thitamadee等(2016)利用套式RT-PCR檢測(cè)技術(shù)在泰國(guó)當(dāng)?shù)匕l(fā)病對(duì)蝦中檢測(cè)到CMNV，且檢出率很高；Pooljun等(2016)研究發(fā)現(xiàn)，泰國(guó)南部養(yǎng)殖池塘凡納濱對(duì)蝦中疑患VCMD個(gè)體的CMNV陽(yáng)性檢出率分別為30.4%和37.7%。CMNV在全球主要對(duì)蝦養(yǎng)殖地區(qū)傳播的風(fēng)險(xiǎn)已經(jīng)引起廣泛關(guān)注。

2017年8月山東濰坊一個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)的凡納濱對(duì)蝦疑患VCMD，本實(shí)驗(yàn)室在該養(yǎng)殖場(chǎng)的池塘內(nèi)采集了發(fā)病對(duì)蝦和浮游動(dòng)物樣品，同時(shí)也對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)排水渠中野生的鯽魚(yú)(Carassius auratus)等樣品進(jìn)行了采集和固定保存。分子生物學(xué)分析結(jié)果顯示，患病對(duì)蝦、養(yǎng)殖池塘共生生物和鯽魚(yú)樣品均呈現(xiàn)CMNV陽(yáng)性。

本研究采用逆轉(zhuǎn)錄套式PCR(RT-nPCR)、組織病理學(xué)、組織原位雜交和透射電子顯微鏡(TEM)技術(shù)，分析了鯽魚(yú)腦和心肌組織中CMNV的存在、感染情況以及CMNV感染鯽魚(yú)所導(dǎo)致的病理變化，以期從不同角度確認(rèn)該鯽魚(yú)是否被CMNV所感染，是否為CMNV的新宿主。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

鯽魚(yú)樣品采集于山東濰坊一養(yǎng)殖場(chǎng)的排水渠中，體長(zhǎng)為8～10 cm，取每尾個(gè)體的腦和心肌組織，將組織樣品切分為1式3份，分別固定于RNA Later固定液(天根)、4%多聚甲醛固定液[配制方法參見(jiàn)Chen等(2014)]和戊二醛固定液[配制方法參見(jiàn)Graham等(2007)]中，用于后續(xù)的分子生物學(xué)、組織學(xué)和超微結(jié)構(gòu)分析。保存在4%多聚甲醛中的樣品固定24 h后，轉(zhuǎn)移到70%乙醇中貯存。

1.2 組織總RNA提取

將30 mg鯽魚(yú)心肌及腦組織置于500 μl TRIzol中，用電動(dòng)勻漿器將其快速破碎勻漿，然后，按照RNA快速提取試劑盒(百泰克)說(shuō)明書(shū)，提取組織樣品的總RNA，最后，用超微量分光光度計(jì)NanoDrop 2000(Thermo Fisher Scientific，美國(guó))測(cè)定所制備RNA的濃度和純度。

1.3 逆轉(zhuǎn)錄套式PCR(RT-nPCR)檢測(cè)

取1 μl(100 ng/μl)鯽魚(yú)組織總RNA，加入1 μl 10 mmol/L的Noda-R1引物[引物序列參見(jiàn)Zhang等(2014)]和4 μl無(wú)RNA酶水后，混勻，70℃預(yù)變性 5 min，冰浴2 min，然后，依次加入2 μl 5×M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶緩沖液、0.5 μl dNTP(10 mmol/L)、0.25 μl RNA酶抑制劑(40 U/μl)、0.5 μl M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶(200 U/μl)和0.75 μl無(wú)RNA酶水后，混勻，42℃逆轉(zhuǎn)錄1 h，70℃變性5 min，即獲得cDNA模板。

按照Z(yǔ)hang等(2014)報(bào)道的方法進(jìn)行RT-nPCR的第一輪擴(kuò)增反應(yīng)；RT-nPCR的第二步PCR采用TaKaRa PremixTaqTM(ExTaqTM2.0)進(jìn)行，25 μl反應(yīng)體系：12.5 μl預(yù)混合Taq，1 μl正向引物(Noda-F1: 5′-AAATACGGCGATGACG-3′,10 μmol/L)，1 μl反向引 物(Noda-R2: 5′-GGCGGTGAGATGGATTTT-3′,10 μmol/L)，1 μl第一步RT-PCR產(chǎn)物和9.5 μl ddH2O。第二步PCR的反應(yīng)程序：94℃預(yù)變性3 min；94℃變性30 s，52℃退火30 s和72℃延伸50 s，共35個(gè)循環(huán)；72℃延伸5 min。通過(guò)第二步PCR擴(kuò)增，可得到CMNV中依賴(lài)RNA的RNA聚合酶基因(RdRp)(GenBank登錄號(hào)KM112247)中長(zhǎng)度為207 bp的擴(kuò)增產(chǎn)物。RT-nPCR檢測(cè)過(guò)程中，同時(shí)對(duì)陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄和第一輪及第二輪PCR擴(kuò)增。

1.4 組織病理學(xué)分析

采用Bell等(1988)和Lightner(1996)報(bào)道的方法，對(duì)保存在70%乙醇中的樣品進(jìn)行脫水、石蠟包埋等處理。每份樣品制備4張厚度為3 μm的石蠟切片，對(duì)第1張切片進(jìn)行蘇木精和伊紅(HE)染色，用于組織病理學(xué)觀察(參考上述Lightner報(bào)道的方法)，第2張切片用于地高辛(DIG)標(biāo)記的RNA探針進(jìn)行CMNV組織原位雜交，第3、4張切片用于隨機(jī)探針和無(wú)探針的原位雜交作為陰性和空白對(duì)照。利用Nikon Eclipse E80i顯微鏡對(duì)組織切片進(jìn)行觀察和拍照。

1.5 組織原位雜交分析

根據(jù)Zhang等(2017)報(bào)道的方法，利用帶有限制性?xún)?nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)的引物對(duì)RdRp基因上一段長(zhǎng)為244 bp的片段進(jìn)行擴(kuò)增，將擴(kuò)增所得目標(biāo)片段克隆到pBluescriptⅡSK(+)載體中，用限制性?xún)?nèi)切酶PstⅠ將重組后的載體線(xiàn)性化；以線(xiàn)性化的載體為模板，采用T7 RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄出DIG標(biāo)記的RNA探針。利用上述探針，根據(jù)前人報(bào)道的方法(Nuovoet al,1999; Pietteet al,2008; Chenet al,2014)對(duì)切片進(jìn)行原位雜交，雜交后的切片進(jìn)行核固紅復(fù)染著色。利用Nikon Eclipse E80i顯微鏡觀察原位雜交切片并拍照。

1.6 透射電子顯微鏡分析

將保存在戊二醛固定液中、對(duì)應(yīng)編號(hào)呈原位雜交檢測(cè)陽(yáng)性的樣品，送青島大學(xué)醫(yī)院電鏡中心進(jìn)行固定、包埋、切片和染色，操作流程參照Graham等(2007)，稍加修改后具體步驟包括：1%鋨酸(0.1 mol/L甲次砷酸鹽緩沖液配制，pH值為7.3)固定3 h，蒸餾水浸泡10 min；接著依次在50%、70%和90%乙醇中脫水20 min，在無(wú)水乙醇中脫水4次，10 min/次；先用1∶1的樹(shù)脂酒精包埋液處理30 min，再用3∶1的樹(shù)脂酒精包埋液處理60 min，然后用純樹(shù)脂包埋3 d，制備厚度為0.5 μm的超薄切片；切片用醋酸鈾和檸檬酸鉛進(jìn)行染色，用透射電子顯微鏡(Japan Electron Optics Laboratory Co.,Ltd.,日本)觀察、拍照。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 RT-nPCR檢測(cè)結(jié)果

RT-nPCR擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳圖片顯示，來(lái)自鯽魚(yú)樣品的cDNA經(jīng)過(guò)二輪PCR，擴(kuò)增獲得了與預(yù)期的207 bp大小一致的目標(biāo)基因片段(圖1)，并且和陽(yáng)性對(duì)照的擴(kuò)增片段在相同位置。根據(jù)該結(jié)果初步判斷鯽魚(yú)樣品中存在或感染了CMNV。

圖1 鯽魚(yú)樣品的CMNV逆轉(zhuǎn)錄套式PCR 第二輪擴(kuò)增產(chǎn)物電泳 Fig.1 Electrophoresis of the amplification products from the second step of CMNV RT-nPCR test for the sample of C.auratus naturally infected with CMNV

2.2 鯽魚(yú)組織病理變化及組織原位雜交

鯽魚(yú)腦神經(jīng)組織病理圖顯示，鯽魚(yú)腦組織二疊體內(nèi)顆粒細(xì)胞層中可見(jiàn)明顯的神經(jīng)組織空泡化，二疊體內(nèi)顆粒細(xì)胞排列混亂、無(wú)序，細(xì)胞核固縮明顯(圖2a和圖2b)。組織原位雜交圖(圖2c和圖2d)顯示，鯽魚(yú)腦組織顆粒細(xì)胞層中有明顯的藍(lán)紫色CMNV探針雜交信號(hào)。對(duì)照組切片中無(wú)雜交信號(hào)出現(xiàn)(圖2e和圖2f)。

鯽魚(yú)腦皮層組織病理圖顯示，鯽魚(yú)腦皮層組織空泡化嚴(yán)重，組成神經(jīng)元的錐體細(xì)胞呈現(xiàn)明顯空泡化，較高比例的細(xì)胞核出現(xiàn)固縮變形(圖3a和圖3b)。該樣品的組織原位雜交圖顯示(圖3c和圖3d)，呈現(xiàn)壞死部位的神經(jīng)元周?chē)嬖诿黠@淺紫色的CMNV探針雜交信號(hào)。對(duì)照組切片中無(wú)雜交信號(hào)出現(xiàn)(圖3e和圖3f)。

鯽魚(yú)心肌組織病理圖顯示，心肌組織中肌纖維呈現(xiàn)溶解樣壞死，肌細(xì)胞空泡化明顯，間隙可見(jiàn)血細(xì)胞浸潤(rùn)，肌細(xì)胞的細(xì)胞核固縮明顯(圖4a和圖4b)。組織原位雜交圖(圖4c和圖4d)顯示，心肌組織壞死部位出現(xiàn)淺紫色的CMNV探針雜交信號(hào)。對(duì)照組切片中無(wú)雜交信號(hào)出現(xiàn)(圖4e和圖4f)。

2.3 鯽魚(yú)組織超微結(jié)構(gòu)病理變化

鯽魚(yú)腦組織超薄切片透射電鏡分析結(jié)果顯示，腦組織空泡化病變嚴(yán)重，神經(jīng)組織壞死明顯，有髓神經(jīng) 纖維出現(xiàn)脫髓鞘現(xiàn)象，細(xì)胞核固縮變形明顯，但鏡下未見(jiàn)明顯的CMNV樣病毒顆粒，也未觀測(cè)到其他已知病原體(圖5a和圖5b)。

圖2 自然感染CMNV的鯽魚(yú)腦神經(jīng)組織病理和原位雜交圖 Fig.2 Micrographs of HE staining and in situ hybridization for brain nerve tissue of the C.auratus naturally infected with CMNV

圖3 自然感染CMNV的鯽魚(yú)腦皮層組織病理和原位雜交圖 Fig.3 Micrographs of HE staining and in situ hybridization for brain cortical tissue of the C.auratus naturally infected with CMNV

鯽魚(yú)心肌組織超薄切片透射電鏡分析結(jié)果顯示，心肌組織壞死嚴(yán)重，肌細(xì)胞中大面積區(qū)域被CMNV樣病毒顆粒所占據(jù)(圖6a和圖6b)；高放大倍數(shù)下可 見(jiàn)心肌細(xì)胞內(nèi)大量清晰的、直徑約為30 nm的CMNV樣病毒顆粒(圖6c)。

圖4 自然感染CMNV的鯽魚(yú)心肌組織病理和組織原位雜交圖 Fig.4 Micrographs of HE staining and in situ hybridization for cardiac muscle of the C. auratus naturally infected with CMNV

圖5 自然感染CMNV的鯽魚(yú)腦組織超薄 切片的透射電鏡圖 Fig.5 Micrographs of ultrathin section for brain of C. auratus visualized by transmission electron microscopy(TEM)

3 討論

研究發(fā)現(xiàn)，CMNV的宿主范圍廣泛，該病毒除了感染中國(guó)主要養(yǎng)殖甲殼類(lèi)如凡納濱對(duì)蝦、中國(guó)明對(duì)蝦、日本對(duì)蝦、斑節(jié)對(duì)蝦和羅氏沼蝦外，還可以感染對(duì)蝦養(yǎng)殖池塘中的橈足類(lèi)(Parathemisto gaudichaud)、蜾蠃蜚(Corophium sinenseZhang)、寄居蟹(Diogenesedwardsii)和細(xì)長(zhǎng)腳蟲(chóng)戎(Parathemisto gaudichalldi)等種類(lèi)(Zhanget al,2017; Liuet al,2018)。CMNV可侵染多種甲殼類(lèi)的肝胰腺和肌肉組織，在肝胰腺小管和淋巴器官上皮細(xì)胞和肌肉細(xì)胞內(nèi)形成嗜酸性的包涵體，導(dǎo)致肝胰腺小管萎縮及肌肉纖維溶解樣、凝固狀壞死(Zhanget al,2014、2017)。Liu等(2017)通過(guò)人工感染實(shí)驗(yàn)證明，CMNV可通過(guò)脊尾白蝦(Exopalaemon carinicauda)親體的雄性生殖細(xì)胞或雌性生殖細(xì)胞傳遞至子代，實(shí)現(xiàn)從親代到子代的垂直傳播。

為了篩查CMNV可感染的水生動(dòng)物種類(lèi)，本研究對(duì)山東濰坊一發(fā)生VCMD對(duì)蝦養(yǎng)殖場(chǎng)排水渠中野生的鯽魚(yú)進(jìn)行了采樣和分析，鯽魚(yú)心肌組織的分子生物學(xué)檢測(cè)呈CMNV陽(yáng)性，初步判斷鯽魚(yú)可攜帶或感染CMNV。進(jìn)一步的組織病理學(xué)和組織原位雜交分析結(jié)果顯示，鯽魚(yú)樣品腦組織出現(xiàn)了較為嚴(yán)重的病理變化，包括腦皮層和二疊體內(nèi)神經(jīng)組織空泡化、組織排列疏松，腦皮層錐體細(xì)胞和二疊體顆粒細(xì)胞層細(xì)胞核明顯固縮等，說(shuō)明CMNV在自然條件下感染鯽魚(yú)能夠?qū)е缕淠X組織發(fā)生明顯病變。對(duì)鯽魚(yú)樣品心肌組織的超微結(jié)構(gòu)分析結(jié)果顯示，CMNV可浸染鯽魚(yú)的心臟，導(dǎo)致心肌組織大面積壞死；CMNV顆粒占據(jù)了心肌細(xì)胞內(nèi)大部分區(qū)域，部分肌肉纖維溶解并為CMNV顆粒所取代。上述研究結(jié)果證實(shí)，CMNV在自然條件下可感染野生鯽魚(yú)，并導(dǎo)致其腦和心肌發(fā)生明顯的病理?yè)p傷。

圖6 自然感染CMNV的鯽魚(yú)心臟組織超薄切片的透射電鏡圖 Fig.6 Micrographs of ultrathin section for heart of C. auratus visualized under transmission electron microscopic(TEM)

由于CMNV在分類(lèi)上歸為α野田村病毒屬，其與β野田村病毒屬相關(guān)病毒的感染特征可能類(lèi)似。為了排除上述鯽魚(yú)樣品中β野田村病毒共感染的可能性，本研究采用由世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(Office International Des Epizooties,OIE)推薦的、針對(duì)β野田村病毒的TaqMan實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法，檢測(cè)了鯽魚(yú)腦組織的RNA，結(jié)果顯示，在本研究中鯽魚(yú)樣品中沒(méi)有β野田村病毒屬已知株系的陽(yáng)性檢出(結(jié)果未展示)，從而證實(shí)本研究鯽魚(yú)樣品中不存在β野田村病毒的感染。

通常來(lái)講，病毒具有強(qiáng)烈的宿主專(zhuān)一性和嚴(yán)格的物種屏障(Wanget al,2004; Kuikenet al,2006; Tanget al,2006)。α野田村病毒屬內(nèi)除了野田村病毒(Nodamura virus,NoV)和獸棚病毒(Flock house virus,FHV)外，多數(shù)病毒的宿主范圍似乎都僅限于各種昆蟲(chóng)(Sellinget al,1990; Stocket al,2009)。作為野田村病毒科的代表種，NoV病毒的宿主范圍較為獨(dú)特，除了能夠感染昆蟲(chóng)外，還對(duì)哺乳動(dòng)物宿主具有致病性(Baileyet al,1973、1975)。研究證實(shí)，NoV能夠感染豬，可以被蚊子傳播，會(huì)對(duì)乳鼠(Mus musculus)和倉(cāng)鼠(Mesocricetus auratus)產(chǎn)生致死性(Ballet al,1999; Kinget al,2011)。FHV分離自褐新西蘭肋翅鰓角金龜(Costelytra zealandica)(Scottiet al,1983)，但能夠在植物中復(fù)制產(chǎn)生感染性病毒粒子(Sellinget al,1990)。上述研究均表明，NoV和FHV具有跨宿主傳播的能力。相比之下，β野田村病毒屬的宿主范圍僅限于不同種的魚(yú)類(lèi)(Scottiet al,1983; Furusawaet al,2007; Bigarréet al,2009; Soutoet al,2015)。迄今為止，尚未見(jiàn)報(bào)道表明α野田村病毒具有感染魚(yú)類(lèi)的能力。前期研究發(fā)現(xiàn)，發(fā)生VCMD的凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖池塘中，CMNV除了感染養(yǎng)殖對(duì)蝦外，也可感染池塘中共生的鯔蝦虎魚(yú)(Mugilogobius abei)(另文發(fā)表)，結(jié)合本研究所揭示的CMNV能夠感染野生鯽魚(yú)，可以發(fā)現(xiàn)，CMNV作為一種蝦類(lèi)新發(fā)疫病病毒性病原，能跨越物種障礙在自然條件下感染魚(yú)類(lèi)，實(shí)現(xiàn)跨宿主傳播。

池塘養(yǎng)殖系統(tǒng)，除了養(yǎng)殖池塘本身外，還包括排水渠、廢水處理池等設(shè)施，池塘中養(yǎng)殖對(duì)蝦發(fā)病后，養(yǎng)殖水體會(huì)經(jīng)排水渠向外排放或排入廢水處理池中。由于目前中國(guó)大部分對(duì)蝦養(yǎng)殖地區(qū)對(duì)養(yǎng)殖廢水外排管理不嚴(yán)格，多數(shù)養(yǎng)殖場(chǎng)一般將養(yǎng)殖廢水就近直接外排至溝渠或近海中，造成養(yǎng)殖池塘中病原向外擴(kuò)散的風(fēng)險(xiǎn)。本研究中的養(yǎng)殖場(chǎng)養(yǎng)殖用水來(lái)源為近岸河口，從發(fā)病對(duì)蝦養(yǎng)殖池塘外排水渠的鯽魚(yú)樣品中檢測(cè)到CMNV感染，證實(shí)該養(yǎng)殖場(chǎng)暴發(fā)VCMD疫情后，其池塘中CMNV可能會(huì)經(jīng)排水設(shè)施向外傳播擴(kuò)散。同時(shí)，CMNV可在自然狀態(tài)下感染淡水魚(yú)類(lèi)——鯽魚(yú)這一事實(shí)，一方面為CMNV跨越宿主界限感染魚(yú)類(lèi)提供了更多證據(jù)，另一方考慮到鯽魚(yú)是淡水或半咸水魚(yú)類(lèi)，加之CMNV可感染半咸水養(yǎng)殖的羅氏沼蝦，CMNV感染其他魚(yú)類(lèi)尤其是淡水養(yǎng)殖動(dòng)物種類(lèi)的風(fēng)險(xiǎn)值得高度關(guān)注。

鯽魚(yú)是一種淡水魚(yú)類(lèi)，分類(lèi)上歸屬于輻鰭魚(yú)綱、鯉形目、鯉科鯽屬，主要分布于歐亞地區(qū)的淡水水域中，部分沿海近岸的淡咸水中也有少量分布。中國(guó)境內(nèi)，鯽魚(yú)分布廣泛，各地水域常年均有生產(chǎn)，是中國(guó)一種重要的經(jīng)濟(jì)魚(yú)類(lèi)(謝忠明,1999; 郁桐炳等,2004)。本研究證實(shí)，CMNV能夠在自然條件下感染鯽魚(yú)導(dǎo)致其腦和心肌組織產(chǎn)生明顯病理變化，說(shuō)明CMNV對(duì)鯽魚(yú)具有一定的致病性，因此，CMNV危害養(yǎng)殖鯽魚(yú)的風(fēng)險(xiǎn)不容忽視。但對(duì)于CMNV感染鯽魚(yú)的致死率、主要靶組織等問(wèn)題，尚需深入研究。