劉思洋，吳建龍，喬建勇

（承德市中心醫(yī)院，河北承德 067000）

垂體瘤是常見的顱內(nèi)腫瘤之一，約占顱內(nèi)腫瘤的10%[1]，人群發(fā)病率約為1/10萬～7/10萬，在顱內(nèi)腫瘤中僅次于腦膜瘤和腦膠質(zhì)瘤。根據(jù)垂體瘤的生物學(xué)行為可以分為侵襲性垂體瘤（invasive pituitary adenomas，IPA）、非侵襲性垂體瘤和垂體癌。IPA介于垂體癌和非侵襲性垂體瘤之間，雖然在組織學(xué)上屬于良性腫瘤，但已經(jīng)具有惡變傾向的生物學(xué)行為[2]。IPA的生長方式與惡性腫瘤相似，腺瘤呈結(jié)節(jié)樣生長，常侵犯鞍旁海綿竇、蝶竇、斜坡及下丘腦等其它部位，手術(shù)難以完全切除，術(shù)后復(fù)發(fā)率高[3]。1940年Jefferson[4]認(rèn)為，IPA生長超出蝶鞍區(qū)域并能夠侵犯周圍組織，解釋了IPA不能完全切除且復(fù)發(fā)率高的原因。因此，研究IPA的發(fā)生機(jī)制及侵襲轉(zhuǎn)移的影響因子對IPA的診斷和治療具有重要意義。腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）和白細(xì)胞介素-12（interleukin，IL-12）是與炎癥、免疫應(yīng)答密切相關(guān)的多功能細(xì)胞因子，被認(rèn)為在腫瘤的生物學(xué)行為中發(fā)揮著重要作用。本研究探討了IPA組織中TNF-α和IL-12表達(dá)的變化，以期為IPA發(fā)生、發(fā)展的機(jī)制研究及治療提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 組織標(biāo)本 選取承德市中心醫(yī)院、承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院和中國人民解放軍第266醫(yī)院經(jīng)手術(shù)切除和病理證實的IPA和非IPA組織標(biāo)本，各40例。侵襲性垂體腺瘤診斷標(biāo)準(zhǔn)：依據(jù)Wilson-Hardy 3～4級分類、術(shù)前MRI檢查及術(shù)中觀察發(fā)現(xiàn)，腫瘤已侵襲鞍區(qū)周圍如海綿竇、鞍底周圍骨組織等，但只有鞍底硬膜浸潤不作為診斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.2 免疫組化染色和結(jié)果判斷 IPA和非IPA組織經(jīng)4%中性甲醛固定24h后，常規(guī)石蠟包埋、切片，切片厚度4 μ m。免疫組化染色：采用MaxVision二步法。石蠟切片置60℃烤箱2h，然后脫蠟、水化，加入內(nèi)源性過氧化物酶阻斷劑阻斷內(nèi)源性過氧化酶活性，滴加1：100鼠抗人多克隆一抗（美國Santa Cruz公司），4℃過夜，滴加抗鼠生物素標(biāo)記的二抗（福州邁新生物技術(shù)公司），室溫孵育20min后滴加DAB顯色，蘇木素復(fù)染，常規(guī)脫水、封片。

免疫組化結(jié)果判斷：TNF-α及IL-12定位于細(xì)胞漿，二者陽性表達(dá)情況均采用陽性細(xì)胞百分比和染色強(qiáng)度進(jìn)行綜合判斷。顯微鏡下觀察組織切片中腫瘤細(xì)胞密集區(qū)，在400倍鏡下隨機(jī)選取5個視野：①陽性細(xì)胞計數(shù)，陽性細(xì)胞數(shù)＜10%為0分、10%～25%為1分、26%～50%為2分、≥50%為3分；②陽性染色強(qiáng)度判斷標(biāo)準(zhǔn)：無色為0分、淡棕黃色為1分、棕黃色為2分、深棕黃色或棕褐色為3分。以①和②兩項之和判定最終結(jié)果：陰性（-）0分，低表達(dá)（+）1～2分，中度表達(dá)（++）3～4分，高表達(dá)（+++）5～6分。

1.3 統(tǒng)計分析 應(yīng)用SPSS 21.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計學(xué)分析，組間比較采用卡方檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 TNF-α在IPA組織及非IPA組織中的表達(dá) 40例IPA組織中TNF-α總陽性率為65.0%，非IPA組織中TNF-α總陽性率為25.0%，IPA組織中TNF-α陽性率明顯高于非IPA組織，組間比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見圖1，附表：

附表 IPA及非IPA組織中TNF-α、IL-12的表達(dá)情況（n=40）

圖1 IPA及非IPA組織中TNF-α的表達(dá)（×200，A.IPA,B.非IPA）

2.2 IL-12在IPA組織及非IPA組織中的表達(dá) 40例IPA組織中IL-12總陽性率為32.5%，非IPA組織中IL-12總陽性率為62.5%，IPA組織中IL-12陽性率明顯低于非IPA組織，組間比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見圖2，附表。

圖2 IPA及非IPA組織中IL-12的表達(dá)（×200，A.IPA,B.非IPA）

3 討論

TNF-α是由活化的單核巨噬細(xì)胞分泌的一種小分子蛋白，基因定位于人第6對染色體6P23～6Q12區(qū)，由4個外顯子和3個內(nèi)含子組成，與組織兼容性復(fù)合體密切連鎖，在細(xì)胞免疫、炎癥反應(yīng)、腫瘤免疫等多種生理與病理過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用[5]。TNF-α還可誘導(dǎo)多種腫瘤細(xì)胞雙調(diào)蛋白的分泌，雙調(diào)蛋白不但能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的增殖擴(kuò)散，還能通過EGF受體相關(guān)通路刺激腫瘤細(xì)胞的無限增殖和惡變[6]；TNF-α能通過細(xì)胞內(nèi)一系列信息傳遞激活P-選擇素，激活的P-選擇素一方面可以促使腫瘤細(xì)胞粘附于血管內(nèi)皮，另一方面可與整合素共同介導(dǎo)血小板的激活，并使激活的血小板與腫瘤細(xì)胞相結(jié)合，使腫瘤細(xì)胞逃避免疫攻擊，從而促進(jìn)腫瘤的侵襲性生長[7-8]。

IL-12又稱為自然殺傷細(xì)胞刺激因子，主要由巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞等抗原遞呈細(xì)胞分泌產(chǎn)生，是具有多種生物學(xué)效應(yīng)的免疫細(xì)胞生長刺激因子，具有強(qiáng)大的抗腫瘤作用[9]。Jafarzadeh等[10]發(fā)現(xiàn)，減少IL-12的分泌可促進(jìn)乳腺癌進(jìn)展；IL-12可以誘導(dǎo)干擾素-γ（IFN-γ）的生成，上調(diào)干擾素誘導(dǎo)蛋白10(IP-10)、組織金屬蛋白酶抑制劑(TIMP)等血管生成抑制因子，下調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)、堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)、VEGF等血管生成誘導(dǎo)因子，協(xié)同抑制腫瘤血管生成及發(fā)揮抗腫瘤作用[11]；另外還有實驗顯示，人腫瘤異種移植物中的炎性細(xì)胞可以抑制腫瘤的生長，該作用是由IL-12所介導(dǎo)的[12]；IL-12還可上調(diào)鈣粘著素和細(xì)胞粘附分子的表達(dá)水平，防止腫瘤轉(zhuǎn)移[13]。

本研究采用免疫組化方法（Max Vision二步法）檢測了IPA組織和非IPA組織中TNF-α和IL-12的表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)IPA組織中TNF-α的陽性表達(dá)率明顯高于非IPA組織，IL-12的的陽性表達(dá)率明顯低于非IPA組織，提示TNF-α和IL-12均參與了IPA的發(fā)生發(fā)展過程，二者可能在垂體瘤的增殖及侵襲性過程中發(fā)揮重要作用。因此，檢測TNF-α和IL-12的表達(dá)情況可能為判斷IPA的生物學(xué)行為、預(yù)后及治療提供依據(jù)，但相關(guān)機(jī)制有待于進(jìn)一步深入研究。