孫玉榮，楊帆，趙春蘭，于秀文，王顯艷，胡南，葉榕

（齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院病理學(xué)院，黑龍江 齊齊哈爾 161006）

0 引言

食管癌是臨床較為常見的一種消化道腫瘤。目前，已有大量的研究證實(shí)[1]，食管癌腫瘤細(xì)胞生長迅速，向鄰近組織浸潤蔓延較快，因此，充分認(rèn)識(shí)食管癌的浸潤和蔓延機(jī)制對于早期防治食管癌具有重要的意義。有文獻(xiàn)報(bào)道[2]，腫瘤的微環(huán)境與患者的機(jī)體免疫反應(yīng)參與了腫瘤的浸潤生長。本研究為進(jìn)一步明確食管癌的浸潤和蔓延機(jī)制，將免疫細(xì)胞與微環(huán)境結(jié)合起來研究，主要就CD38、RANTES 及CAFs 標(biāo)志物在食管癌中的表達(dá)情況以及其臨床意義展開探討。

1 資料和方法

1.1 一般資料

將2016 年9 月至2018 年3 月我院的54 例食管癌患者納入到本次研究中，有男31 例，女23 例，年齡49～82 歲，平均年齡（64.59±5.10）歲；病理類型：低級別上皮內(nèi)瘤變12 例、高級別上皮內(nèi)瘤變24 例、早期癌9 例、進(jìn)展期癌9 例。所有標(biāo)本均來源于手術(shù)切除標(biāo)本，患者術(shù)前均未進(jìn)行放化療或其他方法治療，其中將食管癌組織標(biāo)本設(shè)為實(shí)驗(yàn)組，另將食管癌癌旁組織標(biāo)本設(shè)為對照組。

1.2 方法

采用免疫組化（SP 法）檢測CD38、RANTES 與CAFs 標(biāo)志物α-SMA、FAPα 的表達(dá)情況，具體操作如下：①脫蠟脫水：將實(shí)驗(yàn)的標(biāo)本玻片烘烤30min，并采用二甲苯脫蠟再進(jìn)行梯度酒精脫水；②抗原修復(fù)：用PBS 緩沖液洗滌玻片后加入抗原熱修復(fù)液進(jìn)行10min 的加熱修復(fù)，室溫冷卻；③血清封閉：每張玻片分別滴加50μL 的山羊血清工作液封閉處理，同時(shí)添加內(nèi)源性生物素以作封閉；④在玻片上分別滴加一抗工作液(CD38 單克隆抗體、RANTES 單克隆抗體、α-SMA 單克隆抗體、FAPα 單克隆抗體)，放置在4℃冰箱中過夜。24h 后取出將其置于常溫環(huán)境中，用PBS 液沖洗3 次；⑤滴加二抗：每張玻片分別滴加50μL 二抗工作液，置于37℃中孵育30min，并用PBS 沖洗；⑥滴加三抗：每張玻片滴加辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液，置于37℃中孵育30min；⑦顯色：每張玻片滴入適量的DAB 顯色劑，并在顯微鏡下對其顯色狀況作適當(dāng)?shù)恼{(diào)整，隨后在蒸餾水中沖洗3min 以終止顯色反應(yīng)；⑧蘇木素復(fù)染；⑨封片：取適量二甲苯作脫蠟透明處理，且使用中性樹膠作封片。與此同時(shí)，取適量PBS 緩沖液代替一抗進(jìn)行上述操作以作陰性對照。

1.3 陽性表達(dá)的評定標(biāo)準(zhǔn)

待觀察到棕黃色顆粒后，需在顯微鏡下仔細(xì)察看其細(xì)胞中的表達(dá)部位，并隨機(jī)挑選5 個(gè)視野觀察，若陽性細(xì)胞百分比≥75%評4 分，51%～75%評3 分，26%～50%評2 分，6%～25%評1 分，≤6%評0 分，其中，將2～4 分評為陽性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

選用SPSS 20.0 軟件，計(jì)數(shù)資料經(jīng)χ2檢驗(yàn)，以%表示，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義為P＜0.05。

2 結(jié)果

實(shí) 驗(yàn) 組CD38、RANTES 以 及α-SMA、FAPα 的陽性表達(dá)率顯著高于對照組（P＜0.05），見表1。且實(shí)驗(yàn)組中食管上皮從瘤變到癌變過程的CD38、RANTES、α-SMA、FAPα 的陽性表達(dá)率逐漸升高，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表1 兩組CD38、RANTES、α-SMA、FAPα 陽性表達(dá)比較

表2 不同病理類型食管癌CD38、RANTES、α-SMA、FAPα 陽性表達(dá)比較

3 討論

目前臨床中，已有大量的研究發(fā)現(xiàn)[4-5]，免疫系統(tǒng)具有免疫抑制效應(yīng)，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著一定的作用。免疫因子CD38 屬于一種單鏈型的跨膜糖蛋白，其作用主要是參與細(xì)胞的黏附與細(xì)胞信號的傳導(dǎo)[6]。王運(yùn)剛[7]的研究顯示，CD38 可通過分泌各種免疫抑制性分子，并向體內(nèi)傳遞免疫抑制信號，進(jìn)而發(fā)揮阻止免疫反應(yīng)、促癌細(xì)胞生長的作用。受激活調(diào)節(jié)正常T 細(xì)胞表達(dá)的分泌因子（RANTES）作為一種趨化因子，具有調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞功能，介導(dǎo)T 淋巴細(xì)胞遷徙轉(zhuǎn)移的功能。相關(guān)研究報(bào)道[8-9]，RANTES 利用趨化作用可直接誘導(dǎo)癌細(xì)胞發(fā)生遷徙，促使癌細(xì)胞向淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，與此同時(shí)，RANTES 還可通過轉(zhuǎn)變癌灶的免疫狀態(tài)，使癌細(xì)胞發(fā)生免疫逃逸，促進(jìn)其浸潤生長。于鴻[10]對食管鱗狀細(xì)胞癌的腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)標(biāo)志物進(jìn)行檢測發(fā)現(xiàn)，癌相關(guān)成纖維細(xì)胞（CAFs）的標(biāo)志物α-SMA、FAPα 能夠釋放多種作用于癌細(xì)胞的細(xì)胞因子和生長因子，使其起到促癌灶血管形成的作用，這可在一定程度利于腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移。本研究結(jié)果也顯示，實(shí)驗(yàn)組CD38、RANTES 以及α-SMA、FAPα 的陽性表達(dá)率顯著高于對照組，且食管癌患者中食管上皮從瘤變到癌變過程的CD38、RANTES、α-SMA、FAPα 的陽性表達(dá)率逐漸升高，提示，食管癌組織中的CD38、RANTES 及CAFs 標(biāo)志物呈高表達(dá)，且與癌變發(fā)展進(jìn)程呈正相關(guān)。

綜上，CD38、RANTES 及CAFs 標(biāo)志物在食管癌生長、浸潤和蔓延中發(fā)揮著一定的作用，有望成為臨床預(yù)測食管癌患者預(yù)后的可靠指標(biāo)。