王繼明，陳麗娜，杜芳，韓國(guó)慶，王耀新

(內(nèi)蒙古蒙肽生物工程有限公司研究院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010051)

黃芪為豆科植物蒙古黃芪或膜莢黃芪干燥的根[1]。黃芪主要含有多糖、黃酮類化合物及三萜皂苷[2]，其中黃芪的主要活性成分為黃芪皂苷。黃芪甲苷為黃芪皂苷的主要成分，黃芪甲苷具有抗炎、抗肝纖維化、抗氧化、抗哮喘、降血糖、免疫調(diào)節(jié)和心肌保護(hù)等多重功效[3]。因此黃芪在醫(yī)藥和保健食品方面具有十分廣泛的應(yīng)用。同時(shí)黃芪甲苷成為含有黃芪的醫(yī)藥和保健食品的質(zhì)量控制指標(biāo)之一。《中國(guó)藥典》2015年版[1]收錄了黃芪甲苷做為黃芪的質(zhì)量控制指標(biāo)。由于黃芪中含有多糖、黃酮、皂苷、氨基酸、色素等多種成分，為了使其他成分不對(duì)黃芪甲苷的含量測(cè)定產(chǎn)生影響，在對(duì)樣品中黃芪甲苷的含量測(cè)定前，需對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理。黃芪甲苷含量的測(cè)定方法有比色法、熒光法、薄層掃描法、高效液相色譜法、超高效液相色譜法和近紅外漫反射光譜法等，其中高效液相色譜法為近年來(lái)廣泛應(yīng)用的方法。下面分別對(duì)樣品的預(yù)處理和黃芪甲苷含量測(cè)定的方法進(jìn)行綜述。

1 樣品的預(yù)處理

圖1 黃芪甲苷含量測(cè)定預(yù)處理過(guò)程

樣品用甲醇提取，將樣品中的黃芪甲苷等成分溶解到甲醇中，用甲醇做為溶劑進(jìn)行提取，常見(jiàn)的有回流提取和超聲提取2種方式。甲醇提取液脫除甲醇后用水溶解殘留固體，用乙醚或石油醚洗滌去除水溶液中的脂溶性雜質(zhì)，用水飽和的正丁醇萃取，除去水溶液中的水溶性雜質(zhì)，堿溶液洗滌去除酸性雜質(zhì)，堿溶液一般為氨試液、1%氫氧化鈉或1%氫氧化鉀。用大孔吸附樹(shù)脂對(duì)樣品進(jìn)一步純化，所用大孔吸附樹(shù)脂有D101型和DM-301型。對(duì)于大多數(shù)樣品的預(yù)處理均省略了乙醚或石油醚洗滌、大孔吸附樹(shù)脂處理步驟，黃芪甲苷含量的測(cè)定滿足方法學(xué)的要求。同時(shí)根據(jù)樣品的性質(zhì)決定是否省略甲醇提取步驟。

圖1中省略乙醚或石油醚洗滌步驟，大孔吸附樹(shù)脂為D101型即為《中國(guó)藥典》2015年版[1]黃芪中黃芪甲苷含量測(cè)定的預(yù)處理方法。2013年丁如賢等人[4]報(bào)道了對(duì)黃芪供試品的處理中省去大孔吸附樹(shù)脂除雜步驟對(duì)黃芪甲苷峰的分離及檢測(cè)沒(méi)有任何影響。2011年劉浩文等人[5]比較了中國(guó)藥典和香港中藥材標(biāo)準(zhǔn)黃芪中黃芪甲苷含量測(cè)定方法。香港中藥材標(biāo)準(zhǔn)方法的重現(xiàn)性良好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，且樣品前處理方法簡(jiǎn)便，測(cè)得黃芪藥材中黃芪甲苷含量與中國(guó)藥典相比沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。香港中藥材標(biāo)準(zhǔn)黃芪中黃芪甲苷含量測(cè)定供試品溶液制備流程見(jiàn)圖2。

圖2 香港中藥材標(biāo)準(zhǔn)黃芪中黃芪甲苷含量測(cè)定供試品溶液制備流程

2006年朱蕾[6]報(bào)道了將保健食品用甲醇超聲提取、水飽和正丁醇萃取、1%氫氧化鉀洗滌、DM-301大孔吸附樹(shù)脂處理，所得的洗脫液又經(jīng)過(guò)了Oasis HLB 3cc型固相萃取柱除去樣品中極性大于和小于黃芪甲苷的物質(zhì)，并對(duì)其進(jìn)行了富集，以達(dá)到儀器測(cè)定的靈敏度。

樣品預(yù)處理的目的是通過(guò)預(yù)處理步驟將樣品中的黃芪甲苷進(jìn)行純化以滿足后續(xù)樣品測(cè)定的要求，根據(jù)樣品的性質(zhì)，在滿足樣品測(cè)定需求的條件下，可以將樣品預(yù)處理過(guò)程簡(jiǎn)化，節(jié)省樣品預(yù)處理時(shí)間，進(jìn)而提高樣品檢測(cè)效率。

2 黃芪甲苷含量測(cè)定

2.1 比色法

比色法是通過(guò)黃芪甲苷與顯色劑發(fā)生顯色反應(yīng)后生成有色物質(zhì)，再用分光光度計(jì)測(cè)定吸光度，有色物質(zhì)濃度與吸光度成正比，根據(jù)樣品的吸光度值計(jì)算樣品中黃芪甲苷的含量。2004年李永吉等人[7]利用香草醛-高氯酸比色法測(cè)定了復(fù)方黃芪注射液中總皂苷含量。復(fù)方黃芪注射液經(jīng)水飽和正丁醇萃取、1%氫氧化鈉溶液洗滌、正丁醇飽和的水洗滌、溶劑脫除和甲醇溶解步驟得到供試品溶液。取供試品溶液脫除甲醇，依次加入5%香草醛冰醋酸溶液和高氯酸，70℃水浴加熱20 min，冷卻后加入冰醋酸，于540 nm處測(cè)定吸光度。該方法的精密度、重現(xiàn)性和穩(wěn)定性的RSD分別為1.5%、1.0%和0.34%。黃芪甲苷在8.33～41.67 μg/mL濃度范圍內(nèi)線性良好(r=0.999 7)，回收率為100.64%。

2016年盧偉等人[8]將黃芪經(jīng)甲醇回流提取、水飽和正丁醇萃取、氨試液洗滌、溶劑脫除和甲醇溶解步驟得到了供試品溶液。向供試品溶液中依次加入5%亞硝酸鈉、10%硝酸鋁溶液和4%氫氧化鈉溶液，每加一種溶液放置一段時(shí)間，然后在367 nm處測(cè)定吸光度。該方法的精密度、重現(xiàn)性和穩(wěn)定性的RSD分別為1.9%、1.72%和1.81%，加標(biāo)回收率為99.5%，黃芪甲苷在進(jìn)樣量0～0.04 mg/mL范圍內(nèi)線性較好(r=0.959 5)。

由于黃芪中含有多種三萜皂苷，黃芪甲苷為其中的一種，其他三萜皂苷也可能會(huì)與顯色劑發(fā)生相同的顯色反應(yīng)，因此利用比色法可以測(cè)定總皂苷的含量，對(duì)于黃芪甲苷含量的測(cè)定較為困難。

2.2 熒光法

熒光法是利用黃芪甲苷與某些試劑反應(yīng)生成在紫外光照射后能發(fā)射熒光的物質(zhì)特性而定量分析的方法。2010年楊連梅等人[9]利用大茴香酸在硫酸介質(zhì)中與黃芪甲苷反應(yīng)產(chǎn)生強(qiáng)烈熒光的特性測(cè)定黃芪中黃芪甲苷含量，黃芪甲苷反應(yīng)物最大激發(fā)波長(zhǎng)為320 nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為387 nm。該方法的精密度、重現(xiàn)性和穩(wěn)定性的RSD分別為0.10%、1.41%和2.15%，加標(biāo)回收率為97.22%，黃芪甲苷在1.0～8.0 μg/mL濃度范圍內(nèi)線性良好(r=0.999 7)。

與比色法相同，熒光法適合于測(cè)定一類物質(zhì)的含量，對(duì)于黃芪甲苷單組分含量的測(cè)定較為困難，需要通過(guò)繁瑣的預(yù)處理步驟以消除其他成分的影響。同時(shí)黃芪中三萜皂苷類物質(zhì)的結(jié)構(gòu)較為相似，分離難度較大。

2.3 薄層掃描法

薄層掃描法被2000年版《中國(guó)藥典》收載為黃芪中黃芪甲苷含量的測(cè)定方法。薄層掃描法的薄層板一般采用硅膠G，展開(kāi)劑為氯仿-甲醇-水，顯色劑為10%硫酸乙醇溶液。2006年劉豐豐等人[10]用薄層掃描法測(cè)定了黃芪顆粒中黃芪甲苷含量。采用硅膠G薄層板，點(diǎn)狀點(diǎn)樣，展開(kāi)劑為氯仿-甲醇-水(13∶6∶2)10℃以下放置過(guò)夜的下層液，展開(kāi)晾干后，用10%硫酸乙醇溶液在105℃條件下加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。用反射法雙波長(zhǎng)鋸齒掃描，檢測(cè)波長(zhǎng)和參比波長(zhǎng)分別為530 nm和700 nm。該方法同板精密度和異板精密度的RSD分別為2.03%和2.31%，重復(fù)性的RSD為2.33%，加樣回收率為98.72%，黃芪甲苷在進(jìn)樣量為1.012～8.096 μg范圍內(nèi)線性良好(r=0.997)。2007年肖辛垣等人[11]報(bào)道了用薄層掃描法測(cè)定健兒涂膜劑中黃芪甲苷含量。采用硅膠G薄層板，展開(kāi)劑為氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水(20∶40∶22∶10)10℃以下放置12h的下層溶液，10%硫酸乙醇溶液為顯色劑，雙波長(zhǎng)反射法鋸齒掃描，檢測(cè)波長(zhǎng)和參比波長(zhǎng)分別為530 nm和700 nm。該方法同板精密度和異板精密度的RSD分別為1.66%和2.80%，重復(fù)性的RSD為2.35%，穩(wěn)定性的RSD為1.01%，加樣回收率為96.56%，黃芪甲苷在進(jìn)樣量為0.5～2.5 μg范圍內(nèi)線性良好(r=0.999 7)。2015年Jing Zhang等人[12]用高效薄層色譜同時(shí)測(cè)定了黃芪中的黃芪甲苷和芒柄花黃素。將黃芪干燥的根粉碎，置于索氏提取器中用石油醚脫脂，脫脂后將殘?jiān)眉状蓟亓魈崛?，脫除甲醇，用水溶解殘?jiān)?，用水飽和的正丁醇提取，氨試液洗滌，將正丁醇相蒸發(fā)至干，用甲醇溶解得到供試品溶液。采用硅膠H薄層板，石油醚-水飽和正丁醇-冰乙酸(3.5∶2∶4)為展開(kāi)劑，顯色劑為10%硫酸乙醇溶液，在254 nm處掃描。進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證，具體情況見(jiàn)表1。

通過(guò)薄層色譜能夠?qū)ⅫS芪甲苷與其他成分進(jìn)行分離，可以用于黃芪甲苷含量的測(cè)定，但是薄層掃描法測(cè)定過(guò)程需要進(jìn)行樣品預(yù)處理、展開(kāi)、顯色和掃描等步驟，處理過(guò)程較為繁瑣，樣品測(cè)定效率相對(duì)較低。

表1 HPTLC法測(cè)定黃芪中黃芪甲苷和芒柄花黃素方法學(xué)研究

2.4 高效液相色譜法

高效液相色譜法具有分離度和靈敏度高及適用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)廣泛應(yīng)用于黃芪甲苷的含量測(cè)定。在黃芪甲苷的含量測(cè)定中所用的檢測(cè)器有：紫外檢測(cè)器(UVD)、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(ELSD)、質(zhì)譜檢測(cè)器(MSD)、電噴霧檢測(cè)器(CAD)和脈沖安培檢測(cè)器(PAD)。下面分別進(jìn)行論述。

2.4.1 HPLC-UV法

黃芪甲苷的甲醇溶液最大紫外吸收波長(zhǎng)為200.8 nm?？赏ㄟ^(guò)紫外檢測(cè)器進(jìn)行測(cè)定，紫外檢測(cè)器是高效液相色譜中較為常用的檢測(cè)器。2014年，姜麗麗等人[13]用HPLC-UV法測(cè)定了黃芪干燥根中黃芪甲苷的含量。色譜柱為Kromail C18柱，流動(dòng)相為乙腈-水(32∶68)，流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為203 nm。該方法精密度、穩(wěn)定性和重復(fù)性的RSD分別為0.48%、2.87%和2.93%，回收率為98.22%，黃芪甲苷在0.05～0.50 mg/L濃度范圍內(nèi)線性良好(r=0.999 7)。

由于黃芪甲苷的最大紫外吸收波長(zhǎng)在200 nm左右，在此波長(zhǎng)處許多雜質(zhì)和溶劑有吸收，對(duì)黃芪甲苷的含量測(cè)定造成干擾。為了提高黃芪甲苷測(cè)定的靈敏度和專一性，將黃芪甲苷進(jìn)行衍生化，向黃芪甲苷分子結(jié)構(gòu)中引入共軛系統(tǒng)，使紫外吸收發(fā)生紅移。2000年Meicun Yao等人[14]開(kāi)發(fā)了反相高效液相色譜測(cè)定黃芪甲苷含量的方法。采用了柱前衍生化方法，用苯甲酰氯與黃芪甲苷定量反應(yīng)生成黃芪甲苷苯甲酰酯，色譜柱為Spherisorb ODS C18柱，流動(dòng)相為90%甲醇-4%四氫呋喃-6%水-0.2%三乙胺，流速為0.8 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm。用維生素D3做為內(nèi)標(biāo)物，對(duì)衍生化反應(yīng)條件進(jìn)行了優(yōu)化，同時(shí)進(jìn)行了方法學(xué)研究，黃芪甲苷在0.004～0.080 mg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回收率為94.7%，檢測(cè)限為0.002 mg/mL。2006年朱蕾[6]也對(duì)黃芪甲苷的衍生化反應(yīng)進(jìn)行了研究，采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)溫度、吡啶用量和苯甲酰氯用量條件進(jìn)行了優(yōu)化，確定了最佳的衍生化反應(yīng)條件。2012年侯素云等人[15]比較了HPLC-ELSD內(nèi)標(biāo)法(人參皂苷Rb2做為內(nèi)標(biāo)物)和柱前衍生化法(用苯甲酰氯進(jìn)行衍生化)測(cè)定黃芪甲苷含量的優(yōu)劣，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，柱前衍生化法測(cè)定結(jié)果的精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性和準(zhǔn)確度均優(yōu)于HPLC-ELSD內(nèi)標(biāo)法。但是柱前衍生化法對(duì)樣品的預(yù)處理時(shí)間較長(zhǎng)，樣品含量測(cè)定的周期較長(zhǎng)。

2.4.2 HPLC-ELSD法

蒸發(fā)光散射檢測(cè)原理是流動(dòng)相溶劑噴霧氣化，進(jìn)入加熱管后溶劑揮發(fā)，留下被分析檢測(cè)的物質(zhì)顆粒，被分析的物質(zhì)顆粒經(jīng)鐳射光產(chǎn)生散射，散射光由光電倍增管收集得到響應(yīng)，光散射檢測(cè)器的響應(yīng)大小由被分析物質(zhì)顆粒的數(shù)量和大小決定，不受流動(dòng)相溶劑的干擾，不要求被測(cè)組分有特定的化學(xué)結(jié)構(gòu)。特別適合于黃芪甲苷這種紫外末端吸收，沒(méi)有特定吸收波長(zhǎng)的情況，故被2015年版《中國(guó)藥典》[1]收載為黃芪中黃芪甲苷含量測(cè)定的方法。

2001年[16]Wenkui Li等人用HPLC-ELSD法測(cè)定了黃芪中黃芪甲苷含量，色譜柱為Zorbax Eclipse XDB C18柱，用乙腈和水進(jìn)行梯度洗脫，流速為1.6 mL/min，柱溫為20℃，蒸發(fā)溫度為43℃，氣體壓力為3.4 bar。黃芪甲苷的檢測(cè)限為40 ng，平均回收率為95.8%。該方法為測(cè)定黃芪甲苷含量的主要方法。表2中列出了2015—2017年用HPLC-ELSD法測(cè)定黃芪甲苷含量的相關(guān)研究。

與紫外檢測(cè)器相比，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器不需要進(jìn)行衍生化反應(yīng)，適用于沒(méi)有紫外吸收的物質(zhì)?？s短了樣品的測(cè)定周期。

2.4.3 HPLC-MS法

質(zhì)譜分析具有靈敏度高、選擇性強(qiáng)、準(zhǔn)確性好等特點(diǎn)。高效液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用可以分析復(fù)雜成分樣品和微量物質(zhì)，為復(fù)雜樣品中黃芪甲苷的含量測(cè)定提供了方法。2017年李光河[29]用液相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定了丹溪玉屏風(fēng)顆粒中黃芪甲苷含量，色譜柱為Agilent SB-C18柱，流動(dòng)相為甲醇-0.1%甲酸水溶液(70∶30)，流速為0.4 mL/min，柱溫為30℃。質(zhì)譜條件為：電噴霧正離子模式檢測(cè)，黃芪甲苷選擇離子對(duì)為627.4-807.2，霧化器壓力為35 psi，干燥氣流速為8.0 L/min，干燥氣溫度為450℃，毛細(xì)管電壓為4 000 V，四級(jí)桿溫度為100℃。研究結(jié)果表明，該方法精密度、重復(fù)性和穩(wěn)定性(8 h)的RSD分別為2.7%、2.0%和2.8%，加樣回收率為99.42%，黃芪甲苷在5.1～76.5 ng/mL濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系(r=0.999 4)。

2.4.4 HPLC-CAD法

蒸發(fā)光散射檢測(cè)器和電噴霧檢測(cè)器都屬于氣溶膠型檢測(cè)器，電噴霧檢測(cè)器是在2004年推出的一種較為新型的通用檢測(cè)器，其響應(yīng)值不依賴于被測(cè)物質(zhì)的光學(xué)性質(zhì)和離子化效率，能檢測(cè)非揮發(fā)或半揮發(fā)性物質(zhì)。與蒸發(fā)光散射檢測(cè)器相比，電噴霧檢測(cè)器的檢出限更低，靈敏度更高。2012年劉興國(guó)等人[30]比較了質(zhì)量型檢測(cè)器ELSD和CAD用于測(cè)定黃芪甲苷的優(yōu)劣。ELSD和CAD都能夠準(zhǔn)確可靠地進(jìn)行黃芪甲苷含量的測(cè)定，但是CAD的檢出限和定量限要比ELSD低得多。CAD在靈敏度和重現(xiàn)性方面均要好于ELSD。2014年李效寬等人[31]利用在線固相萃取法結(jié)合電噴霧式檢測(cè)器測(cè)定了黃芪甲苷的含量。用Acclaim PA2凈化柱對(duì)樣品純化。樣品分析柱為Acclaim C18，乙腈-水(35:65)為流動(dòng)相，流速為1.0 mL/min，柱溫為35℃。電噴霧檢測(cè)器的霧化溫度為30℃，氮?dú)鈮毫?41.3 kPa。黃芪甲苷的定量限為0.66 mg/L，檢出限為0.33 mg/L。黃芪甲苷在4.0～80 mg/L濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.999 8)。2016年梁慧敏等人[32]用高效液相色譜-電噴霧檢測(cè)器法測(cè)定了貞芪扶正顆粒中黃芪甲苷含量。色譜柱為ZORBAX Eclipse Plus C18柱，乙腈-水(32∶68)為流動(dòng)相，流速為1.0 mL/min。電噴霧檢測(cè)器霧化溫度為35℃，載氣氮?dú)鈮毫?3.6 psi。該方法精密度、重復(fù)性和穩(wěn)定性的RSD分別為1.1%、1.5%和1.1%。加樣回收率為99.14%，黃芪甲苷在進(jìn)樣量為0.286～2.86 μg范圍內(nèi)線性良好(r=0.999 8)。

表2 HPLC-ELSD法測(cè)定黃芪甲苷含量文獻(xiàn)匯總(2015—2017年)

2.4.5 HPLC-PAD法

脈沖安培檢測(cè)器出現(xiàn)在20世紀(jì)80年代初，是美國(guó)Dionex公司為滿足糖的測(cè)定而研制[33]。在較高pH溶液中，糖可在金電極上被氧化，因此可用電化學(xué)法進(jìn)行檢測(cè)。由于金電極吸附待測(cè)成分的氧化產(chǎn)物以及金電極表面形成氧化層，使得金電極會(huì)很快失效。為了解決這一問(wèn)題，由三個(gè)不同的脈沖電位代替加于工作電極上的恒定電位。用較工作電位高的正電位除去金電極上被測(cè)成分的氧化產(chǎn)物。同時(shí)再加一個(gè)大的負(fù)電位，使金電極部分被氧化成的氧化金還原到還原狀態(tài)。黃芪甲苷中含有糖的部分，因此可用脈沖安培檢測(cè)器進(jìn)行黃芪甲苷的檢測(cè)。2012年Ha-Jeong Kwon等人[34]用HPLC-PAD法測(cè)定了黃芪中的黃芪皂苷含量。脈沖安培檢測(cè)系統(tǒng)包括金工作電極和Ag/AgCl參比電極。電位波形為：E1=-0.2 V(0.00-0.004 s)，E2=0 V(0.05-0.21 s)，E3=+0.22 V(0.22-0.46 s)，E4=0 V(0.47-0.56 s)，E5=-2V(0.57-0.58 s)，E6=+0.6V(0.59 s)。以洋地黃毒苷做為內(nèi)標(biāo)物，以黃芪甲苷與內(nèi)標(biāo)物峰面積比和黃芪甲苷濃度進(jìn)行線性回歸，線性范圍為0.000 6～0.4 μg,r2=1.000 0。黃芪甲苷的檢測(cè)限和定量限分別為0.2 ng和0.6 ng。黃芪甲苷加入量為0.10 mg，回收率為(91.33±3.69)%，黃芪甲苷加入量為1.00 mg，回收率為(96.19±1.68)%。

2.5 超高效液相色譜法

與高效液相色譜相比，超高效液相色譜法的檢測(cè)速度較快，靈敏度和分離度較高。2015年Li Wang等人[35]使用超高效液相色譜-四極軌道阱質(zhì)譜測(cè)定了保健酒中黃芪甲苷含量。色譜柱為Hypersil GOLD C18，用0.1%甲酸水溶液和0.1%甲酸甲醇溶液梯度洗脫，流速為0.2 mL/min，柱溫為35℃。Q Exactive MS系統(tǒng)由四極質(zhì)譜和軌道阱質(zhì)譜組成。電噴霧正離子模式檢測(cè)，檢測(cè)m/z807.45→m/z627.39離子躍遷，離子源電壓為3200 V，溫度為350℃。黃芪甲苷的定量限和檢測(cè)限分別為0.5和0.25 ng/mL，回收率為92.5%～96.7%，線性范圍為1.8～36 ng/mL，回歸系數(shù)為0.999 9。超高效液相色譜-四極軌道阱質(zhì)譜具有分析速度快、高的靈敏度和選擇性的優(yōu)點(diǎn)。2016年華云鵬等人[36]用UPLC-MS法測(cè)定了安喘舒丸中的黃芪甲苷含量。色譜柱為Agilent ZOBAX SB C18色譜柱，甲醇-0.1%甲酸水溶液(25∶75)為流動(dòng)相，流速為0.2 mL/min，柱溫為35℃。電噴霧正離子模式檢測(cè)，毛細(xì)管電壓為4 000 V，干燥氣溫度為400℃，檢測(cè)對(duì)象為m/z808.2→m/z628.5。黃芪甲苷的定量限為5 ng/mL，精密度、穩(wěn)定性和重復(fù)性的RSD分別為2.7%、2.4%和3.4%，加樣回收率為97.20%。

2.6 其他方法

2012年Li Gu等人[37]報(bào)道了使用茜素紅做為電流指示器，基于硼酸功能化的多壁碳納米管的新型電化學(xué)傳感器用于黃芪甲苷含量的測(cè)定。2017年戰(zhàn)皓等人[38]采用近紅外漫反射光譜法對(duì)黃芪中毛蕊異黃酮葡萄糖苷和黃芪甲苷的含量進(jìn)行了測(cè)定。

3 結(jié)語(yǔ)

黃芪甲苷做為黃芪類藥物和保健食品的標(biāo)志性成分，其含量的測(cè)定方法主要有比色法、熒光法、薄層掃描法和液相色譜法等。比色法和熒光法的操作簡(jiǎn)單、成本低廉，可用于黃芪總皂苷含量的測(cè)定。薄層掃描法設(shè)備簡(jiǎn)單，操作方便，但預(yù)處理復(fù)雜，在早期的黃芪甲苷含量測(cè)定應(yīng)用較多。高效液相色譜法中使用的檢測(cè)器有：紫外檢測(cè)器(UVD)、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(ELSD)、質(zhì)譜檢測(cè)器(MSD)、電噴霧檢測(cè)器(CAD)、脈沖安培檢測(cè)器(PAD)。使用紫外檢測(cè)器直接測(cè)定干擾較為嚴(yán)重，將樣品進(jìn)行衍生化處理后可用紫外檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，但樣品的前處理復(fù)雜，測(cè)定樣品所需時(shí)間較長(zhǎng)。蒸發(fā)光散射檢測(cè)器具有靈敏度高、受干擾因素少等特點(diǎn)，目前黃芪甲苷含量的測(cè)定多用該檢測(cè)器。電噴霧檢測(cè)器在靈敏度和重現(xiàn)性方面均要好于ELSD，是今后推廣應(yīng)用的方向。質(zhì)譜檢測(cè)器和脈沖安培檢測(cè)器更適合于黃芪甲苷的微量分析。超高效液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)也用于黃芪甲苷的含量測(cè)定，該方法與高效液相色譜相比，具有檢測(cè)速度較快，靈敏度和分離度高等特點(diǎn)，是今后黃芪甲苷含量測(cè)定的發(fā)展方向。