文/宋晨光

小瓜蟲(chóng)病是由多子小瓜蟲(chóng)（簡(jiǎn)稱(chēng)小瓜蟲(chóng)）寄生于淡水魚(yú)體表和鰓上引起的危害嚴(yán)重的魚(yú)類(lèi)原蟲(chóng)病之一。然而，自特效藥物（孔雀石綠和汞鹽）被禁止使用以來(lái)，絕大部分化學(xué)藥物通過(guò)殺死離體階段小瓜蟲(chóng)達(dá)到防治目的，但在體抗蟲(chóng)效果有限且會(huì)對(duì)魚(yú)體產(chǎn)生毒性，食品安全、環(huán)境污染等一系列問(wèn)題限制了其進(jìn)一步的使用。天然產(chǎn)物具有易降解、對(duì)非靶標(biāo)生物毒性低、環(huán)境友好、資源豐富等優(yōu)點(diǎn)，是安全無(wú)公害水產(chǎn)抗寄生蟲(chóng)藥的理想來(lái)源。

近年來(lái)，天然產(chǎn)物用于防治小瓜蟲(chóng)病得到了廣泛關(guān)注。研究者發(fā)現(xiàn)了一系列中草藥提取物以及植物源化合物呈現(xiàn)出極強(qiáng)的抗小瓜蟲(chóng)效果，但是對(duì)環(huán)境的影響和毒性也同樣需要注意。這些天然產(chǎn)物的抗小瓜蟲(chóng)效果如下所述，并且離體及在體的相關(guān)研究結(jié)果匯總在表1以及相應(yīng)化合物結(jié)構(gòu)展示在圖1中。

Yao等（2011）通過(guò)對(duì)小果博落回葉使用三氯甲烷抽提后純化出兩種有效抗蟲(chóng)活性成分，分別為二氫血根堿和二氫白屈菜紅堿，對(duì)離體階段的小瓜蟲(chóng)有較強(qiáng)的抗蟲(chóng)活性，EC50分別為5.18mg/L和9.43mg/L；而兩種化合物對(duì)于赤眼鱒的急性毒性（LC50）分別為13.3mg/L和18.2mg/L。Yi等（2012）從30種中草藥篩選發(fā)現(xiàn)厚樸和苦豆子甲醇提取物，對(duì)小瓜蟲(chóng)滋養(yǎng)體、包囊和掠食體均有很好的效果，苦豆子甲醇提取物濃度320mg/L時(shí)，對(duì)小瓜蟲(chóng)包囊的致死率達(dá)到100%；而厚樸甲醇提取物效果更優(yōu)，10.0mg/L的提取物4h內(nèi)可100%殺死小瓜蟲(chóng)掠食體，20.0mg/L的提取物處理小瓜蟲(chóng)包囊20h后可完全阻止掠食體的產(chǎn)生，并且使用40.0mg/L的提取物浸泡患病金魚(yú)1h后可將小瓜蟲(chóng)掠食體的繁殖數(shù)量降低約50%。

Shan等（2014）從飛龍掌血中分離得到的白屈菜紅堿和茵芋堿分別在濃度為1.2mg/L和3.5mg/L時(shí)4h內(nèi)能100%殺滅離體階段的小瓜蟲(chóng)；在體試驗(yàn)表明，分別用1.8mg/L和8.0mg/L的兩種化合物可顯著減少寄生金魚(yú)的小瓜蟲(chóng)數(shù)量；而白屈菜紅堿對(duì)金魚(yú)的急性毒性（LC50）為3.3mg/L。Zhang等（2013）對(duì)五倍子分離純化后，得到活性化合物五沒(méi)食子酰葡萄糖，在使用濃度為2.5mg/L～20.0mg/L處理6min～234min對(duì)小瓜蟲(chóng)掠食體有100%的殺滅作用；用1.0mg/L、2.0mg/L和5.0mg/L的五沒(méi)食子酰葡萄糖能顯著降低小瓜蟲(chóng)的感染率，且在濃度為20mg/L能夠有效治療患病的斑點(diǎn)叉尾鮰并阻止小瓜蟲(chóng)感染幼魚(yú)；該化合物對(duì)斑點(diǎn)叉尾鮰的LC50值為151.3mg/L。

Ling等（2013）在進(jìn)行中草藥提取物抗原蟲(chóng)的試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，補(bǔ)骨脂的甲醇提取物濃度為1.25mg/L時(shí)4h內(nèi)對(duì)小瓜蟲(chóng)掠食體的致死率達(dá)100%；且5.0mg/L的提取物能100%殺死包囊前體以及88.89%的包囊；提取物成功阻止小瓜蟲(chóng)感染的最小濃度為1.2mg/L；使用5.0mg/L的提取物浸泡患病金魚(yú)24h可顯著降低小瓜蟲(chóng)的存活和繁殖。另一項(xiàng)研究顯示，Song等（2015）從補(bǔ)骨脂中分離得到的補(bǔ)骨脂定及異補(bǔ)骨脂素分別進(jìn)行離體及在體抗小瓜蟲(chóng)活性試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)補(bǔ)骨脂定是最有效的。在4h內(nèi)完全殺滅掠食體的濃度為0.8mg/L；分別用0.9mg/L處理包囊前體或1.2mg/L處理包囊可以終止其繁殖；此外，2.5mg/L的補(bǔ)骨脂定浸泡患病金魚(yú)5h能顯著降低小瓜蟲(chóng)掠食體的產(chǎn)生數(shù)量。

白桑樹(shù)的根皮用以研究其潛在的抗小瓜蟲(chóng)效果。Fu等（2014a）采用不同的提取方法從樹(shù)皮粉末中分離活性物質(zhì)，但其離體有效抗蟲(chóng)濃度要比提到的其它測(cè)試藥物高很多。此外，在另一項(xiàng)研究中，Liang等（2015）從桑樹(shù)根皮中得到的兩種類(lèi)黃酮（桑黃酮G和O）使用濃度超過(guò)2.0mg/L可以100%殺死小瓜蟲(chóng)掠食體并且在處理后能降低掠食體的感染力，桑黃酮G和O對(duì)草魚(yú)的半數(shù)致死濃度分別為38.0mg/L和26.9mg/L。

圖1 具有抗小瓜蟲(chóng)活性的植物源化合物化學(xué)結(jié)構(gòu)式匯總（1）二氫血根堿 （2）二氫白屈菜紅堿 （3）白屈菜紅堿（4）茵芋堿 （5）五沒(méi)食子酰葡萄糖 （6）補(bǔ)骨脂定（7）異補(bǔ)骨脂素 （8）桑黃酮G （9）桑黃酮O（10）纖細(xì)薯蕷皂苷 （11）盾葉新苷 （12）白薇苷-C（13）白薇苷-A （14）蔓生白薇苷C （15）姜黃素（16）大黃素 （17）厚樸酚

分離自植物閉鞘姜的纖細(xì)薯蕷皂苷和盾葉新苷展現(xiàn)出很好的離體及在體抗小瓜蟲(chóng)活性。Zheng等（2015）發(fā)現(xiàn)濃度分別為0.8mg/L和4.5mg/L的纖細(xì)薯蕷皂苷和盾葉新苷可以100%致死小瓜蟲(chóng)掠食體，而兩種化合物分別在1.0mg/L和5.0mg/L時(shí)能夠在處理6小時(shí)后完全殺死小瓜蟲(chóng)包囊前體及包囊；在體試驗(yàn)表明濃度分別為1.0mg/L和5.0mg/L的纖細(xì)薯蕷皂苷和盾葉新苷極大地提高了患病草魚(yú)的存活率并能減少寄生的滋養(yǎng)體數(shù)量；兩者的急性毒性（LC50）分別為1.64mg/L和20.7mg/L。

三種植物白薇、姜、徐長(zhǎng)卿的乙醇提取物，分別進(jìn)行抗小瓜蟲(chóng)掠食體、包囊前體和包囊的活性試驗(yàn)，并通過(guò)飼料添加用于治療已感染的草魚(yú)。濃度為8.0mg/L的姜提取物能100%致死小瓜蟲(chóng)掠食體，4.0mg/L的白薇提取物可以完全殺死小瓜蟲(chóng)包囊，但添加在飼料中的提取物發(fā)揮效果有限（Linetal.2016）。另一項(xiàng)研究表明，F(xiàn)u等（2014b，2015）從白薇中分離出的白薇苷-C在較低濃度0.25mg/L約5h能100%殺死離體階段的小瓜蟲(chóng)。相同的濃度用于在體感染試驗(yàn)，仍然有很好的保護(hù)和治療效果。此外，在毒性試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，對(duì)草魚(yú)的半數(shù)致死濃度（LC50）為46.8mg/L，因此認(rèn)為可以安全地用于防治小瓜蟲(chóng)病。Wen等（2017）從中藥徐長(zhǎng)卿中分離到兩種抗小瓜蟲(chóng)活性化合物白薇苷-A和蔓生白薇苷C，兩種化合物均在10.0mg/L時(shí)100%致死小瓜蟲(chóng)掠食體，在8.0mg/L時(shí)都能完全殺死小瓜蟲(chóng)包囊；用濃度為15.0mg/L的兩種化合物浸泡患病金魚(yú)10d均能顯著降低寄生的滋養(yǎng)體數(shù)量。

Liu等（2017）報(bào)道來(lái)自姜黃的姜黃素在濃度為1.0mg/L時(shí)21.7min能100%致死小瓜蟲(chóng)掠食體，且在31.0min內(nèi)用8.0mg/L的姜黃素可完全殺死小瓜蟲(chóng)包囊；而4.0mg/L的姜黃素處理16h能完全阻止包囊的繁殖；同時(shí)，患病草魚(yú)在4.0mg/L的姜黃素中浸泡10d后被完全治愈并且該濃度可使幼魚(yú)免遭小瓜蟲(chóng)感染；姜黃素對(duì)草魚(yú)96h的LC50值為56.8mg/L。

近期，Zhou等（2018）從植物虎杖中分離到的抗小瓜蟲(chóng)活性化合物大黃素，用1.0mg/L的大黃素96min能殺滅所有小瓜蟲(chóng)掠食體；盡管在濃度等于或小于0.5mg/L無(wú)法完全致死掠食體，但預(yù)處理2h可顯著降低掠食體的感染力；使用濃度為1.0mg/L和2.0mg/L的大黃素能夠分別終止小瓜蟲(chóng)包囊前體及包囊的繁殖；在體試驗(yàn)中，添加0.5mg/L的大黃素浸泡10d可治愈患病草魚(yú)并有效保護(hù)幼魚(yú)不被感染；而其對(duì)草魚(yú)的半數(shù)致死濃度為3.15mg/L。Song等（2018）研究發(fā)現(xiàn)天然化合物厚樸酚作為中草藥厚樸中的主要活性成分之一，在殺滅小瓜蟲(chóng)上有較好的效果，由于其化學(xué)結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，易于人工合成和修飾改造，是進(jìn)行藥物開(kāi)發(fā)的理想先導(dǎo)化合物。當(dāng)厚樸酚濃度大于0.6mg/L時(shí)能導(dǎo)致100%的小瓜蟲(chóng)掠食體死亡；濃度為0.8mg/L的厚樸酚，可導(dǎo)致約48%的包囊前體無(wú)法發(fā)育成包囊，且不能進(jìn)一步繁殖；而當(dāng)厚樸酚濃度大于1.0mg/L時(shí)，所有包囊均不能繁殖出掠食體。在體試驗(yàn)表明，1.5mg/L的厚樸酚浸泡患病金魚(yú)5h后可使小瓜蟲(chóng)繁殖力下降約40%。此外，通過(guò)形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，厚樸酚可以直接破壞小瓜蟲(chóng)細(xì)胞膜的完整性，并抑制小瓜蟲(chóng)二分裂繁殖。

以上大部分藥物對(duì)離體的小瓜蟲(chóng)均有較好的殺滅活性，但直接對(duì)寄生在魚(yú)類(lèi)身上的小瓜蟲(chóng)進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)探究較少。滋養(yǎng)體階段的小瓜蟲(chóng)外面包被一層較厚的宿主保護(hù)層，對(duì)藥物相對(duì)不敏感，只有離體階段的小瓜蟲(chóng)對(duì)藥物較敏感。天然產(chǎn)物對(duì)幼蟲(chóng)期、包囊期的小瓜蟲(chóng)殺滅效果明顯，有效藥物也較多，亟須積極開(kāi)發(fā)能作用于滋養(yǎng)體階段小瓜蟲(chóng)的藥物。大多數(shù)中草藥提取物抗蟲(chóng)活性一般，且提取工藝復(fù)雜、成本較高；而天然化合物即便擁有良好的抗蟲(chóng)活性，但由于產(chǎn)率低或化學(xué)結(jié)構(gòu)復(fù)雜無(wú)法進(jìn)行人工合成，從而限制了其進(jìn)一步地開(kāi)發(fā)和利用。同時(shí)，對(duì)天然產(chǎn)物藥效、毒力及藥理作用尚未進(jìn)行細(xì)致深入的研究，大多數(shù)天然產(chǎn)物作用機(jī)制尚不明確。開(kāi)發(fā)出一款防治小瓜蟲(chóng)病安全、高效、廉價(jià)的替代藥物，還需要研究者們不斷地努力。

表1 近年來(lái)天然產(chǎn)物離體及在體抗小瓜蟲(chóng)活性研究匯總表