王平康　李立學　張祥　汪桂香

[摘要] 目的 探討支原體肺炎（MPP）合并細菌感染患兒T細胞亞群及降鈣素原（PCT）檢測的臨床意義。 方法 選擇2016年10月～2018年3月四川省簡陽市人民醫(yī)院（以下簡稱“我院”）兒科收治的MPP患兒106例，依據(jù)病原學檢查結(jié)果分為單純MPP組（41例）和細菌感染組（MPP合并細菌感染，65例），另選健康兒童50名為對照組，抽取靜脈血檢測PCT、C反應蛋白（CRP）、白細胞計數(shù)（WBC），采用熒光激活細胞分離儀（FACS）計數(shù)CD4+T細胞、CD8+T細胞。 結(jié)果 細菌感染組PCT、CRP、WBC均顯著高于對照組和單純MPP組（P < 0.05），單純MPP組CRP顯著高于對照組（P < 0.05）。細菌感染組和單純MPP組CD4+T細胞顯著低于對照組，細菌感染組CD4+T細胞低于單純MPP組（P < 0.05）;細菌感染組和單純MPP組CD8+T細胞顯著高于對照組（P < 0.05）;細菌感染組和單純MPP組CD4+/CD8+顯著低于對照組，細菌感染組CD4+/CD8+低于單純MPP組（P < 0.05）。ROC分析：PCT及T細胞亞群指標對細菌感染的診斷價值較高，其中PCT的AUC為0.8以上。 結(jié)論 MPP合并細菌感染患兒CD4+/CD8+降低、血清PCT濃度升高，T細胞亞群和PCT檢測對于鑒別MPP患者有無合并細菌感染具有重要意義，結(jié)合其他輔助檢查有助于早期準確判斷病情，減少抗生素濫用。

[關(guān)鍵詞] 支原體肺炎;細菌感染;T細胞亞群;降鈣素原

[中圖分類號] R725.6 ? ? ? ? ?[文獻標識碼] A ? ? ? ? ?[文章編號] 1673-7210（2019）05（c）-0081-04

[Abstract] Objective To explore the valve of detection of T cell subsets and procalcitonin （PCT） in children with Mycoplasma pneumoniae pneumonia （MPP） combined with bacterial infection. Methods A total of 106 children with MPP was recruited from October 2016 to March 2018 in Department of Pediatrics， Jianyang People′s Hospital of Sichuan Province （"our hospital" for short）， and were divided into MPP group （41 cases） and bacterial infection group （MPP combined with bacterial infection， 65 cases） according to pathogeny examination， 50 cases of healthy children were recruited as control group. The blood were collected to count CD4+T cells， CD8+T cells by fluorescence activated cell sorter， and PCT， C reactive protein （CRP）， white blood cell （WBC） were detected. Results PCT， CRP and WBC in bacterial infection group were significantly higher than those in control group and MPP group （P < 0.05）， and CRP in MPP group was significantly higher than that in control group （P < 0.05）. CD4+T cells in bacterial infection group and MPP group were significantly lower than those in control group， CD4+T cells in bacterial infection group were lower than those in MPP group （P < 0.05）. CD8+T cells in bacterial infection group and MPP group were significantly higher than those in control group （P < 0.05）. CD4+/CD8+ in bacterial infection group and MPP group were significantly lower than those in control group， CD4+/CD8+ in bacterial infection group was lower than that in MPP group （P < 0.05）. ROC analysis showed that PCT and T cell subsets had a higher diagnostic value for bacterial infections， of which PCT AUC was more than 0.8. Conclusion CD4+/CD8+ reducted and serum PCT concentration elevated in children with MPP combined with bacterial infection. The detection of T cell subsets and PCT is of great significance in identifying whether MPP patients combined with bacterial infection. With the help of other auxiliary examinations， it can pricisely judge disease and reduce the abuse of antibiotics.

[Key words] Mycoplasma pneumoniae pneumonia; Bacterial infection; T cell subsets; Procalcitonin

感染性疾病是兒科中常見的疾病，尤以肺部感染最常見，常見的病原體包括細菌和支原體，支原體是一種非典型微生物，不同于細菌和病毒[1]，支原體肺炎（Mycoplasma pneumoniae pneumonia，MPP）主要通過呼吸道飛沫傳播，患者一般為大齡兒童和青少年，流行病學研究顯示，國內(nèi)社區(qū)獲得性肺炎中10%～30%由支原體感染導致[2]，國外研究中支原體感染占比更高，國內(nèi)外研究均顯示，支原體感染有增高趨勢[3]。不同病原體感染導致的肺炎，早期缺乏典型臨床表現(xiàn)，而目前常用的病原學檢測方法病原體體外培養(yǎng)耗時較長，難以提供早期抗生素治療的參考依據(jù)，容易導致過度治療或延誤治療時機[4]。C反應蛋白（C reactive protein，CRP）和白細胞計數(shù)（white blood cell，WBC）對于判斷細菌感染具有一定參考價值，但缺乏早期診斷的準確性。降鈣素原（procalcitonin，PCT）是降鈣素的前體之一，正常血液中幾乎檢測不到PCT，細菌感染時PCT水平顯著升高[5]。T細胞亞群能夠反映機體細胞免疫功能，對于鑒別感染具有參考價值[6]。本研究主要分析T細胞亞群和PCT對診斷患兒肺炎病原體的臨床價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2016年10月～2018年3月四川省簡陽市人民醫(yī)院（以下簡稱“我院”）兒科收治的支原體肺炎患兒106例（肺炎組），男55例，女51例，年齡6個月～13歲，平均（5.6±2.7）歲。納入標準：①診斷標準符合《諸福棠實用兒科學》[7]MPP診斷標準;②初次就診，就診前未使用過抗生素治療;③家長了解本研究內(nèi)容且自愿參加本研究。排除標準：①嚴重肝腎功能障礙;②免疫系統(tǒng)疾病，近期其他嚴重感染或外傷;③高血壓、心臟病、惡性腫瘤等;④合并病毒感染?；純阂罁?jù)病原學檢查結(jié)果分為單純MPP組（41例）和細菌感染組（合并細菌感染，65例）。另選同期在我院兒保科體檢的健康兒童50例為對照組，均排除近期感染、發(fā)熱、既往免疫系統(tǒng)疾病等，其中男26例，女24例，年齡6個月～12歲，平均（5.5±2.8）歲。肺炎組及對照組兒童性別、年齡比較，差異無統(tǒng)計學意義（P > 0.05），具有可比性。本研究經(jīng)我院醫(yī)學倫理委員會審查通過，所有患兒家屬均了解本研究，并簽署知情同意書。

1.2 診斷標準

支原體肺炎：弛張熱或不規(guī)則發(fā)熱，持續(xù)劇烈咳嗽;呼吸音粗，干、濕啰音或肺實變體征;胸部X線片表現(xiàn)為支氣管肺炎、間質(zhì)性肺炎、大葉性肺炎或肺門淋巴結(jié)腫大;血清MP-Ab-IgM陽性或寒冷凝集≥1∶32;白細胞正?；蛏愿撸t細胞沉降率增快[7]。

1.3 研究方法

所有研究對象于納入研究次日清晨抽取空腹靜脈血9 mL，分3管保存，一管用檢驗PCT及CRP，PCT采用熒光免疫層析法，試劑盒購自廣州天寶頌原生物科技有限公司（產(chǎn)品貨號：TB00-012），CRP采用免疫比濁法，試劑盒購自美國BECKMAN公司（產(chǎn)品貨號：B47970），操作嚴格按照說明書進行;一管用雙標流式細胞法檢測T細胞亞群水平，采用BD公司FACScalibur熒光激活細胞分離儀（fluorescence activated cell sorter，F(xiàn)ACS）進行分析，計數(shù)CD3+T細胞、CD4+T細胞、CD8+T細胞;最后一管采用BECKMAN公司XE5000多功能血液生化分析儀進行血常規(guī)分析，記錄WBC。將PCT及T細胞亞群指標結(jié)果分成7～8個組段，分別為PCT（ng/mL）：≤0.1、>0.1～0.2、>0.2～0.5、>0.5～1.0、>1.0～2.0、>2.0～3.0、>3.0;CD4+（%）：≤20、>20～25、>25～30、>30～35、>35～40、>40～50、>50;CD8+（%）：≤20、>20～25、>25～30、>30～35、>35～40、>40～45、>45;CD4+/CD8+：<0.25、0.25～<0.5、0.5～<0.75、0.75～<1.0、1.0～<1.5、1.5～<2.0、≥2.0;以細菌感染組為陽性樣本，其他兩組為陰性樣本，進行ROC分析。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 17.0進行統(tǒng)計分析，計量資料均為正態(tài)及輕微偏態(tài)資料，用均數(shù)±標準差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，進一步兩兩比較采用LSD-t檢驗;計數(shù)資料用百分比（%）表示，組間比較采用χ2檢驗;診斷價值分析為ROC分析，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 三組生化指標比較

細菌感染組PCT、CRP、WBC均顯著高于對照組和單純MPP組（P < 0.05），單純MPP組CRP顯著高于對照組（P < 0.05），單純MPP組與對照組PCT、WBC比較差異無統(tǒng)計學意義（P > 0.05）。見表1。

2.2 三組T細胞免疫功能比較

細菌感染組和單純MPP組CD4+T細胞顯著低于對照組，細菌感染組CD4+T細胞低于單純MPP組（P < 0.05）;細菌感染組和單純MPP組CD8+T細胞顯著高于對照組（P < 0.05）;細菌感染組和單純MPP組CD4+/CD8+顯著低于對照組，細菌感染組CD4+/CD8+低于單純MPP組（P < 0.05）。見表2。

2.3 PCT及T細胞亞群指標對細菌感染的診斷價值分析

PCT的診斷指標AUC、Se和Sp都在0.8以上。而CD4+、CD8+及CD4+/CD8+等3個T細胞亞群指標稍次之（均P < 0.05），AUC、Se和Sp也在0.6以上。見表3、圖1。

3 討論

支原體是非細胞內(nèi)生長的最小微生物，體積介于細菌和病毒之間，屬于原核生物，不能離開宿主獨立存活，它沒有細胞壁，故作用于細胞壁的抗生素如青霉素等對支原體引起的感染治療效果不佳[8]。支原體的膜蛋白具有抗原性，是其主要致病因子，可黏附于氣道上皮細胞膜的受體上，其具體致病機制尚不清楚，不過學者普遍認為與免疫機制有關(guān)。支原體感染宿主后，刺激B淋巴細胞活化，產(chǎn)生特異性IgM、IgG、IgA，此外支原體還可引起宿主細胞膜抗原結(jié)構(gòu)改變，誘導機體產(chǎn)生自身免疫抗體，引起病理免疫反應[9]。有研究發(fā)現(xiàn)，MPP患者IgE水平與支氣管哮喘患者接近[10]，提示支原體不僅是引起感染的病原體，而且是誘發(fā)機體變態(tài)反應的過敏原。

支原體感染后，支原體作為抗原激活抗自身T淋巴細胞并影響T淋巴細胞亞群的比例，導致機體免疫調(diào)節(jié)功能紊亂，發(fā)生自身免疫反應[11]。CD3是成熟T細胞特有的表面標志，根據(jù)成熟T細胞表面CD分子表達差異將CD3+T細胞分為CD4+T細胞和CD8+T細胞兩個亞群，兩者的比例是反映機體免疫狀態(tài)的重要指標，CD4+/CD8+比值降低表明機體細胞免疫功能受到抑制[12]。本研究結(jié)果顯示，MPP患者CD4+T降低，CD8+T升高，CD4+/CD8+降低，與既往研究結(jié)果一致[13]。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)，MPP合并細菌感染患兒CD4+T/CD8+T低于單純支原體感染患兒，提示細菌感染加重MPP患者細胞免疫功能紊亂程度，在治療時除了積極使用敏感抗生素外，還應考慮增強機體免疫功能。ROC分析也提示，CD4+，CD8+，CD4+/CD8+都是有一定價值的診斷MPP合并細菌感染的指標，其AUC、Se、Sp均在0.6以上。

PCT是細菌感染的敏感指標，最早見于Assicot等[5]的研究，血清PCT是糖蛋白的一種，是降鈣素的前體蛋白，無激素活性，血液中濃度<0.1 ng/mL，細菌感染時PCT進入血液，濃度可迅速增高10 000倍，研究顯示，細菌感染2 h后即可檢測到，6 h后急劇升高，可維持8～24 h[14]。PCT具有生成快、半衰期長、不受臨床藥物影響的特點，因此是鑒別細菌和非細菌感染的重要指標，有研究表明，其濃度與感染程度呈正相關(guān)[15-16]。本研究結(jié)果也顯示，單純MPP患兒與對照組相比，PCT濃度無明顯改變，而MPP合并細菌感染患兒PCT濃度顯著高于對照組和單純MPP組。ROC分析提示，其可能是診斷MPP合并細菌感染的一個非常好的指標，ROC-AUC高達0.882。敏感度和特異度也都在0.8以上的高水平。

CRP是一種急性時相蛋白，在機體感染、應激和組織損傷時，迅速合成，能夠激活補體、刺激淋巴細胞和單核/巨噬細胞，增強吞噬作用[17-19]，因此可根據(jù)CRP水平判斷感染嚴重程度和治療效果，但是CRP并不能鑒別感染病原，本研究結(jié)果顯示，MPP合并細菌感染患兒CRP水平顯著高于單純MPP患者，提示后者體內(nèi)感染程度更重。

WBC是臨床最常用的炎癥標志物之一，WBC是血液非特異性免疫的重要組成，一般細菌感染時WBC升高，病毒等感染時WBC無明顯變化或者下降，WBC容易受患者年齡、生理狀態(tài)、免疫功能、治療等影響[20-21]，難以正確反映疾病狀態(tài)，但是由于WBC檢測迅速、費用低，仍然作為臨床實驗室檢查的首選指標。本研究也發(fā)現(xiàn)MPP合并細菌感染患者WBC升高，而單純MPP患者與對照組相比無明顯改變。

綜上所述，MPP合并細菌感染患兒CD4+/CD8+T降低、血清PCT濃度升高，對于鑒別MPP患者有無合并細菌感染具有重要意義，結(jié)合其他輔助檢查有助于早期準確判斷病情，減少抗生素濫用。

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