史彥會 劉萌 楊偉

菠菜是一種較為普遍食用的蔬菜，價格低廉、營養(yǎng)豐富受到廣大消費者歡迎。但菠菜周年生長，易發(fā)病蟲害，如果農(nóng)藥使用不合理，病蟲害抗藥性增強、用藥不斷增大，農(nóng)殘超標現(xiàn)象便會惡性循環(huán)，這對菠菜的質量安全以及消費者健康造成巨大隱患[1]。本文采用QuEChERS法對樣品進行提取凈化，凈化劑的種類和劑量將影響實驗的準確性，但在實際試驗中加入不同種類和劑量的凈化劑進行凈化操作，操作復雜，耗時長，因此本實驗選擇兩個廠家三種不同凈化劑組合的凈化試劑盒進行優(yōu)化，結合液相色譜-串聯(lián)質譜法建立了快速測定菠菜中16種農(nóng)藥殘留的測定方法并對方法進行了驗證。

1 實驗部分

1.1 材料和試劑

1.1.1 儀器與試劑 Agilent 1290Ⅱ-6470超高效液相色譜-串聯(lián)三重四級桿質譜儀；日立CR21N落地式大容量高速離心機；ME3002梅特勒電子天平；IKA渦旋混合器；16種農(nóng)藥物質標準溶液，涕滅威砜、噻蟲嗪、多菌靈、吡蟲啉、3-羥基克百威、啶蟲脒、涕滅威、克百威、嘧霉胺、烯酰嗎啉、氟甲腈、氟蟲腈、氟蟲腈亞砜、氟蟲腈砜、咪鮮胺、噠螨靈，均為1 000 μg/mL，購于農(nóng)業(yè)部環(huán)境質量監(jiān)督檢驗測試中心（天津）；乙腈、甲醇（色譜純，德國CNW公司）；商品化QuEChERS提取管、凈化管（天津博納艾杰爾公司、美國安捷倫公司）；0.22 μm有機系針頭濾器（天津博納艾杰爾公司）；菠菜購于當?shù)剞r(nóng)貿(mào)市場。

1.2 實驗方法

1.2.1 標準溶液配制 準確移取各1 000 μg/mL標準物質溶液1 mL于100 mL容量瓶中，甲醇配制成10 μg/mL的混合標準溶液。0～4℃保存，有效期6個月。

供試品溶液的制備 稱取10.00 g菠菜樣品于QuEChERS提取管中，放入陶瓷或玻璃均質子，充分搖勻0混勻后，加入20 mL乙腈；加入提取鹽包，劇烈震蕩1 min，8 000 r/min離心3 min；取上清液5 mL于QuEChERS凈化管中，渦旋30 s，5 000 r/min 離心3 min，取上清液過0.22 μm膜，即得。

1.2.2 實驗條件 （1）液相色譜條件：色譜柱：Agilent Eclipse Plus C18，（2.1×50 mm，RRHD 1.8 μm），柱溫35℃；流速0.3 mL/min；進樣量2 μL；流動相A為含0.1%甲酸水溶液，B為甲醇乙腈（1：1）。梯度洗脫程序：0～5 min 25%～75% B；5～7 min 75%～100% B；7～8 min 100% B；8～8.5 min 100%～25% B；8.5～11 min 25% B。

（2）質譜條件：離子源：電噴霧離子源（ESI）；毛細管電壓：3 500 V；干燥氣溫度：325℃，干燥氣流量：6 L/min；鞘氣溫度：350℃，鞘氣流量：11 L/min；掃描模式：動態(tài)多反應監(jiān)測（MRM）正離子或負離子模式。

2 結果與討論

2.1 色譜行為

16種農(nóng)藥0.01 μg/mL混合標準溶液的MRM色譜圖，見圖1。

2.2 凈化劑的選擇

由于菠菜色素含量較高，因此選擇了2個品牌3種不同QuEChERs凈化管，按照供試品溶液制備方法制備供試品溶液，測定使用不同凈化管時的回收率，以比較其對結果的影響。

經(jīng)過三種不同凈化劑處理后，各項農(nóng)殘加標回收率均在80%～110%，但經(jīng)A管凈化后的各項農(nóng)殘加標回收率低于B管，這可能是由于A管凈化劑中無GCB，由于菠菜含有較高的葉綠素，故凈化效果不佳，基質效應干擾較強，導致回收率較低。而C管凈化劑中含有過高的GCB，對有些農(nóng)殘存在一定的吸附作用，導致回收率較低。因此綜合比較，B管的凈化效果最好，回收率更趨于100%。

2.3 基質效應的考察

基質效應（matrix effect，ME）是影響定量分析的準確度和重現(xiàn)性。尤其使用ESI源，基質效應會對目標化合物的離子起到抑制作用[2]。基質效應可按照下式進行量化評估：

圖1 16種農(nóng)藥0．01 μg/mL混合標準溶液的MRM色譜圖

弱基質效應（︳ME︳＜20%）時，無需采取補償措施，中等程度基質效應（20%≤︳ME︳≤50%）或強基質效應（︳ME︳＞50%）時必須采取補償措施[3]。本文按照1.3進行前處理，選擇B安捷倫高色素凈化管進行凈化，按1.2.1配制的混合標準溶液用基質空白溶液稀釋至0.1 μg/mL，用甲醇配制同濃度的溶劑標準溶液，測定5次，取其平均值，按上式進行基質效應的量化評估，結果如表1，在菠菜樣品基質中，16中目標農(nóng)藥均為弱基質效應。因此該前處理方法能夠很好地去除干擾物質，方法準確度高。

2.4 儀器工作條件的選擇

2.4.1 流動相的選擇 考察了流動相A 0.1%甲酸水-乙腈、流動相B 0.1%甲酸水-甲醇乙腈（1：1）、流動相C 含0.1%甲酸的5 mmol/L乙酸胺水溶液-甲醇乙腈（1：1）三種不同流動相條件下，對16種目標農(nóng)藥的分離效果和離子化效率，結果表明，在1.2.2洗脫條件下，16種目標農(nóng)藥在B流動相下響應值更高，因此選用0.1%甲酸水-甲醇乙腈（1：1）為流動相。

2.4.2 質譜條件的優(yōu)化 根據(jù)16種目標農(nóng)藥的結構特性，采用ESI，正負離子同時掃描模式，采用MRM進行測定。采用質譜優(yōu)化軟件，分別對16種目標農(nóng)藥的各項質量參數(shù)進行自動優(yōu)化，得到最佳裂解電壓和碰撞能量，以得到最佳檢測靈敏度。

2.5 標準曲線和檢出限

由2.3得16種目標農(nóng)藥均為弱基質效應，無需采取補償措施，因此對1.2.1混合標準溶液用甲醇配制成一系列不同濃度標準溶液，按儀器工作條件進行測定。結果表明，16種目標農(nóng)藥在0.01～0.1 μg/mL內與其對應的響應值均呈線性關系，線性回歸方程與相關系數(shù)，見表1。

2.6 方法的準確度和精密度

通過加標回收試驗，評價本方法的準確度和精密度。通過對高、中、低不同加標濃度下，平行6次試驗，按試驗方法測定并計算回收率，結果見表1，16種目標農(nóng)藥的在菠菜樣品中平均回收率為82.3%～104.2%，相對標準偏差RSD為1.9%～11.8%。

2.7 樣品分析

采集某蔬菜基地的10個菠菜樣品，按照本試驗方法進行測定，結果均未檢出16種目標農(nóng)藥殘留。

3 討論

目前，多農(nóng)藥殘留的測定方法主要有氣相色譜法[4]、液相色譜法[5]、氣相色譜-質譜法[6]、氣相色譜-串聯(lián)質譜法[7]、液相色譜-串聯(lián)質譜法[8]等。氣相色譜和液相色譜法抗干擾性差、檢測時間長，且容易出現(xiàn)假陽性。液相色譜串聯(lián)質譜法因其高分辨率、高通量、高靈敏、抗干擾力強度等優(yōu)點，近年來在農(nóng)藥多殘留檢測技術方向得到廣泛應用。樣品的前處理多為固相萃取法，固相萃取法雖然能夠很好地去除雜質，但操作相對復雜、耗時長、溶劑用量較大[9]。QuEChERS于2003年首先報道被用于果蔬中[10]。作為快速、簡便、高效、安全的前處理方法，QuEChERS法在農(nóng)藥多殘留快速檢測中得到廣泛的研究與應用[11-13]。

表1 16種農(nóng)藥的線性方程、相關系數(shù)、檢出限、基質效應、回收率和相對標準偏差

QuEchERS凈化方法為分散固相萃?。╠SPE）凈化，固相萃取劑直接加入樣品提取液以吸附干擾物。常用的固相吸附劑有C18粉、GCB、PSA、無水MgSO4等，C18粉可吸附脂肪等非極性干擾物，PSA可吸附碳水化合物、有機酸等極性物質，GCB可去除基質中的色素和非極性干擾物質，無水MgSO4可去除有機相中的水分[14]。但凈化劑的種類和劑量不同，但劑量的不同影響基質的凈化效果，吸附劑對目標化合物的吸附會導致回收率降低，檢測的準確度[15]，因此對凈化劑的種類和用量進行了優(yōu)化，確定出了最佳的凈化劑。并建立了同時測定菠菜中16種多農(nóng)藥殘留的高效液相色譜-串聯(lián)質譜方法，經(jīng)驗證該方法快速簡便，線性關系良好，準確可靠，有較好的準確度和精密度，適用于菠菜中農(nóng)藥多殘留檢測。