黃良玖，劉日升，馬婷

(海南省腫瘤醫(yī)院，?？?70130)

克羅恩病(CD)是一種慢性腸道炎性疾病，近年來其發(fā)病率呈逐年上升趨勢[1]。CD臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、慢性腹瀉腹痛，反復(fù)發(fā)作可導(dǎo)致營養(yǎng)不良[2，3]；如治療不及時，會引起腸穿孔、腸梗阻及腸瘺等嚴重并發(fā)癥[4]。常規(guī)治療藥物有氨基水楊酸類、糖皮質(zhì)激素類及免疫抑制劑等，但療效并不理想[5]。近年來有研究[6]發(fā)現(xiàn)，腸道菌群失調(diào)與CD的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。三聯(lián)活菌膠囊為含有雙歧桿菌、乳酸桿菌和腸球菌的復(fù)方制劑，常用于治療腸道菌群失調(diào)所致的急慢性腹瀉及便秘等。因此，我們將雙歧桿菌三聯(lián)活菌膠囊用于CD的治療，評價其在CD治療中的臨床價值?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集海南省腫瘤醫(yī)院2016年7月～2018年5月收治的CD患者。納入標準：①符合2012年炎癥性腸病診斷與治療的共識意見中CD相關(guān)診斷標準；②經(jīng)結(jié)腸鏡檢查、胃腸鋇餐造影和黏膜組織學(xué)檢查確診；③年齡23～65歲；④3個月內(nèi)無外科手術(shù)史、輸血史，半月內(nèi)未使用過類固醇、抗生素、益生菌等制劑藥物；⑥簽署知情同意書。排除標準：①合并心、肝、腎等其他臟器重大疾??；②合并內(nèi)分泌疾病、惡性腫瘤；③合并細菌性痢疾、缺血性腸炎、潰瘍性結(jié)腸炎；④合并精神疾病或意識障礙；⑤哺乳期或妊娠期女性。共選取符合標準的CD患者84例，其中常規(guī)治療42例(對照組)、輔以雙歧桿菌三聯(lián)活菌膠囊42例(觀察組)。觀察組男23例、女19例，年齡(48.82±11.29)歲，病程(2.39±0.55)年，病情程度中度16例、重度26例，克羅恩病活動指數(shù)(CDAI)評分(10.97±1.32)分。對照組男25例、女17例，年齡(48.52±11.71)歲，病程(2.38±0.49)年，病情程度中度19例、重度22例，CDAI評分(11.01±1.21)分。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準，兩組性別、年齡、病程、病情、CDAI評分具有可比性。

1.2 治療方法 患者服藥期間調(diào)整保持情緒平穩(wěn)，忌食辛辣、生冷等刺激性較大的食物。對照組口服美沙拉嗪(佳木斯鹿靈制藥有限公司，生產(chǎn)批號20160512)1.0 g，3次/d。觀察組在對照組基礎(chǔ)上溫水口服2.0 g雙歧桿菌三聯(lián)活菌膠囊(紐迪希亞制藥有限公司，生產(chǎn)批號20160322)2次/d，兩組療程均為28 d。

1.3 療效判定方法 顯效：臨床癥狀及體征消失，腸鏡或組織病理學(xué)檢查提示腸道黏膜炎癥反應(yīng)趨于穩(wěn)定狀態(tài)；有效：臨床癥狀體征較治療前改善，腸鏡或組織病理學(xué)檢查提示腸道黏膜炎癥反應(yīng)較治療前緩解；無效：未達到上述標準?？傆行?顯效率+有效率。

1.4 腸道菌群檢測方法 采用PCR法。分別于治療前、治療28 d，收集患者中段新鮮糞便標本；以細菌基因組DNA提取試劑盒提取總DNA，乳酸桿菌、雙歧桿菌、擬桿菌、大腸桿菌、腸球菌、金黃色葡萄球菌及酵母菌7種腸道細菌的引物由上海生工生物公司合成。PCR產(chǎn)物采用瓊脂糖凝膠電泳檢測，瓊脂糖凝膠電泳濃度2%、電壓5 V/cm、時間30 min。參照初步定量結(jié)果再進行熒光定量檢測，最后利用Illumina MiSeq平臺進行高通量測序。PCR反應(yīng)條件：95 ℃ 3 min，95 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 45 s，27個循環(huán)；72 ℃ 10 min。以Quanti FluorTM-ST藍色熒光定量系統(tǒng)獲取數(shù)據(jù)，用log拷貝數(shù)/濕便重(g)表示菌群數(shù)量。

1.5 血清白蛋白(ALB)、總蛋白(TLB)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)、C反應(yīng)蛋白(CRP)檢測方法 分別于治療前后清晨取外周靜脈血，室溫下以3 000 r/min離心15 min，分離血清。采用7600型全自動生化分析儀檢測ALB、TLB，采用680型酶標儀以ELISA法檢測TNF-α、CRP，操作步驟嚴格按照說明書進行。

2 結(jié)果

2.1 兩組臨床療效比較 觀察組顯效17例、有效19例、無效6例、總有效率85.71%，對照組顯效9例、有效18例、無效15例、總有效率64.29%，觀察組總有效率高于對照組(P<0.05)。

2.2 兩組腸道菌群數(shù)量比較 治療前，兩組7種腸道菌群數(shù)量差異無統(tǒng)計學(xué)意義。治療后，觀察組乳酸桿菌和雙歧桿菌數(shù)量高于治療前及對照組，而擬桿菌數(shù)量低于治療前及對照組(P均<0.05)，大腸桿菌、腸球菌、金黃色葡萄球菌及酵母菌數(shù)量與對照組差異無統(tǒng)計學(xué)意義。見表1。

表1 兩組腸道菌群數(shù)量比較(LogN/g濕便,

注：與同組治療前比較，*P<0.05；與對照組同時點比較，#P<0.05。

2.3 兩組血清TNF-α、CRP水平比較 治療前，兩組血清TNF-α、CRP水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義；治療后，觀察組血清TNF-α、CRP水平低于治療前及對照組(P均<0.05)。見表2。

表2 兩組血清TNF-α、CRP水平比較

注：與同組治療前比較，*P<0.05；與對照組同時點比較，#P<0.05。

2.4 兩組ALB、TLB比較 治療前，兩組ALB、TLB水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義；治療后，觀察組ALB、TLB水平高于治療及對照組(P均<0.05)。見表3。

表3 兩組ALB、TLB比較

注：與同組治療前比較，*P<0.05；與對照組同時點比較，#P<0.05。

3 討論

CD患者常由于腸黏膜破壞、不同程度厭食、胃腸功能減退、胃腸營養(yǎng)液流失等原因造成營養(yǎng)不良[7]，患者抵抗外界感染能力下降而導(dǎo)致疾病進一步惡化。美沙拉嗪是一種新型水楊酸類藥物，但其不良反應(yīng)較多，部分患者耐受性較差[8，9]。

有研究發(fā)現(xiàn)，通過為腸黏膜組織提供充分的營養(yǎng)物質(zhì)可起到修復(fù)腸黏膜的作用，避免腸黏膜屏障破壞，能有效抑制腸道上皮細胞長期暴露于腸道細菌中而誘發(fā)的炎癥“瀑布”現(xiàn)象。腸黏膜恢復(fù)和腸道功能的改善，最終有利于改善患者的營養(yǎng)狀態(tài)[10]。腸道菌群失衡可加重腸道功能紊亂，進而加重CD病情。有研究報道，在常規(guī)治療基礎(chǔ)上調(diào)整腸道菌群有助于改善腸道吸收功能，改善機體營養(yǎng)狀況[11]。雙歧桿菌三聯(lián)活菌膠囊是集多種正常腸道菌群于一體的微生態(tài)制劑，其活性成分為雙歧桿菌、乳酸桿菌和腸球菌。雙歧桿菌、乳酸桿菌可抑制有害菌的生長和腸道內(nèi)容物腐敗，合成人體所必需的維生素，促進人體對礦物質(zhì)的吸收；產(chǎn)生有機酸刺激腸道蠕動，促進排便，凈化腸道環(huán)境、分解致癌物質(zhì)；刺激人體免疫系統(tǒng)，提高抗病能力。腸球菌可產(chǎn)生天然抗生素，抑制大腸桿菌、沙門菌等有害菌的生長，改善腸道微環(huán)境，還能抑制腸道內(nèi)產(chǎn)尿素酶細菌和腐敗菌的繁殖，可有效改善CD患者腸道菌群失衡和功能紊亂現(xiàn)象，改善患者腸道功能有利于提高臨床療效。同時，雙歧桿菌三聯(lián)活菌具有消化功能，可促進腸黏膜充分吸收營養(yǎng)物質(zhì)，顯著增強患者抵抗力，為疾病治療提供基礎(chǔ)和保障[12]。本研究結(jié)果顯示，觀察臨床總有效率高于對照組，說明雙歧桿菌三聯(lián)活菌輔助治療CD療效可靠。

CD患者由于腸黏膜受損，腸道屏障破壞，菌群失調(diào)，加上感染、環(huán)境等外界持續(xù)性抗原刺激，進一步損傷腸黏膜細胞。此時，機體免疫系統(tǒng)異常過度激活，誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)和免疫級聯(lián)放大過程。該過程釋放大量炎癥因子，進一步損傷黏膜組織，使腸道功能狀態(tài)惡化。其中，CRP是炎癥反應(yīng)過程重要的反應(yīng)因子，其水平高低可反映炎癥反應(yīng)程度，間接反映病情嚴重程度[13]。有研究報道， TNF-α是CD發(fā)病機制中重要的炎癥因子，可反映CD情嚴重程度。TNF是誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的重要物質(zhì)，通過刺激IL-6、IL-1、γ干擾素等多種細胞因子持續(xù)放大炎癥反應(yīng)過程[14]。本研究結(jié)果顯示，與對照組比較，觀察組血清TNF-α、CRP水平降低。這提示雙歧桿菌三聯(lián)活菌可改善CD炎癥反應(yīng)程度，恢復(fù)腸黏膜結(jié)構(gòu)和功能，對提高腸道功能及其營養(yǎng)狀態(tài)具有積極作用。本研究結(jié)果顯示，觀察組血清ALB、TLB水平升高，與李寧等[15]報道結(jié)果一致,說明雙歧桿菌三聯(lián)活菌對改善CD患者營養(yǎng)狀態(tài)有效。由于雙歧桿菌三聯(lián)活菌含有多種腸道正常菌群，故其可補充腸道正常菌群，糾正紊亂的腸道微環(huán)境；腸道微環(huán)境一旦得到改善，腸黏膜功能恢復(fù)，充分吸收營養(yǎng)物質(zhì)而促進自身修復(fù)，提高腸道營養(yǎng)狀態(tài)，增強患者免疫能力，糾正異常菌群移位現(xiàn)象。本研究發(fā)現(xiàn)，口服雙歧桿菌三聯(lián)活菌膠囊后，患者腸道中益生菌乳酸桿菌、雙歧桿菌水平上升，擬桿菌水平降低。因此，我們認為，雙歧桿菌三聯(lián)活菌膠囊輔助治療CD療效顯著，可改善患者腸道菌群，降低血清炎癥因子水平，提高機體營養(yǎng)狀態(tài)。