韓潔潔，韓麗麗，楊偉偉，王玉治

(1德州市第二人民醫(yī)院，山東德州253000；2德州市人民醫(yī)院)

乳腺癌發(fā)病率呈逐年上升趨勢且發(fā)病年齡越來越年輕化[1]。乳腺癌是具有異質(zhì)性的腫瘤，其中三陰性乳腺癌(TNBC)是其一種特殊亞型，其特點(diǎn)是雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)和人類表皮生長因子受體2(Her-2)三者均為陰性。TNBC患者的臨床治療方案與非三陰性乳腺癌(NTNBC)患者相比較為單一，針對ER、PR的內(nèi)分泌治療及Herceptin靶向治療效果均不佳。因此，尋找能夠篩選高危人群、評估患者預(yù)后及指導(dǎo)治療的標(biāo)志物對TNBC的防治具有十分重要的意義。P53是目前已知的腫瘤抑制基因之一，與人類腫瘤發(fā)病相關(guān)性較高。Ki67是細(xì)胞增殖活性標(biāo)志物，可反映細(xì)胞的增殖及分裂能力。CK5/6特異表達(dá)于導(dǎo)管上皮的基底層細(xì)胞，是基底樣型乳腺癌的免疫組化標(biāo)志物之一[2]。本研究觀察了TNBC組織中P53、Ki67、CK5/6的表達(dá)變化，分析三者與TNBC臨床病理參數(shù)的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2015年1月～2018年10月在德州市第二人民醫(yī)院就診的乳腺癌患者469例，選擇TNBC患者納入TNBC組。TNBC組病例納入標(biāo)準(zhǔn)：①有完整的臨床病理資料；②手術(shù)前均未接受新輔助化療、內(nèi)分泌治療和放療等治療；③病例均為沒有家族史的女性患者，未合并有其他部位惡性腫瘤；④患者采用術(shù)式為乳腺癌改良根治術(shù)或乳腺癌根治術(shù)或保乳手術(shù)+腋下淋巴結(jié)清掃術(shù)，術(shù)后病理腋下淋巴結(jié)的檢出數(shù)目不少于15個。共有52例患者納入TNBC組，年齡28～78歲、中位年齡42歲；未絕經(jīng)35例、絕經(jīng)17例；腫瘤直徑≤2 cm 20例、2～5 cm 22例、≥5 cm 10例；組織學(xué)分級Ⅰ級4例、Ⅱ級34例、Ⅲ級14例；臨床分期0～Ⅰ期7例、Ⅱ期32例、Ⅲ～Ⅳ期13例；病理類型為浸潤性癌非特殊型33例、浸潤性小葉癌12例、乳腺導(dǎo)管內(nèi)癌3例、伴有髓樣癌特征的浸潤性癌4例；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移34例、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移18例。選擇100例NTNBC患者納入NTNBC組，年齡32～72歲、中位年齡48歲；未絕經(jīng)65例、絕經(jīng)35例；腫瘤直徑≤2 cm 30例、2～5 cm 64例、≥5 cm 6例；組織學(xué)分級Ⅰ級12例、Ⅱ級80例、Ⅲ級8例；臨床分期0～Ⅰ期12例、Ⅱ期76例、Ⅲ～Ⅳ期12例；病理類型為浸潤性癌非特殊型63例、浸潤性小葉癌22例、乳腺導(dǎo)管內(nèi)癌8例、伴有髓樣癌特征的浸潤性癌7例；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移62例、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移38例。兩組一般資料具有可比性?；颊呒捌浼覍倬鶎Ρ狙芯恐橥狻１狙芯揩@德州市第二人民醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 P53、Ki67、CK5/6檢測 將兩組患者手術(shù)標(biāo)本經(jīng)4%中性甲醛固定，石蠟包埋，常規(guī)切片。采用免疫組織化學(xué)SP法檢測乳腺癌組織中的P53、Ki67、CK5/6。陰性對照用蒸餾水代替一抗，實(shí)驗(yàn)時用已知明確的陽性切片作為陽性對照，具體操作步驟按照試劑說明書進(jìn)行。P53陽性細(xì)胞為細(xì)胞核著色，呈棕黃色顆粒。陽性細(xì)胞百分比<10%為P53陰性，陽性細(xì)胞百分比>10%為P53陽性。Ki67定位于細(xì)胞核，陽性細(xì)胞為細(xì)胞核著色呈棕黃色顆粒者。低倍顯微鏡(100×)下選取5～10個熱點(diǎn)區(qū)域，轉(zhuǎn)入高倍鏡(400×)，取10個高倍鏡視野，計算高倍視野中陽性細(xì)胞百分比。陽性細(xì)胞百分比<20%為Ki67低表達(dá)、判定為陰性，≥20%為Ki67高表達(dá)、判定為陽性。CK5/6定位于細(xì)胞質(zhì)，陽性細(xì)胞為細(xì)胞質(zhì)有棕黃色顆粒者。陽性細(xì)胞百分比<10%為CK5/6陰性，>10%為CK5/6陽性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。相關(guān)性分析采用Spearman等級相關(guān)分析法。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組P53、Ki67、CK5/6表達(dá)比較 TNBC組P53、Ki67、CK5/6陽性表達(dá)率分別為67.3%(35/52)、76.9%(40/52)、71.2%(37/52)，NTNBC組P53、Ki67、CK5/6陽性表達(dá)率分別為45.0%(45/100)、58.0%(58/100)、8.0%(8/100)。TNBC組織中P53、Ki67、CK5/6陽性表達(dá)率高于NTNBC組(P均<0.05)。

2.2 P53、Ki67、CK5/6的表達(dá)與TNBC臨床病理參數(shù)的關(guān)系 P53在TNBC中的表達(dá)與患者年齡、月經(jīng)狀態(tài)、組織學(xué)分級和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有關(guān)(P<0.05)。Ki67在TNBC中的表達(dá)與組織學(xué)分級和臨床分期有關(guān)(P均<0.05)。CK5/6在TNBC中的表達(dá)與腫瘤直徑、患者年齡、月經(jīng)狀態(tài)、組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和臨床分期均無相關(guān)性(P均>0.05)。見表1。

表1 P53、Ki67、CK5/6表達(dá)與TNBC臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.3 P53、Ki67 和CK5/6在TNBC組織中表達(dá)的相關(guān)性 TNBC組織中，P53表達(dá)與Ki67、CK5/6表達(dá)均呈正相關(guān)(r分別為0.299、0.280，P分別為0.031、0.043)；Ki67表達(dá)與CK5/6表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.356，P=0.01)。

3 討論

TNBC占乳腺癌的15%～25%[3]，是一種特殊的乳腺癌亞型。相對于NTNBC，TNBC病理形態(tài)上細(xì)胞異型性較大，分化程度較低，生物學(xué)行為上細(xì)胞增殖更快，常伴有腫瘤壞死，并早期可出現(xiàn)轉(zhuǎn)移，傳統(tǒng)內(nèi)分泌治療效果不佳，且缺乏針對Her-2的特異性靶向治療，患者臨床預(yù)后差[4]。

TNBC的發(fā)生發(fā)展是一個受到多種因素調(diào)節(jié)的復(fù)雜過程，與原癌基因激活及抑癌基因失活密切相關(guān)[5]。P53基因位于人染色體17P13.1，是目前研究最多的抑癌基因之一，其重要作用主要表現(xiàn)在維持細(xì)胞基因組完整性、修復(fù)損傷DNA片段和調(diào)節(jié)細(xì)胞周期方面[6]。正常的P53表達(dá)產(chǎn)物半衰期較短，不易被檢測到，其作用是抑制腫瘤細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；當(dāng)P53發(fā)生突變后，表達(dá)產(chǎn)物的半衰期延長，可以被檢測到。突變后的P53不僅失去了抑癌功能，還可誘導(dǎo)正常細(xì)胞向腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)化，同時阻礙未發(fā)生突變的野生型P53的抑癌作用，最終促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展[7]。突變型P53基因在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后評估中起重要作用，是乳腺癌重要的預(yù)后標(biāo)志物和預(yù)測因子[8,9]。本研究中P53蛋白在TNBC組陽性表達(dá)率高于NTNBC組，與國內(nèi)相關(guān)研究[5]結(jié)果一致。P53在TNBC中的表達(dá)與患者年齡、月經(jīng)狀態(tài)、組織學(xué)分級和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有關(guān)，說明P53表達(dá)陽性的TNBC腫瘤細(xì)胞分化程度較差，侵襲能力較強(qiáng)，容易復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。

Ki67在具有增殖活性的細(xì)胞核中表達(dá)，其功能與有絲分裂密切相關(guān)，能夠比較準(zhǔn)確地反映細(xì)胞增殖狀態(tài)，是一種最理想的也是應(yīng)用最廣泛的增殖細(xì)胞標(biāo)志物之一。Ki67可以識別除G0期以外的G1期、S期、G2期和M期的細(xì)胞，其在低轉(zhuǎn)化性的或非增生性的組織細(xì)胞中幾乎無表達(dá)，在良性腫瘤病變中低表達(dá)，在惡性腫瘤中高表達(dá)。研究表明，Ki67與多種惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸有關(guān)[10～12]。本研究結(jié)果顯示，TNBC組Ki67陽性表達(dá)率76.9%，低于國內(nèi)雷珍等[13]的報道，可能是Ki67的分組標(biāo)準(zhǔn)不同所致。Ki67表達(dá)隨組織學(xué)分級和臨床分期增高而增高，Ki67高表達(dá)提示TNBC預(yù)后不良。

CK5/6屬于細(xì)胞角蛋白家族中的一員，主要表達(dá)于上皮組織的基底細(xì)胞層。乳腺導(dǎo)管由腺上皮細(xì)胞、基底細(xì)胞和肌上皮細(xì)胞組成。CK5/6被證實(shí)是乳腺基底細(xì)胞特異表達(dá)的CK，也是識別基底細(xì)胞樣乳腺癌的重要分子標(biāo)志物，并且可能是TNBC預(yù)后的獨(dú)立影響因素[14]。研究發(fā)現(xiàn)，導(dǎo)管原位癌細(xì)胞中可表達(dá)CK5/6，表現(xiàn)出與基底細(xì)胞樣乳腺癌相關(guān)的特性，提示CK5/6表達(dá)變化是乳腺癌發(fā)展的早期事件，從疾病一開始就確定了基底樣乳腺癌的臨床病理特征[15]。本研究中，CK5/6在TNBC組陽性表達(dá)率為71.2%，高于江科等[16]研究得出的63.8%，可能與本研究樣本量較少有關(guān)。TNBC組CK5/6陽性表達(dá)率高于NTNBC組，且CK5/6在TNBC中的表達(dá)與腫瘤直徑、患者年齡、月經(jīng)狀態(tài)、組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和臨床分期均無相關(guān)性，與國內(nèi)畢曉峰等[17]研究結(jié)果一致。上述結(jié)果提示,CK5/6的表達(dá)反映了腫瘤細(xì)胞的起源，CK5/6陽性的腫瘤細(xì)胞來源于乳腺導(dǎo)管的基底細(xì)胞，而非腺上皮細(xì)胞，其起源是不隨腫瘤自身進(jìn)展而改變的。本研究通過Spearman相關(guān)分析，發(fā)現(xiàn)P53的表達(dá)與Ki67、CK5/6呈正相關(guān)，Ki67的表達(dá)與CK5/6呈正相關(guān)，提示乳腺導(dǎo)管的基底細(xì)胞在向成熟細(xì)胞轉(zhuǎn)化過程中可能受到突變P53的誘導(dǎo)，未能轉(zhuǎn)化成正常細(xì)胞而轉(zhuǎn)化成為腫瘤細(xì)胞，并使得腫瘤細(xì)胞的增殖活性明顯增強(qiáng)。

綜上所述，P53、Ki67、CK5/6在TNBC組織中的表達(dá)均高于NTNBC組織，三者在TNBC發(fā)生發(fā)展過程中可能存在一定相互作用。P53、Ki67高表達(dá)與TNBC的進(jìn)展有關(guān)。