肖植國 許慶

【摘要】目的：對比紫外分光光度法改進(jìn)為高效液相色譜法測定的效率，對比兩種檢測方法價(jià)值。方法：采購5個(gè)廠家50個(gè)批次的青霉素V鉀片，每個(gè)廠家10個(gè)批次，配置供試品溶液、標(biāo)準(zhǔn)品溶液。分別進(jìn)行紫外分光光度法改進(jìn)為高效液相色譜法檢測，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)而計(jì)算不同廠商與批次青霉素V鉀分散片含量，進(jìn)行可靠性、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、回收率試驗(yàn)，計(jì)算相對保留時(shí)間等指標(biāo)。結(jié)果：相較于由紫外分光光度，高效液相色譜法標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)r明顯上升，同時(shí)最低檢出限也顯著下降，精密度試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)、重現(xiàn)性試驗(yàn)的相對保留時(shí)間與峰面積低于紅外光譜。結(jié)論：高效液相色譜法對青霉素V鉀分散片含量測定性能有一定程度的提高。

【關(guān)鍵詞】紫外分光光度法;高效液相色譜法; 青霉素V鉀分散片;含量分析

我國開始生產(chǎn)青霉素V鉀片時(shí)間較晚，生產(chǎn)工藝并不成熟，藥品質(zhì)量問題發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)高，加強(qiáng)青霉素V鉀片質(zhì)控非常必要[1]。青霉素V鉀分散片含量測定方法較多，本次研究嘗試對比紫外分光光度法改進(jìn)為高效液相色譜法測定的效率，對比兩種檢測方法價(jià)值。

1材料與方法

1.1? 實(shí)驗(yàn)材料

采購5個(gè)廠家50個(gè)批次的青霉素V鉀片，每個(gè)廠家10個(gè)批次。

1.2 儀器與試劑實(shí)驗(yàn)

儀器：Agilent1260型高效液相色譜儀，UV2401PC型紫外分光光度計(jì)，MettleToledoMS205DU電子天平，立式透明冷藏箱、通風(fēng)柜、各類型號點(diǎn)樣管等。甲醇、三氯甲烷、環(huán)己烷、乙酸乙酯、純水等標(biāo)準(zhǔn)品，由中國國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心提供。對照品：中國藥品生物制品檢定院，苯氧乙酸對照片、苯氧甲基青霉噻唑酸A型與B型對照品、苯氧基氨酸脫羧青霉噻唑酸A型與B型對照品。

1.3? 方法

1.3.1高效液相色譜法

（1）對照品溶液：精密稱量青霉素V對品適量，置于10ml容量瓶中，加入水溶解，定量稀釋制成0.2mg/ml溶液，4℃冰箱保存。避光保存。稱取一定量標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)儲(chǔ)備液，用水0.1mg/ml、1μg/ml、10μg/ml工作液溶液，避光4℃保存。

（2）供試品溶液：取目標(biāo)對照品，精密稱定，置入錐形瓶，加入pH 6.5磷酸鹽緩沖液（0.2mmol/L磷酸二氫鉀溶液125ml加水250ml混勻，氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至6.5，加水稀釋到500ml），溶解制成3.6mg/ml供試品溶液。精密量取1ml，置入100ml量瓶中，采用pH6.5磷酸鹽緩沖液稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

（3）檢測：①葡聚糖凝膠G-10為填充劑，玻璃柱內(nèi)徑1.0～1.4cm，柱長30～40cm。，量取0.1mg/ml藍(lán)色葡萄胎2000溶液100～200μl，10μl，流速1.5mL·min-1，檢測波長0～20 min為254nm。流動(dòng)相A為pH7.0的0.1mol/L磷酸鹽緩沖液[（0.1mol/L磷酸氫二鈉溶液-0.1mmol/L磷酸二氫鈉溶液（61：39）]，流動(dòng)相B為水。分別以流動(dòng)相A、B測定，記錄色譜圖。②線性關(guān)系考察，將對照品稀釋至刻度，進(jìn)樣后，繪制色譜圖以及峰面積，以溶液濃度為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制不同對照品的回歸方程。③進(jìn)行可靠性、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、回收率試驗(yàn)，計(jì)算相對保留時(shí)間等指標(biāo)。

1.3.2 紫外分光光度法

取樣品10品，研細(xì)，精密測量，置入100ml量瓶，加水搖勻溶解稀釋至刻度，精密稱量取連續(xù)濾液5ml，置入100ml量瓶，加水稀釋到刻度，搖勻，取2ml每份。置入兩只試管，一支加入甲咪唑-汞溶液10ml，混勻，密塞，60℃水浴加熱25min，不斷振量，冷卻制得甲液。另一支加入水10ml，搖勻，制得乙液。取對照品125mg，精密稱量，置入100ml量瓶，分別制得甲液、乙液。在325nm波長出測定吸光度，測甲液2ml水與10ml咪唑-汞混合液為空白，測乙液以水為空白，采用差值計(jì)算，即得到含量。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算青霉素的含量。進(jìn)行可靠性、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、回收率試驗(yàn)，計(jì)算相對保留時(shí)間等指標(biāo)。

2? 結(jié)果

相較于由紫外分光光度，高效液相色譜法標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)r明顯上升，同時(shí)最低檢出限也顯著下降，精密度試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)、重現(xiàn)性試驗(yàn)的相對保留時(shí)間與峰面積低于紅外光譜。

3? 討論

從本次研究來看，相較于紫外分光光度計(jì)測量，高效液相色譜法的測定性能明顯增強(qiáng)，主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：①標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)r明顯上升，提示檢出的誤差得到有效的控制，線性關(guān)系更理想，測定供試品的藥品含量更符合真實(shí)情況;②最低檢出限也顯著下降，靈敏度上升，有助于檢出血液中微小的含量留存;③檢出的可靠性增強(qiáng)，研究中高效液相色譜法精密度試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)、重現(xiàn)性試驗(yàn)的相對保留時(shí)間與峰面積低于紅外光譜，提示結(jié)果的穩(wěn)定性更高，不容易受到干擾[2]。目前，對于藥物的含量分析，普遍以高效液相色譜法作為最終的鑒定結(jié)果。高效液相色譜技術(shù)，可一次進(jìn)行多種物質(zhì)成分含量的檢測，用于青霉素V鉀分散片含量，能夠分析不同物質(zhì)的含量，并通過分析是否存在新的“峰”來看到是否存在雜質(zhì)、雜質(zhì)的含量，從而評價(jià)藥品的質(zhì)量。高效液相色譜法最低檢出限度的下降，使其可用于血液等樣本中的藥物含量分析，用于藥代動(dòng)力學(xué)等藥理學(xué)研究。

小結(jié)：高效液相色譜法對青霉素V鉀分散片含量測定性能有一定程度的提高。

參考文獻(xiàn)：

[1]國家藥典委員會(huì)，中華人民共和國藥典（二部），中國醫(yī)藥科技出版社，2015，1287-1288

[2]陳希，吳鑫，鄢雷娜，等.國產(chǎn)青霉素 V鉀片質(zhì)量評價(jià)[J].今日藥學(xué)，2016，26（10）：707-709.