駱帝 梁學(xué)振 劉金豹 許波 李剛

摘 要 目的：研究烏頭湯治療骨關(guān)節(jié)炎的作用機(jī)制，為骨關(guān)節(jié)炎的治療提供新的方向與靶點(diǎn)。方法：以口服生物利用度（OB）≥30%、類藥性（DL）≥0.18為指標(biāo)，借助中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)及分析平臺(tái)（TCMSP）篩選烏頭湯中川烏、麻黃、黃芪、白芍與甘草的活性成分;通過檢索治療靶點(diǎn)數(shù)據(jù)庫(kù)（TTD）等數(shù)據(jù)庫(kù)和挖掘基因表達(dá)數(shù)據(jù)庫(kù)（GEO）中的芯片數(shù)據(jù)獲取骨關(guān)節(jié)炎的作用靶點(diǎn);利用生物學(xué)信息注釋數(shù)據(jù)庫(kù)（DAVID）對(duì)靶點(diǎn)基因進(jìn)行基因本體（GO）和京都基因與基因組百科全書（KEGG）通路富集分析。結(jié)果：從烏頭湯中共篩選出活性成分30個(gè)，包括槲皮素、丁子香萜、梔子醇等，與骨關(guān)節(jié)炎相關(guān)的作用靶點(diǎn)31個(gè)，包括β2腎上腺素能受體、花生四烯酸5-脂氧合酶、雄激素受體等。烏頭湯治療骨關(guān)節(jié)炎的生物過程與白細(xì)胞介素1受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、過氧化物酶增殖激活受體的協(xié)同激活作用、酪氨酸激酶受體2的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)作用等有關(guān)。烏頭湯主要通過調(diào)節(jié)腫瘤壞死因子信號(hào)通路、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子信號(hào)通路、破骨細(xì)胞分化信號(hào)通路、核轉(zhuǎn)錄因子κB信號(hào)通路、Toll樣受體信號(hào)通路等發(fā)揮治療骨關(guān)節(jié)炎的作用。結(jié)論：本研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析了烏頭湯治療骨關(guān)節(jié)炎的潛在作用機(jī)制，可為進(jìn)一步研究烏頭湯治療骨關(guān)節(jié)炎的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用靶點(diǎn)提供參考。

關(guān)鍵詞 骨關(guān)節(jié)炎;烏頭湯;網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué);作用機(jī)制;中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)及分析平臺(tái)

ABSTRACT? ?OBECTIVE： To study the mechanism of Wutou decoction in the treatment of osteoarthritis， and to provide a new direction and target for the treatment of osteoarthritis. METHODS： Using oral bioavailability （OB）≥30%， drug like （DL）≥0.18% as index， active components were screened from Wutou decoction by using TCM systematic pharmacological analysis platform （TCMSP）， such as Aconitum carmichaelii， Ephedra sinica， Astragalus propinquus， Paeonia tactilora， Glycyrrhiza uralensis. Targets of osteoarthritis were obtained by retrieving therapeutic targets database （TTD） and mining thip data from gene expression database （GEO）. Target genes were analyzed by GO and KEGG pathway enrichment analysis were performed by using DAVID database. RESULTS： A total of 30 active components were screened， including quercetin， terpenoids and gardenol; 31 targets related to osteoarthritis were obtained， including β2 adrenergic receptor， arachidonate 5-lipoxygenase and androgen receptor. The biological process of Wutou decoction in treatment of osteoarthritis was mainly related to the IL-1 receptor signal transduction， synergistic activation of peroxidase proliferation activated receptor， signal transduction of tyrosine kinase receptor 2. It mainly regulated tumor necrosis factor signaling pathway， vascular endothelial growth factor signaling pathway， osteoclasts differentiation signaling pathway， nuclear factor κB signaling pathway， Toll-like receptor signaling pathway so as to play a role in the treatment of osteoarthritis. CONCLUSIONS： The study analysis the potential mechanism of Wutou decoction in the treatment of osteoarthritis based on network pharmacology， which can provide reference for further study on the material basis and target of Wutou decoction in the treatment of osteoarthritis.

KEYWORDS? ?Osteoarthritis; Wutou decoction; Network pharmacology; Mechanism; TCMSP

骨關(guān)節(jié)炎是臨床常見難治疾病，屬于祖國(guó)醫(yī)學(xué)“骨痹”范疇，其發(fā)病以在全身與局部綜合因素下導(dǎo)致的軟骨基質(zhì)崩解，軟骨細(xì)胞數(shù)量降低，伴有關(guān)節(jié)周圍骨質(zhì)增生為特點(diǎn)[1]，確切病因與發(fā)病機(jī)制尚未明確。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)臨床主要治療手段為非藥物治療、藥物治療與外科治療，但是非藥物治療效果并不確切;鎮(zhèn)痛藥、非甾體抗炎藥、糖皮質(zhì)激素等長(zhǎng)期服用存在如消化道出血、心血管風(fēng)險(xiǎn)等副作用;而外科手術(shù)治療又存在費(fèi)用高等問題[2]。因此，亟待探索新的安全替代治療方案。

傳統(tǒng)中醫(yī)藥歷史悠久，經(jīng)過長(zhǎng)期的經(jīng)驗(yàn)積累與臨床實(shí)踐檢驗(yàn)，具有療效確切、安全穩(wěn)定與接受度高等諸多優(yōu)勢(shì)，逐漸成為許多疑難疾病臨床治療與新藥開發(fā)的研究熱點(diǎn)[3-4]。烏頭湯出自醫(yī)圣張仲景所著《金匱要略》，原文載述“病歷節(jié)不可屈伸疼痛，烏頭湯主之”。全方由麻黃、白芍、黃芪、甘草、制川烏5味中藥組成，具有溫經(jīng)通絡(luò)、除濕止痛的功效，被歷代醫(yī)家廣泛用于骨關(guān)節(jié)炎的治療[5]，筆者將其應(yīng)用于臨床也取得了令人滿意的療效。但因中藥復(fù)方成分眾多，作用多通路與多靶點(diǎn)關(guān)系網(wǎng)復(fù)雜，現(xiàn)有檢測(cè)技術(shù)手段普遍存在花費(fèi)高昂、靈敏度低、尚無行業(yè)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范等問題，故無法精準(zhǔn)、可靠地揭示中藥復(fù)方作用機(jī)制[6-7]。

得益于生物信息學(xué)、計(jì)算機(jī)、網(wǎng)絡(luò)與大數(shù)據(jù)技術(shù)的發(fā)展，網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)作為一門研究藥物的新學(xué)科得以創(chuàng)立，尤其是在整體性與系統(tǒng)性的特點(diǎn)與中醫(yī)藥不謀而合[8]，為中藥方劑潛在活性成分與作用靶點(diǎn)的進(jìn)一步研究開辟了新道路。基于此，本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)，通過數(shù)據(jù)挖掘與分析，篩選和系統(tǒng)預(yù)測(cè)烏頭湯活性成分治療骨關(guān)節(jié)炎的潛在作用靶點(diǎn)和信號(hào)通路，以期為骨關(guān)節(jié)炎的治療提供新的方向與靶點(diǎn)。

1 材料與方法

1.1 數(shù)據(jù)庫(kù)、軟件及分析平臺(tái)

本研究使用的數(shù)據(jù)庫(kù)、軟件及相關(guān)分析平臺(tái)見表1。

9 疾病基因數(shù)據(jù)庫(kù)（DisGeNET） http：//www.disgenet.org/web/DisGeNET/ 更新于2019.05 10 人類表型本體論（HPO） https：//hpo.jax.org/app/ 1.5.0 11 Cytoscape https：//cytoscape.org/ 3.2.1 12 R語言 https：//www.r-project.org/ 3.6.0 13 生物學(xué)信息注釋數(shù)據(jù)庫(kù)（DAVID） https：//david.ncifcrf.gov/ 6.8 14 蛋白質(zhì)相互作用數(shù)據(jù)庫(kù)（STRING） https：//string-db.org/ 11.0 ]

1.2 烏頭湯中5味中藥的活性成分收集與篩選

中藥在口服后進(jìn)入人體消化道后，要經(jīng)過吸收、分布、代謝與排泄生理過程，即藥動(dòng)學(xué)特性（ADME）[9-10]。在TCMSP中檢索烏頭湯中5味中藥的相關(guān)化學(xué)成分的ADME參數(shù)，利用藥物重要的定性指標(biāo)口服生物利用度（Oral bioavailability，OB）與類藥性（Drug like，DL）進(jìn)行初步篩選，以獲得5味中藥的活性成分，篩選標(biāo)準(zhǔn)為OB≥30%，DL≥0.18[11-12]。

1.3 烏頭湯作用靶點(diǎn)的預(yù)測(cè)與活性成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建

通過TCMSP靶點(diǎn)預(yù)測(cè)模型預(yù)測(cè)烏頭湯中5味中藥活性成分的作用靶點(diǎn)，采用生物網(wǎng)絡(luò)可視化和分析軟件Cytoscape 3.2.1分別繪制5味中藥的活性成分與作用靶點(diǎn)的網(wǎng)絡(luò)圖和烏頭湯活性成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖，其中用“節(jié)點(diǎn)（Node）”分別表示中藥、活性成分與靶點(diǎn)，用“邊（Edge）”表示中藥、活性成分與靶點(diǎn)的相互作用關(guān)系[13]，靶點(diǎn)對(duì)應(yīng)的成分越多，其度值也就越大，提示該靶點(diǎn)的重要性可能相對(duì)越高。

1.4 篩選骨關(guān)節(jié)炎的作用靶點(diǎn)

以“Osteoarthritis”為關(guān)鍵詞，通過篩選TTD、DrugBank、OMIM、GAD、PharmGKB、DisGeNET與HPO 7個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)獲得骨關(guān)節(jié)炎的相關(guān)靶點(diǎn)。

在GEO數(shù)據(jù)庫(kù)樣本中以“Osteoarthritis”為關(guān)鍵詞檢索相關(guān)芯片，獲取編號(hào)為GSE43923的芯片數(shù)據(jù)原始文件和GPL570的芯片基因注釋文件，該芯片數(shù)據(jù)中包含了6個(gè)關(guān)節(jié)軟骨樣本，其中3名來自骨關(guān)節(jié)炎患者，健康對(duì)照3名。使用R語言對(duì)芯片的原始數(shù)據(jù)加以分析，采用多陣列平均分析（Robust multiarray average，RMA）算法進(jìn)行背景校正和矩陣數(shù)據(jù)歸一化處理，利用Limma程序包分析芯片數(shù)據(jù)的差異基因，將顯著差異基因的篩選條件設(shè)定為P<0.05，差異倍數(shù)（Fold change，F(xiàn)C）>2;運(yùn)用Plot程序包繪制芯片原始的火山圖。最終獲得骨關(guān)節(jié)炎的差異表達(dá)基因。

最后，將7個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)獲得的骨關(guān)節(jié)炎靶點(diǎn)與R語言分析芯片獲得的差異表達(dá)基因取并集，即獲得已明確的骨關(guān)節(jié)炎的相關(guān)靶點(diǎn)。

1.5 DAVID富集分析

將“1.3”項(xiàng)下獲得的烏頭湯治療骨關(guān)節(jié)炎的相關(guān)靶點(diǎn)與“1.4”項(xiàng)下獲得的骨關(guān)節(jié)炎疾病的相關(guān)靶點(diǎn)取交集，即可得到烏頭湯治療骨關(guān)節(jié)炎的關(guān)鍵靶點(diǎn)。

DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)是一個(gè)具有全面功能注釋、可視化和集成發(fā)現(xiàn)的數(shù)據(jù)庫(kù)工具，可完成基因表達(dá)數(shù)據(jù)的批量處理與注釋、基因本體論（Gene ontology，GO）及京都基因與基因組百科全書（Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG）通路富集分析。利用DAVID在線分析工具對(duì)上述關(guān)鍵靶點(diǎn)進(jìn)行功能富集分析，運(yùn)用R語言ggPlot 2程序包繪制氣泡圖，圖中氣泡越大則代表信號(hào)通路的基因數(shù)目越多，與該通路的重要性成正比。

1.6 構(gòu)建關(guān)鍵靶點(diǎn)的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互關(guān)系

STRING數(shù)據(jù)庫(kù)是一款在線檢索相互作用基因與蛋白的網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫(kù)。將“1.5”項(xiàng)下獲取的關(guān)鍵靶點(diǎn)輸入搜索欄，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行整合，借助軟件Cytoscape 3.2.1構(gòu)建烏頭湯治療骨關(guān)節(jié)炎關(guān)鍵靶點(diǎn)蛋白互作（Protein-protein interaction，PPI）網(wǎng)絡(luò)圖。

2 結(jié)果

2.1 烏頭湯中5味中藥的活性成分收集

通過TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)共獲得烏頭湯中川烏、麻黃、黃芪、白芍、甘草5味中藥的相關(guān)成分642個(gè)，其中滿足OB≥30%的成分共有224個(gè)，滿足DL≥0.18的成分共有169個(gè)。根據(jù)ADME參數(shù)篩選標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)滿足OB≥30%與DL≥0.18的成分共有122個(gè)。

2.2 烏頭湯作用靶點(diǎn)的預(yù)測(cè)與活性成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建

利用Cytoscape 3.2.1軟件分別構(gòu)建了5味中藥的活性成分與作用靶點(diǎn)的網(wǎng)絡(luò)圖，見圖1。經(jīng)TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)靶點(diǎn)預(yù)測(cè)模型配對(duì)分析后得到有對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)的活性成分共30個(gè)，詳見表2;再利用Cytoscape 3.2.1軟件構(gòu)建烏頭湯活性成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖，其中烏頭湯活性成分與作用靶點(diǎn)存在708個(gè)相互關(guān)系，烏頭湯治療骨關(guān)節(jié)炎相關(guān)作用靶點(diǎn)138個(gè)，烏頭湯活性成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖見圖2。

2.3 骨關(guān)節(jié)炎的作用靶點(diǎn)

通過TTD等7個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)分別獲得骨關(guān)節(jié)炎疾病相關(guān)靶點(diǎn)35、1、61、97、2、80、33個(gè)，取并集并刪除重復(fù)項(xiàng)后獲得骨關(guān)節(jié)炎疾病靶點(diǎn)227個(gè)。

芯片GSE43923的原始數(shù)據(jù)文件中包含了6個(gè)關(guān)節(jié)軟骨樣本，將3名骨關(guān)節(jié)炎患者的骨贅軟骨組織與3名健康人的軟骨組織進(jìn)行對(duì)比。借助R語言分析共獲得331個(gè)顯著改變與影響的基因（刪除重復(fù)項(xiàng)后為307個(gè)），其中上調(diào)基因數(shù)為256個(gè)，下調(diào)基因數(shù)為75個(gè)，繪制骨關(guān)節(jié)炎差異基因的火山圖，詳見圖3。

將7個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)獲得的骨關(guān)節(jié)炎靶點(diǎn)與R語言分析芯片獲得的差異表達(dá)基因取并集，再與烏頭湯中5味中藥活性成分的作用靶點(diǎn)取交集，即獲得已明確的烏頭湯治療骨關(guān)節(jié)炎的關(guān)鍵靶點(diǎn)31個(gè)，詳見表3。

2.4 DAVID富集分析

采用DAVID在線數(shù)據(jù)進(jìn)行GO和KEGG通路分析，將獲得的前10位GO生物過程與KEGG通路按P值升序排列，并以氣泡圖的形式展現(xiàn)出來。結(jié)果，烏頭湯治療骨關(guān)節(jié)炎的GO生物過程見圖4，烏頭湯治療骨關(guān)節(jié)炎的KEGG通路見圖5。

由圖4可知，烏頭湯治療骨關(guān)節(jié)炎的GO進(jìn)程主要有白細(xì)胞介素1受體的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、過氧化物酶增殖激活受體的協(xié)同激活作用、ERBB2在腫瘤細(xì)胞中的轉(zhuǎn)導(dǎo)作用、核轉(zhuǎn)錄因子κB（NF-κB）的激活作用、巨噬細(xì)胞刺激蛋白受體的信號(hào)通路等。

由圖5可知，烏頭湯治療骨關(guān)節(jié)炎的KEGG通路主要有腫瘤壞死因子（TNF）信號(hào)通路、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子信號(hào)通路、破骨細(xì)胞分化信號(hào)通路、NF-κB信號(hào)通路、Toll樣受體信號(hào)通路、甲狀腺激素信號(hào)通路、磷酯酰肌醇3激酶-蛋白激酶B（PI3K-Akt）信號(hào)通路、缺氧誘導(dǎo)因子1（HIF-1）信號(hào)通路、促分裂素原活化蛋白激酶（MAPK）信號(hào)通路及雌激素信號(hào)通路。

2.5 構(gòu)建關(guān)鍵靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)圖

烏頭湯治療骨關(guān)節(jié)炎關(guān)鍵靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)圖見圖6。

由圖6可知，31個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)之間相互作用關(guān)系數(shù)為40個(gè);共挖掘出214個(gè)靶點(diǎn)與關(guān)鍵靶點(diǎn)存在直接或者間接關(guān)系。運(yùn)用Cytoscape 3.2.1軟件中Network Analyzer插件工具對(duì)每個(gè)節(jié)點(diǎn)進(jìn)行相關(guān)網(wǎng)絡(luò)參數(shù)分析，其中度值的大小與其重要程度呈正相關(guān)，故圖中節(jié)點(diǎn)顏色越深則代表其重要程度越大。

3 討論

骨關(guān)節(jié)炎是導(dǎo)致中老年人喪失運(yùn)動(dòng)能力的常見疾病，給患者身心與經(jīng)濟(jì)帶來沉重負(fù)擔(dān)，在全球老齡化的大趨勢(shì)下，其發(fā)病率逐年增加[14]。目前，骨關(guān)節(jié)炎尚缺乏有效直接的治愈手段，但可以通過有針對(duì)性的個(gè)性化診療方案以達(dá)到緩解疼痛、改善運(yùn)動(dòng)功能、延緩疾病進(jìn)展、提高生活質(zhì)量的目的。中醫(yī)學(xué)一般將骨關(guān)節(jié)炎歸于“骨痹”范疇，其基本病機(jī)為本虛標(biāo)實(shí)，多因機(jī)體精血不足、陽虛血瘀，風(fēng)寒濕外邪趁虛而入，導(dǎo)致筋脈痹阻、氣血凝澀、骨骼失養(yǎng)、日久成痹[15-16]。烏頭湯由東漢名醫(yī)張仲景創(chuàng)制，為歷代所推崇治療骨關(guān)節(jié)炎的代表方劑。本研究初步篩選出烏頭湯中的槲皮素、谷甾醇、丁子香萜、（+）-兒茶酚、芍藥苷元等30個(gè)活性成分，最終挖掘出烏頭湯治療骨關(guān)節(jié)炎的31個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)并繪制出與之關(guān)聯(lián)的214個(gè)靶點(diǎn)和1 172個(gè)相互關(guān)系的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)圖，證明了中藥方劑中的有效成分與其作用的靶點(diǎn)之間不僅存在密切的協(xié)同關(guān)系，而且從側(cè)面反映出中醫(yī)藥治療疾病具有多成分、多靶點(diǎn)、多路徑的特色，這與中醫(yī)整體觀念與辨證施治思想不謀而合。

從DAVID對(duì)31個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)富集分析結(jié)果可知，烏頭湯主要通過干預(yù)細(xì)胞周期、炎癥與內(nèi)分泌等相關(guān)通路而發(fā)揮治療骨關(guān)節(jié)炎的作用。（1）在細(xì)胞周期相關(guān)通路方面：①研究證實(shí)[17-18]，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子在活動(dòng)性關(guān)節(jié)炎中存在高表達(dá)現(xiàn)象，進(jìn)而促進(jìn)血管內(nèi)皮增生，為炎癥因子的聚攏提供條件，與骨關(guān)節(jié)炎的炎癥密切相關(guān);②破骨細(xì)胞在局部炎性因子與細(xì)胞因子的刺激下，其活性升高，大量增殖、分化與成熟，骨代謝平衡被打破，軟骨下骨重塑增加導(dǎo)致骨關(guān)節(jié)炎進(jìn)展[19-20];③NF-κB信號(hào)通路被激活后，可誘導(dǎo)滑膜細(xì)胞生成大量細(xì)胞因子、趨化因子與基質(zhì)金屬蛋白酶，導(dǎo)致關(guān)節(jié)軟骨分解加劇[21-22]。④PI3K-Akt信號(hào)通路已被證實(shí)是參與抗軟骨凋亡的重要路徑，其中Akt在該通路中承擔(dān)核心作用，而PI3K僅發(fā)揮傳輸信號(hào)的媒介作用[23-24]。⑤HIF-1已被研究證明在細(xì)胞缺氧狀態(tài)下廣泛參與能量代謝、血管生成、pH調(diào)控與細(xì)胞周期等生理進(jìn)程，并且還對(duì)涉及軟骨組織的疾病有重要調(diào)控作用[25-26]。⑥軟骨細(xì)胞作為能合成軟骨基質(zhì)的唯一細(xì)胞，一旦病變釋放出的炎癥因子激活MAPK信號(hào)通路，最終可引發(fā)基質(zhì)金屬蛋白酶升高、軟骨細(xì)胞凋亡與軟骨破壞等病理反應(yīng)[27-28]。（2）在炎癥相關(guān)通路方面：①TNF-α在骨關(guān)節(jié)炎軟骨蛻變中激活多種參與軟骨基質(zhì)降解的酶，此外TNF-α可誘導(dǎo)白細(xì)胞介素的產(chǎn)生，而反之又可促進(jìn)TNF-α的活性，從而加速軟骨破壞[29-30]。②在骨關(guān)節(jié)炎早期Toll樣受體表達(dá)即偏高并伴隨關(guān)節(jié)腫痛與關(guān)節(jié)積液等癥狀，此外還有研究證實(shí)其可在滑膜細(xì)胞與關(guān)節(jié)軟骨中均可被檢測(cè)到[31]。（3）在內(nèi)分泌相關(guān)通路方面：①甲狀腺激素在人體發(fā)育過程中，無論是整個(gè)童年和成人階段，幾乎在所有組織中都發(fā)揮廣泛和復(fù)雜的作用。有研究確認(rèn)了甲狀腺激素代謝在關(guān)節(jié)軟骨維持和骨關(guān)節(jié)炎發(fā)病中的作用[32]。②已有研究證實(shí)雌激素可以直接作用于骨骼、肌肉與滑膜組織的炎癥反應(yīng)上，雌激素受體更是在關(guān)節(jié)軟骨與骨細(xì)胞中廣泛表達(dá)[33]。

綜上所述，本研究通過綜合運(yùn)用生物信息學(xué)與網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的手段，探討烏頭湯治療骨關(guān)節(jié)炎可能的關(guān)鍵基因及分子機(jī)制，可為治療骨關(guān)節(jié)炎提供新的切入點(diǎn)，為深入挖掘其潛在的機(jī)制提供參考。不可否認(rèn)的是本研究尚存在一些局限性，但同時(shí)，其也為今后中藥方劑關(guān)鍵作用機(jī)制的研究和新藥的研發(fā)提供了新方法、新路徑與新方向。

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（收稿日期：2019-03-21 修回日期：2019-05-27）

（編輯：唐曉蓮）