張乃丹，段思雨，喻敬芯，武永康△

1.四川大學(xué)華西醫(yī)院 實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)科(成都 610041)； 2.德陽市人民醫(yī)院 檢驗(yàn)科(德陽 618000)

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)發(fā)病過程是由多因素調(diào)控的漸進(jìn)過程，分為亞臨床期、急性炎癥期、慢性自身免疫病期和轉(zhuǎn)歸期4個(gè)階段[1](圖1)。B細(xì)胞作為SLE發(fā)病機(jī)制中的重要環(huán)節(jié)，其表面表達(dá)很多免疫激活和免疫抑制作用的分子。激活分子包括B細(xì)胞受體(B cell receptor, BCR)[2]、Toll樣受體(Toll-like receptor,TLRs)[3]和B細(xì)胞表面抗原CD40[4]等。抑制分子包括Fc受體FcγRIIB (Fcγ receptor IIB, FcγRIIB)[5]和CD72[6]、程序性死亡蛋白1(programmed death 1 protein，PD-1)[7]等，這些分子所提供的信號(hào)作用于B細(xì)胞， 影響B(tài)細(xì)胞活化的性質(zhì)和程度，控制由此產(chǎn)生的B細(xì)胞亞群分化及抗體產(chǎn)生[8](圖2)。B細(xì)胞表面分子雙向調(diào)控失衡可導(dǎo)致B細(xì)胞免疫功能出現(xiàn)異常，進(jìn)而導(dǎo)致SLE發(fā)生。鑒于B細(xì)胞靶向治療越來越多地應(yīng)用于臨床，充分理解B細(xì)胞表面分子在SLE炎癥調(diào)節(jié)的不同作用，并設(shè)計(jì)出安全有效的免疫治療方案可能是今后研究的重點(diǎn)。本研究綜述了B細(xì)胞正向負(fù)向兩類調(diào)控分子及相關(guān)靶向治療在SLE中的研究進(jìn)展，充分認(rèn)識(shí)不同分子對(duì)B細(xì)胞功能的調(diào)控在SLE發(fā)病機(jī)制中的作用及靶向治療中的應(yīng)用，為SLE治療藥物設(shè)計(jì)提供新的策略。

圖1 SLE疾病分期及正向負(fù)向B細(xì)胞調(diào)節(jié)分子

圖2 B細(xì)胞雙向調(diào)節(jié)及B-T細(xì)胞相互作用與SLE免疫平衡的關(guān)系

1 B細(xì)胞激活因素

1.1 BCR

SLE與BCR信號(hào)傳導(dǎo)的異?；罨芮邢嚓P(guān)，激活BCR信號(hào)通路與Ca2+信號(hào)及其調(diào)節(jié)受體和適配器密切相關(guān)[2]。酪氨酸激酶介導(dǎo)酪氨酸免疫受體激活基序(immunoreceptor tyrosine based activation motif, ITAM)磷酸化,激活促進(jìn)BCR通過連接B細(xì)胞鏈接蛋白(B-cell linker protein, BLNK)進(jìn)行信號(hào)傳遞。BCR介導(dǎo)磷酸化磷脂酶C-γ2(phospholipase Cγ2, PLCγ2)切割膜相關(guān)磷酰氨基肽(phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate,PIP2)為1,4,5三磷酸肌醇(Inositol 1,4,5-trisphosphate, InsP3)和二?；视?diacylglycerin，DAG)。InsP3引起細(xì)胞內(nèi)外Ca2+信號(hào)活化進(jìn)而激活核因子(nuclear factor-κB,NF-κB)。DAG調(diào)節(jié)激活有絲分裂激活蛋白激酶(phosphorylated mitogen-activated protein kinase, MAPK)、c-Jun NH2末端激酶(c-jun-N-terminal kinase, JNK/SAPK)和p38 MAPK。在BCR調(diào)控的Ca2+信號(hào)失衡在SLE發(fā)病機(jī)制中的研究中發(fā)現(xiàn)[9]，對(duì)于敲除特異性B細(xì)胞中SH2酪氨酸磷酸酶1[Src homology 2 (SH2) domain containing protein tyrosine phosphatase-1, SHP-1]的CD19-Cre 小鼠，SHP-1缺失增強(qiáng)了BCR激活Ca2+信號(hào)，加速了SLE的活動(dòng)，其特征為產(chǎn)生抗dsDNA抗體和導(dǎo)致腎小球腎炎的發(fā)生。關(guān)于SLE患者B細(xì)胞直接磷酸化研究[10]發(fā)現(xiàn)，BCR激活后細(xì)胞內(nèi)鈣釋放減少，SLE患者B細(xì)胞中絲氨酸和酪氨酸磷酸酶失衡有助于BCR激發(fā)促進(jìn)SLE患者B細(xì)胞的分化產(chǎn)生漿細(xì)胞，繼而促進(jìn)自身抗體的產(chǎn)生。

1.2 TLR7

TLR7是一種Ⅰ型跨膜蛋白，是已知SLE疾病模型的致病因素之一。TLR7識(shí)別單鏈RNA和鳥苷酸類似物，通過B細(xì)胞內(nèi)C端區(qū)域激活下游信號(hào)通路。TLR7發(fā)生構(gòu)象變化識(shí)別配體，適配器蛋白被招募到Toll/白細(xì)胞介素-1受體(Toll/interleukin-1 receptor，TIR)域。TIR域啟動(dòng)信號(hào)級(jí)聯(lián)激活NF-κB或干擾素調(diào)節(jié)因子(interferon regulatory factor,IRF)，促進(jìn)編碼NF-κB/IRF的mRNA轉(zhuǎn)錄[11]。TLR7相關(guān)SLE樣模型表現(xiàn)為染色質(zhì)含量和調(diào)控分子的異常。Fairhurst等[12]研究顯示，BXSBYaa小鼠自發(fā)誘導(dǎo)Y染色體上增加了TLR7基因的復(fù)制。BXSBYaa小鼠同時(shí)表達(dá)了X和Y染色體上2份TLR7的拷貝，對(duì)內(nèi)源性配體反應(yīng)增強(qiáng)，表現(xiàn)為促炎作用增強(qiáng)。同時(shí)TLR7的控制分子對(duì)于調(diào)控炎癥也很重要。Unc93同源B1 (Unc93 homolog B1, UNC93B1)是TLRs核酸敏感性的重要分子之一，UNC93B1與TLRs結(jié)合將其運(yùn)送到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，通過細(xì)胞外域的蛋白質(zhì)分解促進(jìn)TLRs成熟。一項(xiàng)來自埃及開羅大學(xué)的研究[13]顯示，TLR7基因型(rs385389)和狼瘡腎炎顯著關(guān)聯(lián)。關(guān)于波蘭SLE患者的研究[14]發(fā)現(xiàn)，TLR7基因(rs1634318和rs1616583)與SLE相關(guān)，但與盤狀紅斑狼瘡不相關(guān)。有研究[15]表明，女性復(fù)等位表達(dá)TLR7的B細(xì)胞表現(xiàn)出更高促進(jìn)SLE炎性反應(yīng)的功能。

1.3 CD40

2 B細(xì)胞抑制因素

2.1 Fc受體FcγRIIB

Fc受體(Fc receptors, FcRs)在結(jié)構(gòu)上有同源的Ig結(jié)構(gòu)域，但功能上只存在激活型和抑制型。使用FcRs缺陷小鼠研究[18]表明，敲除小鼠FcγRIIB導(dǎo)致SLE樣改變，骨抗彎強(qiáng)度和硬度降低導(dǎo)致骨質(zhì)疏松癥和骨折風(fēng)險(xiǎn)增加。FcγRIIB是含有酪氨酸免疫受體抑制基序(immunoreceptor Tyrosine based inhibitory motifs，ITIM)的FcRs，當(dāng)通過免疫復(fù)合物與激活受體聚集時(shí)，會(huì)觸發(fā)B細(xì)胞負(fù)性調(diào)節(jié)信號(hào)。ITIM被磷酸化,磷酸化的FcγRIIB具有高度親和性的Src同源2(Src homology 2, SH2)結(jié)構(gòu)域，大量的SHP-1被招募并被帶入激活FcRs產(chǎn)生的信號(hào)體，進(jìn)一步阻斷下游信號(hào)的激活[19]。來自麻省總醫(yī)院的研究[5]顯示，跨膜(transmembrane, TM)域內(nèi)單核苷酸多態(tài)性(rs1050501)具有阻斷FcγRIIB-I232T的功能，并且與SLE易感性相關(guān)聯(lián)，由此也表明Fc受體FcγRIIB抑制信號(hào)分子對(duì)SLE的潛在保護(hù)作用。

2.2 CD72

CD72是一種45 kDa 的Ⅱ型跨膜糖蛋白，作為BCR的共受體在B細(xì)胞上表達(dá)，在降低B細(xì)胞過度活化方面發(fā)揮著重要作用。CD72在B細(xì)胞上正常表達(dá)時(shí)，CD72在成熟B細(xì)胞中下調(diào)BCR下游的主要信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，包括NF-AT、NF-κB、JNK和胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(extracellular signal-regulated kinase，ERK)。在成熟B細(xì)胞中的作用表現(xiàn)為促進(jìn)細(xì)胞分裂周期阻滯，改變B細(xì)胞增殖活化，促進(jìn)抗原刺激后程序性細(xì)胞死亡。Vadasz等[20]研究發(fā)現(xiàn)，CD72在SLE患者外周血顯著增加，并與腎臟受累相關(guān)。可溶性CD72可能成為在SLE腎臟受累潛在生物標(biāo)志物。另有研究[21]發(fā)現(xiàn)，SLE患者活化的B細(xì)胞表面CD72表達(dá)較正常人顯著降低，與SLE疾病活動(dòng)性和補(bǔ)體水平負(fù)相關(guān)。CD72作為SLE患者B細(xì)胞的抑制性分子，其機(jī)制在于它能夠識(shí)別Sm/RNP (Sm/Ribonucleoprotein, RNP)，并通過激活SHP-1抑制Sm/RNP反應(yīng)性B細(xì)胞活化。CD72參與抑制TLR7介導(dǎo)的RNA在核蛋白復(fù)合物中對(duì)核酸酶產(chǎn)生反應(yīng)，促使游離RNA在遇到核內(nèi)RNA傳感器前被核酸酶降解進(jìn)而阻斷TLR7信號(hào)通路而發(fā)揮抑制作用。

2.3 PD-1

程序性死亡受體-1(programmed death 1，PD-1)屬于CD28/CTLA-4家族,PD-1通過與配體PD-L1(CD 274)和PD-L2(CD 273)結(jié)合產(chǎn)生抑制信號(hào)，降低免疫介導(dǎo)的組織損傷。在SLE患者相關(guān)研究[22]發(fā)現(xiàn)，CD19+PD-L1+的B細(xì)胞在SLE病人的外周血中表達(dá)異常，且疾病相關(guān)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)和臨床特征相關(guān)，預(yù)示了CD19+PD-L1+的B細(xì)胞在SLE發(fā)病機(jī)制中起到關(guān)鍵作用。在NZB / NZW F1小鼠動(dòng)物模型中研究[23]表明，PD-1 靶向藥物作用于CD28，進(jìn)一步減少B細(xì)胞活化和抗dsDNA抗體的產(chǎn)生，減緩了狼瘡腎炎的進(jìn)展。

3 B細(xì)胞和T細(xì)胞相互作用與相關(guān)靶向治療

B細(xì)胞雙向調(diào)節(jié)分子及B-T細(xì)胞相互作用可精確調(diào)控SLE的平衡狀態(tài)。異常細(xì)胞因子、趨化因子及生長(zhǎng)因子的產(chǎn)生、包括T細(xì)胞免疫應(yīng)答中性粒細(xì)胞胞外誘捕網(wǎng)(neutrophil extracellular traps, NET)相關(guān)分子的清除缺陷、血漿中異常外切體釋放，干擾素α過度表達(dá)等因素促使T細(xì)胞朝向Th2和Th17細(xì)胞途徑分化，并導(dǎo)致多克隆B細(xì)胞活化，增加程序性細(xì)胞死亡和NET形成。T細(xì)胞活化產(chǎn)生IL-4、IL-21，加速激活B細(xì)胞以及自身抗體產(chǎn)生。先前研究[2-4]評(píng)估了BCR交聯(lián)、sCD40L、TLR和細(xì)胞因子刺激后控制B細(xì)胞分化的基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的變化，發(fā)現(xiàn)在B細(xì)胞激活的3個(gè)信號(hào)中，通過激活酪氨酸激酶，如Syk/Btk/JAK，結(jié)局直接導(dǎo)致濾泡輔助性T細(xì)胞(follicular helper T cells, Tfh)、炎癥因子和自身抗體的產(chǎn)生。與健康人相比，SLE患者B細(xì)胞Syk/Btk磷酸化水平明顯升高。在SLE患者中，酪氨酸激酶如Syk/Btk/JAK是抑制B-T細(xì)胞相互作用的潛在靶點(diǎn)，目前的靶向藥物阿巴西普(Abatacept)是CTLA-4分子的細(xì)胞外功能區(qū)與人IgG1的Fc段結(jié)合而成的可溶性融合蛋白，該藥物治療患者可顯著降低外周血B細(xì)胞中p-Syk的水平，同時(shí)降低Tfh細(xì)胞的比例[24]。

淋巴信號(hào)活化家族 (signaling lymphocyte activation molecule family, SLAMF)中的受體CS1(CD319, SLAMF7)是一種自身配體，通過增加自分泌細(xì)胞因子的產(chǎn)生，誘導(dǎo)B淋巴細(xì)胞增殖。在一組基于SLE家族關(guān)聯(lián)研究[25]的結(jié)果顯示，在SLE患者的家族中，CS1基因存在突變，增加了SLE疾病發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)。CS1的重要特征之一是這些受體本身可作為自配體與其他免疫細(xì)胞上的CS1相互作用。SLE患者循環(huán)的B細(xì)胞有不同的亞群，如記憶B細(xì)胞、幼稚B細(xì)胞和漿細(xì)胞[26]。Kim等[27]研究結(jié)果顯示，SLE患者外周血單核細(xì)胞中CD19陽性B細(xì)胞的不同亞群可進(jìn)一步根據(jù)CS1表達(dá)水平進(jìn)行分類。CS1較高水平表達(dá)有利于B細(xì)胞增殖，而CS1在B細(xì)胞上表達(dá)是由CD40介導(dǎo)的B細(xì)胞活化誘導(dǎo)產(chǎn)生的。同時(shí)表明SLE疾病活動(dòng)與高頻率漿細(xì)胞和自反應(yīng)記憶B細(xì)胞有關(guān)。另一組研究[28]中比較了SLE患者和健康對(duì)照者外周血T細(xì)胞，B細(xì)胞及其各自分化亞群的SLAMF1-7的表達(dá)，結(jié)果顯示SLE患者的T/B細(xì)胞及其分化亞群的SLAMF1水平均升高。SLAMF4和SLAMF7在SLE患者CD8 T細(xì)胞的表達(dá)降低。SLAMF3在SLE CD4和CD8 T細(xì)胞表達(dá)略有增加。在SLE中各種SLAMF受體表達(dá)失調(diào)，有助于相關(guān)免疫療法的研究。目前受到廣泛關(guān)注的嵌合抗原受體-T細(xì)胞(chimeric antigen receptor engineered T cells, CAR-T)正是利用了CS1的表達(dá)在SLE中發(fā)生了改變，但圍繞CAR-T細(xì)胞的研究和以CS1為靶向治療SLE還需要進(jìn)一步臨床藥物試驗(yàn)明確其有效性和安全性。更好地理解CS1的作用將使我們能夠在自身免疫性疾病的免疫治療中利用這些靶向受體。臨床醫(yī)師雖然渴望更有針對(duì)性的治療藥物出現(xiàn)，但同樣關(guān)注可能存在的藥物不良反應(yīng)，這需要更長(zhǎng)時(shí)間的觀察和研究，特別是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型研究成果如何指導(dǎo)SLE患者臨床治療是急需解決的主要問題。

4 結(jié)語與展望

隨著人們對(duì)SLE疾病分期、慢性SLE疾病期B細(xì)胞中雙向調(diào)節(jié)以及B-T細(xì)胞間相互作用的深入研究，更多關(guān)于B細(xì)胞為核心的促炎/抑炎的靶向分子將會(huì)成為研究熱點(diǎn)。盡管目前對(duì)于SLE的B細(xì)胞信號(hào)通路的靶向藥物仍處于臨床藥物試驗(yàn)階段，但我們堅(jiān)信針對(duì)B細(xì)胞雙向精準(zhǔn)調(diào)控的免疫制劑將會(huì)為SLE的治療提供更多的策略。