謝桂蕓，黎世杰，梁華欽

廣州血液中心體檢采血部、廣州市醫(yī)學重點實驗室(血液安全重點實驗室)(廣東廣州 510095)

20世紀末引入我國的血小板單采技術，因其制品濃度及純度均高，其他血細胞污染少，成為臨床血小板供應的重要途徑[1]。在醫(yī)療科技快速發(fā)展的背景下，作為多種疾病中血小板減少或功能障礙出血的有效防治方法，血小板制品的臨床需求與日俱增[2]。同時，因機采血小板操作相對復雜，獻血時間長，獻血者招募及保留難度大，進一步加重了機采血小板的供應壓力[2]。2012年7月起實施的《獻血者健康檢查要求(GB18467-2011)》縮短了2次機采血小板獻血間隔期為不少于2周[3]。這一政策從提高重復血小板獻血者獻血頻率的角度大大增加了血小板的供應。與此同時，也引發(fā)了對頻繁單采血小板獻血者安全性的研究。既往研究大多以首末次獻血2個時間點為橫斷面，對比血小板計數(shù)差異，所得結(jié)論有不一致且忽略了中間多次獻血可能存在的血小板計數(shù)波動。為了解頻繁單采血小板獻血者血小板計數(shù)波動情況，從而對其安全性提供更多信息，本研究以2017—2018年度中，1年20次以上血小板獻血者為研究對象，采用多重測量方差分析，對其1～20次獻血前血小板計數(shù)波動情況及影響因素進行分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2017年1月1日至2018年12月31日，在廣州血液中心首次獻機采血小板且1年內(nèi)獻血小板20次以上獻血者311例，其中男294例，女17例，年齡20～58歲，平均(37.30±9.52)歲。本中心獻血者信息系統(tǒng)中獲取311名獻血者第1～20次每次單采血小板前外周血血小板計數(shù)、獻血次數(shù)、獻血小板治療量。

1.2 試劑與儀器 Sysmex KX-21N 型血液分析儀(日本)及配套試劑用于血小板采集前外周血血小板計數(shù)水平檢測；Amicus, MCS+, Trima血細胞分離機及配套一次性管道用于機采血小板。

1.3 每次獻血血小板計數(shù)的獲取 每次獻血前留取5 mL靜脈血，混勻存放于EDTA-K2抗凝管，嚴格按操作規(guī)程獲得獻血者每次獻血小板前外周血血小板計數(shù)。

1.4 統(tǒng)計學方法 配對t檢驗首次與第20次獻血前血小板計數(shù)變化；311名獻血者根據(jù)是否每次均獻血小板2 U，分為兩組，PRISM 7用于制作分組箱線圖(Tukey法)，觀察不同獻血量對于1～20次獻血前血小板計數(shù)波動的影響。以首次獻血前血小板計數(shù)為對照組，第2～20次獻血前血小板計數(shù)為實驗組，單因素方差分析(RM one-way ANOVA)血小板計數(shù)變化。單因素重復測量的方差分析分別檢驗性別、年齡組以及獻血小板治療量對1～20次血小板計數(shù)波動的影響；其中有統(tǒng)計學意義的因素，進一步納入多因素方差分析。SPSS 24.0統(tǒng)計軟件，用于重復測量方差分析及結(jié)果繪圖。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 1～20次獻血前血小板計數(shù)波動情況 第1～20次每次獻血前血小板計數(shù)平均值組間差異有統(tǒng)計學意義(F=3.22，P<0.05)。多重比較中，第2～14次與首次獻血前血小板計數(shù)差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，第15～20次獻血前血小板計數(shù)與首次獻血前血小板計數(shù)比較明顯增加，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

采血次數(shù)血小板計數(shù)P值?第1次282.9±51.24-第2次285.9±51.280.67第3次283.8±54.731.00第4次280.8±51.910.98第5次281.2±54.061.00第6次281.6±49.201.00第7次281.6±50.561.00第8次279.5±52.610.58第9次282.4±51.821.00第10次278.4±51.840.19第11次280.3±52.980.90第12次281.3±51.991.00第13次282.5±53.731.00第14次286.2±55.100.61第15次288.9±50.210.04第16次292.9±55.870.00第17次294.1±53.550.00第18次293.5±52.400.00第19次294.2±54.760.00第20次291.5±52.200.00

*與第1次比較

2.2 第1～20次獻血前血小板計數(shù)波動的影響因素 男性與女性1年20次以上血小板獻血者血小板計數(shù)波動差異無統(tǒng)計學意義(F=0.60，P>0.05)，見表2和圖1-A。年齡對血小板計數(shù)平均值波動的影響有統(tǒng)計學意義(F=6.36，P<0.05)，見表3和圖1-B。獻血小板治療量對血小板計數(shù)平均值波動的影響有統(tǒng)計學意義(F=79.46，P<0.05)，見表4和圖1-C。將年齡及獻血小板治療量納入多因素方差分析，獻血者年齡對血小板計數(shù)波動情況的影響無統(tǒng)計學意義(F=0.48，P>0.05)。每次均獻血小板2 U對比至少1次獻血小板1 U獻血者的1～20次獻血前血小板計數(shù)平均值波動更大(F=3.59，P<0.05)。

2.3 對比不同血小板單位數(shù)獻血者第1～20次獻血前血小板計數(shù)分布及波動情況 兩類獻血者第1～20次獻血前血小板計數(shù)均在(150～450)×109·L-1范圍內(nèi)波動，每次獻血小板均為2 U的獻血組每次獻血前血小板計數(shù)的平均數(shù)(箱中黑點)，中位數(shù)(箱中橫線)(箱中橫線)及上(箱上/下邊界線)下四分位間距(箱上/下邊界線)均大于至少1次獻血小板1 U獻血者。見圖2。

1年捐20次以上且至少1次獻血小板1 U獻血者，第1～20次獻血前血小板計數(shù)差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。1年捐20次以上且每次均獻2 U血小板獻血者第1～20次獻血前血小板計數(shù)差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，多重比較發(fā)現(xiàn)第16～19次獻血前血小板計數(shù)比首次獻血前血小板計數(shù)明顯增加，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

采血次數(shù)女性(n=17)男性(n=294)第1次285.18±42.47282.76±51.76第2次283.29±40.32286.02±51.89第3次293.35±42.68283.29±55.35第4次297.71±51.90279.85±51.82第5次290.65±53.44280.70±54.13第6次297.24±43.78280.66±49.41第7次293.35±54.84280.93±50.32第8次284.41±54.37279.25±52.59第9次290.88±41.62281.94±52.36第10次278.24±51.06278.40±51.97第11次283.71±55.38280.15±52.93第12次282.18±60.01281.27±51.60第13次284.59±52.96282.38±53.85第14次288.29±45.82286.09±55.65第15次286.18±41.44289.10±50.72第16次286.00±60.81293.31±55.65第17次285.59±49.16294.57±53.82第18次297.47±59.76293.32±52.04第19次301.71±53.91293.76±54.86第20次302.06±41.34290.92±52.74

采血次數(shù)<25歲(n=27)25～34歲(n=106)35～44歲(n=92)>44歲(n=86)第1次274.44±54.60286.44±52.43282.30±51.76281.80±48.58第2次277.70±59.24292.08±51.74286.02±52.68280.62±46.25第3次274.93±58.26290.48±56.41277.72±57.30284.99±48.14第4次272.59±52.51286.32±53.93278.05±53.40279.62±47.60第5次276.44±56.35287.47±54.44278.84±55.65277.66±51.32第6次276.37±54.41287.83±51.88276.48±47.45280.93±45.83第7次273.33±52.63288.29±52.68277.03±51.14280.85±46.33第8次260.04±51.45289.38±56.91277.92±51.86275.23±46.27第9次279.11±55.39292.33±53.15275.16±52.47279.03±47.14第10次274.07±59.92287.06±55.66274.89±51.44272.83±43.58第11次274.48±62.09287.62±55.18274.14±50.58279.86±49.38第12次275.93±54.49287.89±54.10281.08±50.15275.19±50.41第13次277.33±62.74289.46±54.68277.33±62.74274.43±50.90第14次279.15±65.04292.52±57.33286.76±56.94280.07±46.29第15次277.85±62.54296.67±51.19289.34±47.27282.47±47.02第16次284.11±58.65303.64±54.31289.78±58.57285.79±52.76第17次281.59±59.31304.86±54.59287.79±54.52291.45±47.67第18次284.19±55.80304.16±53.62289.59±50.86287.64±50.16第19次282.04±57.39307.16±56.66290.41±52.92286.07±51.23第20次276.48±54.64298.73±52.27289.03±51.24289.03±51.24

采血次數(shù)每次均獻2U(n=206)至少有1次獻1U(n=105)第1次297.15±47.54254.92±46.68第2次299.56±46.56254.92±46.68第3次298.94±51.21254.19±49.19第4次294.28±48.13254.42±48.99第5次294.62±50.80255.00±50.73第6次296.50±44.26252.27±45.22第7次296.83±44.39251.71±48.73第8次294.83±45.93249.51±52.13第9次297.98±44.93251.91±51.05第10次293.38±45.99248.99±50.23第11次295.51±48.85250.59±48.08第12次297.18±47.37250.19±46.43第13次297.88±47.96252.30±51.76第14次301.93±50.06255.36±51.55第15次303.55±43.84260.25±49.71第16次309.69±50.70259.98±50.83第17次310.06±49.77262.73±46.53第18次309.39±47.13262.45±48.27第19次308.58±50.97265.95±50.99第20次306.14±46.98262.85±50.15

3 討論

2012年7月起最新實施的獻血者健康檢查要求中，血小板捐獻間隔期規(guī)定從2次捐獻間隔至少4周，總獻血次數(shù)不超過12次/年，調(diào)整為2次間隔不少于2周，總獻血次數(shù)不超過24次/年[3]。緩解血液供應壓力的同時，考慮到多次頻繁捐獻機采血小板以愛心奉獻為初衷，保障獻血者健康同樣重要，不少采供血機構開展了針對多次頻繁機采血小板對獻血者血小板計數(shù)影響的研究，追蹤了多次機采血小板獻血者，對比首末次外周血小板計數(shù)均發(fā)現(xiàn)差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，但研究中或研究對象獻血次數(shù)較少，或未對獻血次數(shù)分類，或未對獻血量進行討論，無法獲得頻繁多次機采血小板獻血的情況[4-8]。吳次寧等[9]對2012年新規(guī)前后半年內(nèi)獻血者血小板計數(shù)進行對比，但研究期間研究對象混合了累計機采血小板獻血次數(shù)10～96次，且未提及每次獻血小板量。王欣等[10]考慮到獻血量的影響，分別對7個月內(nèi)10次單/雙份血小板獻血者首末次血小板計數(shù)對比，未發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計學差異，但該研究結(jié)果不能推廣到10次以后血小板計數(shù)波動情況。

本研究結(jié)果顯示，1年20次以上多次頻繁血小板獻血者血小板計數(shù)在正常范圍內(nèi)波動。這是因為血小板代謝速度快，外周血血小板因捐獻下降，刺激骨髓造血干細胞分化，原始巨核祖細胞分化為巨核細胞，進一步分化成熟血小板，脫落并補充到外周血中維持動態(tài)平衡。與既往研究不同，本研究限定了2017年或2018年首次捐獻機采血小板且1年累計獻血20次以上獻血者，與首次對比，第20次獻血前血小板計數(shù)有顯著增加。對于頻繁血小板捐獻者，骨髓造血干細胞刺激更強[11]，生成更多血小板生成素(TPO)及血小板衍生生長因子(PDGF)[12]。但也有研究表明，頻繁單采血小板可能引起相對性血小板耗竭，骨髓生長受抑，從而降低血小板生成能力[12-13]。因此，血小板計數(shù)的波動狀況值得進一步研究。

A:不同性別對血小板計數(shù)波動的影響；B:不同年齡對血小板計數(shù)波動的影響；C:不同獻血小板治療量對血小板計數(shù)波動的影響

圖1單因素重復測量的方差分析性別、年齡組以及獻血小板治療量對血小板計數(shù)波動的影響

以首末次獻血2個時間點為橫斷面，簡單對比血小板計數(shù)差異，丟失了中間可能存在的較大波動。本研究進一步探索1～20次獻血前血小板計數(shù)的變化，發(fā)現(xiàn)15次獻血前，血小板計數(shù)波動不大，自第16次獻血前，血小板計數(shù)出現(xiàn)有統(tǒng)計學意義的增加。這一結(jié)果提示，對于頻繁獻血者，骨髓造血刺激增強引發(fā)血小板計數(shù)顯著增加可能出現(xiàn)得更早，更需要及時發(fā)現(xiàn)以進一步監(jiān)測血小板波動情況。

除了獻血間隔期，獻血量也影響著造血刺激強度以及血小板再生速度。既往相關研究的研究對象或者混合獻血者，或者只針對研究一種獻血量獻血者。本研究首次對比探索不同獻血量，每次均獻血小板2 U及并非每次都獻2 U獻血者對血小板計數(shù)波動情況的影響及相關影響因素。并發(fā)現(xiàn)每次都獻血小板2 U在第1～20次獻血前血小板計數(shù)均顯著高于并非每次都獻2 U血小板獻血者。多因素方差分析結(jié)果表明，排除獻血治療量差異的影響后，性別和年齡組與血小板計數(shù)波動情況不相關。并非每次都獻2 U血小板獻血者第1～20次獻血前血小板計數(shù)沒有發(fā)生統(tǒng)計學意義的波動；而每次都獻2 U血小板獻血者自第16次獻血起出現(xiàn)了有統(tǒng)計學意義的血小板計數(shù)增長。這一結(jié)果提示獻血量對血小板計數(shù)波動存在影響，未來研究可以進一步跟蹤頻繁多次獻血且每次均捐獻2 U血小板獻血者20次獻血后的血小板波動情況。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)《獻血者健康檢查要求(GB18467-2011)》條件下，1年20次以上頻繁血小板獻血者首次至第20次獻血前血小板計數(shù)，引入性別，年齡和獻血單位數(shù)因素，仍在正常范圍內(nèi)波動；每次均獻2U血小板獻血者第16～20次獻血前出現(xiàn)血小板計數(shù)顯著增加。因此，目前以不少于2周的間隔期捐獻血小板20次以內(nèi)，血小板計數(shù)在正常范圍內(nèi)波動。下一步研究需要針對不同獻血量血小板獻血者更長期多指標監(jiān)測，為頻繁機采血小板對獻血者血液指標的影響提供證據(jù)。

圖2 每次獻血小板均為2 U及至少1次獻血小板為1 U治療量獻血者1～20次血小板計數(shù)箱線圖