秦國棟，王述柏*，張彩燕，李 莉，吳雪松，任景樂

（1.青島農業(yè)大學動物科技學院，山東青島 266109；2.青島市畜牧獸醫(yī)研究所，山東青島 266109）

多年來人工授精技術在蛋種雞生產中普遍應用，近年來在肉種雞生產中的應用亦日益增多。目前種雞場的人工授精大多采用原精液進行輸精，但原精輸精法存在一定缺陷[1]。公雞單次采精量較少、精子密度較高、母雞數量多、精液量相對缺乏，母雞的輸精量平均每次為25～30 μL，生產中難以準確定量輸精，輸精量不足會影響受精率，反之造成精液浪費[2-3]。對精液進行稀釋后可增加精液量，具有提高精液利用率、提高輸精量的準確性、提高優(yōu)良種公雞利用率、減少飼養(yǎng)成本、增加經濟效益等優(yōu)點。我國有關種雞精液稀釋液的研究和報道較多，不同文獻稀釋液的配方和使用效果不盡一致。本實驗根據文獻資料[4-6]設置了5 種不同組分的稀釋液，分別對AA+父母代肉種公雞和海蘭褐父母代蛋種公雞的精液進行稀釋，檢測并分析不同種類常溫稀釋液對精液品質的影響，以期探討肉種雞和蛋種雞的適宜精液稀釋液配方，旨在為種公雞精液稀釋技術方案的完善及提高輸精前的精液質量提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及儀器 實驗選擇8 只55 周齡AA+父母代肉種公雞和8 只海蘭褐父母代蛋種公雞，分別由山東民和牧業(yè)股份有限公司和青島畜牧獸醫(yī)研究所奧特種雞場提供。

實驗儀器包括精子質量分析儀、OLPUS 顯微鏡、普通顯微鏡、恒溫水浴鍋、采精杯、集精管、移液槍、血球計數板、計數器、載玻片、蓋玻片等。

1.2 實驗設計及飼養(yǎng)管理 所有實驗雞按種公雞的常規(guī)飼養(yǎng)規(guī)程飼養(yǎng)管理飼養(yǎng)于青島農業(yè)大學動物房，自由飲水，每只雞單籠飼養(yǎng)。每2 d 進行1 次人工采精訓練，采用背腹式按摩法采精，訓練適應7 d 后開始進行正式實驗。于第8 天08:00 采集8 只空腹肉種公雞的精液，將其混勻，混合精液等量分為5 組，每組設3 個重復。1～5 組分別采用5 種常溫稀釋液稀釋150 倍（表1），所有稀釋精液均置于37.5℃恒溫水浴鍋中保存15 min，立即檢測精子活率及畸形率。蛋種公雞精液的處理方法同上。

表1 精液稀釋液配方 %

1.3 檢測指標與方法 采用OLPUS 顯微鏡觀察精子活力和形態(tài)，共計數500 個精子。精子活率的檢測參考文獻[7]。精子畸形率的檢測及畸形精子的判定標準參考文獻[5]。

精子活率=直線運動精子數/總精子數×100%

精子畸形率=畸形精子數/500×100%

1.4 統(tǒng)計分析 用Excel2016 軟件對試驗數據進行初步處理，用SPSS 20.0 軟件進行統(tǒng)計處理，用Duncan′s法進行組間差異顯著檢驗，結果以平均值± 標準差表示。P＜0.01 表示差異極顯著，P＜0.05 表示差異顯著，P>0.05 表示差異不顯著。

2 結果與分析

2.1 不同常溫精液稀釋液對肉種雞、蛋種雞公雞精子活率的影響 如表2 所示，1 組稀釋液稀釋的肉種雞精液精子活率最高，較2、3、4、5 組分別高8.82%（P＜0.05）、31.55%（P＜0.01）、10.63%（P＜0.05）、25.04%（P＜0.01）；2、4 組的精子活率高于3、5 組（P＜0.01）；3 組最低，與5 組差異不顯著。1 組稀釋液稀釋的蛋種雞精液精子活率亦最高，分別較2、3、4、5 組高8.83%（P＜0.05）、26.22%（P＜0.01）、10.30%（P＜0.01）、23.78%%（P＜0.01）；組間的差異性與肉種雞一致。

表2 不同種類常溫精液稀釋液對肉種雞、蛋種雞公雞精子活率的影響 %

2.2 不同種類常溫精液稀釋液對肉種雞、蛋種雞公雞精子畸形率的影響 如表3 所示，1、2、3、5 組稀釋液稀釋的肉種雞精液中，精子畸形率低于4 組（P＜0.05或P＜0.01）；2 組最低，較4 組低4.12%（P＜0.01）。5 種稀釋液稀釋的蛋種雞精液中，精子畸形率1 組最低，4 組最高，1、2、3、5 組極顯著低于4 組，1、2 組顯著低于5 組，1 組分別較4、5 組低7.93%（P＜0.01）、3.66%（P＜0.05）。

3 討 論

3.1 不同種類常溫精液稀釋液對種公雞精子活率的影響研究表明谷氨酸鈉對精子有保護作用，在葡萄糖-磷酸鹽類雞精液稀釋液中，添加谷氨酸鈉優(yōu)于檸檬酸鈉，檸檬酸鈉又優(yōu)于氯化鉀；谷氨酸鈉在單獨配制稀釋液時以每100 mL 含 2.40～2.47 g 為宜[8-10]。王世銀等[11]研究表明，稀釋液中的糖類對精子質膜有良好保護作用，能保證精液短期保存時精子活率及畸形率指標優(yōu)良，而氯化鈉等無機鹽類對精子質膜有較強的破壞作用。糖類和谷氨酸鈉具有提供能量及保護精子的作用[12]。金美林等[13]在精液稀釋液中添加Mg2+，維持了精子的活動；李潔等[14]在精液稀釋液中添加Mg2+，結果顯示精液保存效果不佳。本實驗顯示，含有蔗糖和卵黃的1 組稀釋液的精子活率最高，其次是2 組和4 組，3 組和5 組精子活率最低?？梢婋u精液稀釋液中的糖類、谷氨酸鈉等成分有利于精子的體外存活。

表3 不同種類常溫精液稀釋液對肉種雞、蛋種雞公雞精子畸形率的影響 %

3.2 不同種類常溫精液稀釋液對種公雞精子畸形率的影響 大量研究表明，畜禽精液稀釋液的組成及各組分的配比對精子形態(tài)會產生不同程度的影響。張兆旺等[9]將3 種糖（葡萄糖、蔗糖、果糖）、3 種有機鹽（檸檬酸鈉、檸檬酸鉀、谷氨酸鈉）、2 種無機鹽（氯化鈉、氯化鉀）共8 種物質作為56 種稀釋液的溶質作為稀釋液的溶質，蔗糖和谷氨酸鈉液的精子畸形率只有5.29%和5.40 %。李潔等[14]研究表明，與未添加Mg2+稀釋液相比，精液稀釋液中添加Mg2+的公雞精液保存效果并未提高反而有所降低。本實驗中，含有Mg2+的3 號稀釋液的畸形率評定指標較差。張兆旺[10]研究表明，Na+可提高精子活動的興奮性。王世銀等[11]采用果糖和谷氨酸鈉配制的稀釋液精子畸形率只有10.6%。張兆旺等[5]研究表明，母雞的輸卵管中分離出的一種谷氨酸鹽能延長雞精子在體外的存活時間。Siudzinska 等[15]和Dourard 等[16]研究表明，利用精液稀釋液低溫保存雞和火雞精液24 h，精子畸形率都顯著增加。有研究表明，谷氨酸鈉對精子質膜有良好的保護作用，可降低精子發(fā)生畸變的概率，提高受精率[11]。本實驗配制含有Na+的4 種稀釋液中，肉種雞精液經稀釋液2 稀釋后的精子畸形率最低，蛋雞精液則經稀釋液1 稀釋后的精子畸形率最低，除Na+因素影響外，還可能與谷氨酸鈉有關。

4 結 論

本實驗中，1 組稀釋液（蔗糖11%、卵黃0.8%、蒸餾水88.2%）稀釋的肉種雞和蛋種雞精液，精子活率最高，1、2 組的精子畸形率最低。可見，1 組稀釋液的效果最好，其次是2 組（谷氨酸鈉2.4%、蒸餾水97.6%）。