□ 吉偉佳 易路遙 虞雪軍 章 紅 熊 雯 楊婷婷 晏 亮 江西省藥品檢驗檢測研究院江西省藥品與醫(yī)療器械質(zhì)量工程技術(shù)研究中心

氟蟲腈是廣譜殺蟲劑，英文通用名為FIPRONIL，商品名為銳勁特，是一種苯基吡唑類殺蟲劑[1]，用于防治跳蚤、虱子、蟑螂、螨蟲等昆蟲，被世界衛(wèi)生組織列為對人類有中度毒性的化學(xué)品，大劑量食用可導(dǎo)致肝功能、甲狀腺、腎臟損傷，歐盟法律規(guī)定氟蟲腈不得用于人類食品產(chǎn)業(yè)鏈中的畜禽。2017年7月，荷蘭被爆出“毒雞蛋”事件，事件影響到歐洲多國，中國臺灣也受到波及。雖然我國大陸市場沒有歐洲毒雞蛋流入，但氟蟲腈的使用和檢測也已經(jīng)引起了關(guān)注。

禽類養(yǎng)殖過程中一般不使用氟蟲腈，但在飼料的原料玉米、麥麩等儲存過程中，存在使用氟蟲腈殺蟲的可能性。氟蟲腈穩(wěn)定性較差，在動物、植物、環(huán)境中代謝生成毒性與氟蟲腈相當(dāng)，甚至更高的砜化物或亞砜化合物，對環(huán)境極其不友好。研究表明作為代謝物之一的氟蟲腈砜的毒性比氟蟲腈高6倍以上，氟甲腈的毒性則是氟蟲腈原藥的9倍[2]，因此從安全角度考慮，同時分析氟蟲腈及其代謝物的藥物殘留更有意義。

目前，我國對于氟蟲腈的檢測主要在水果、蔬菜等領(lǐng)域，例如，現(xiàn)行有效的國家標(biāo)準(zhǔn)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SN/T 1982—2007[3]主要針對水果、蔬菜、茶葉等樣品，雞肉樣品也只檢測了氟蟲腈原藥，缺少對氟蟲腈代謝物的檢測；GB 23200.115-2018[4]中規(guī)定了雞蛋中氟蟲腈及其代謝物殘留量的液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用測定方法，卻未見氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù)檢測鮮蛋中氟蟲腈及其代謝物的方法；GB 2763.1-2018[5]已經(jīng)對鮮蛋中氟蟲腈最大藥物殘留量做出規(guī)定。作為補(bǔ)充方法，建立雞蛋等動物源性食品中氟蟲腈及其代謝產(chǎn)物殘留的氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測方法，可以完善檢測體系，能更好的了解氟蟲腈及其代謝產(chǎn)物在雞蛋中的污染狀況，評估氟蟲腈及其代謝產(chǎn)物經(jīng)雞蛋攝入風(fēng)險的先決條件。

近年來，氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù)不斷發(fā)展提高，尤其在多組分獸藥、農(nóng)藥分析方面的分離和取證方面優(yōu)勢明顯。本文采用氣相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對雞蛋中可能殘留的氟蟲腈及其代謝物進(jìn)行色譜分離和定性定量分析，通過考察不同前處理方式、回收率、精密度等指標(biāo)，選擇了高效快速的QUECHERS提取凈化法，建立了鮮蛋中氟蟲腈及其代謝產(chǎn)物殘留量測定的氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（GC-MS法），該方法前處理便捷高效，在10～500 ng/mL范圍內(nèi)線性良好，精密度較好，檢測限能滿足國家標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)驗證適用于鮮蛋中氟蟲腈及其代謝產(chǎn)物殘留的檢測。

1 材料與方法

1.1 儀器及試劑

WondaPak QuEChERS提取包(含氯 化 鈉 等)、WondaPak QuEChERS SPE凈 化 管（ 含PSA、C18等）；7890A/5975氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國 Aglient）；XS205DU型電子天平（梅特勒托利多）；VXR BS25振蕩器（德國IKA）；乙腈（色譜級，美國sigma），氟蟲腈、氟甲腈、氟蟲腈亞砜以及氟蟲腈砜標(biāo)準(zhǔn)品（國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心）；蛋類樣品（市售雞蛋，3 000 g）。

1.2 色譜條件

色譜柱：采用DB-5MS，規(guī)格為30 m×0.25 mm×0.25 μm，安捷倫（Agilent）；柱溫：70 ℃保持2 min，以20 ℃/min升溫至230 ℃，保持5 min，繼續(xù)升溫至270 ℃，保持2 min。柱流速為1.0 mL/min；進(jìn)樣口溫度：250 ℃；進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣體積：1 μL。

1.3 質(zhì)譜條件

電離方式：電子轟擊源（EI），70 ev；離子源溫度：230 ℃；離子源電壓：1.20 kV；GC/MC傳輸線溫度：280 ℃；溶劑延遲：4 min；測定方式：選擇離子監(jiān)測（SIM），監(jiān)測離子詳見表1。

表1 各目標(biāo)化合物選擇監(jiān)測離子表

1.4 樣品制備

稱取5.00 g經(jīng)均漿后的樣品，加入5 mL的1%甲酸乙腈，振蕩30 s后，加入一份WondaPak QuEChERS提取包（含氯化鈉等)，渦旋30 s，于8 000 r/min的條件下離心10 min，吸取1 mL上清液，待凈化。將1 mL上清液轉(zhuǎn)移至WondaPak QuEChERS SPE凈化管（含PSA、C18等）中，渦旋30 s，于10 800 r/min下離心2 min，取上清液，過0.22 μm有機(jī)濾膜，供氣相色譜－質(zhì)譜測定。

2 結(jié)果與討論

2.1 前處理方法的選擇

由于雞蛋中脂肪、蛋白質(zhì)含量較高，基質(zhì)復(fù)雜，對目標(biāo)物質(zhì)干擾大，所以前處理中凈化方法的選擇對實驗結(jié)果影響很大。本實驗對比了兩種提取凈化方法對回收率的影響，分別為WondaPak QuEChERS提取法和HLB固相萃取柱凈化法。其中HLB固相萃取柱凈化法提取樣品進(jìn)入氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀測定，測得4種目標(biāo)物質(zhì)的回收率僅有50%，低于WondaPak QuEChERS提取法提取的樣品（回收率80%以上），且WondaPak QuEChERS提取法操作更簡便快捷，提高實驗效率，比較結(jié)果之后本實驗選擇了WondaPak QuEChERS提取法作為前處理方法。

2.2 線性實驗和檢測限

標(biāo)準(zhǔn)儲備液的配制：用乙腈將氟蟲腈、氟甲腈、氟蟲腈亞砜和氟蟲腈砜4種標(biāo)準(zhǔn)品配制成濃度約為100 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。分別準(zhǔn)確吸取上述氟蟲腈、氟蟲腈亞砜、氟蟲腈砜和氟甲腈4種標(biāo)準(zhǔn)儲備液各2.5 mL，置于100 mL棕色量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻，即得混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。樣品于-20 ℃保存，保存期1個月（濃度約2 500 ng/mL）。

基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液的制備：稱取6份陰性樣品5.00 g于50 mL離心管中，分別精密加入混合標(biāo)準(zhǔn)使用液，配制成系列濃度為10、25、50 、100、200、300 ng/mL以 及500 ng/mL基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液。在1.2和1.3的色譜質(zhì)譜條件下以峰面積對濃度作線性回歸分析，制成的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程如表2所示。采用SIM測定方式得到氟蟲腈及其代謝物的總離子流圖（TIC）如圖1所示。

本方法中以3倍信噪比計算氟蟲腈及其代謝物氟甲腈、氟蟲腈亞砜、氟蟲腈砜的檢測限，如表2所示。該方法線性良好，方法簡便、準(zhǔn)確可靠，靈敏度高，可以滿足分析工作要求。

2.3 回收率與精密度

本實驗選取陰性樣品作為基質(zhì)進(jìn)行了回收率與精密度的試驗，對氟蟲腈及其代謝物的混合標(biāo)液按0.05、0.2、0.4 mg/kg 3個濃度水平進(jìn)行添加回收率試驗，各平行3份，結(jié)果見表3。

表2 各組分的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程、相關(guān)系數(shù)及檢出限表

圖1 四種物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品的總離子流圖

表3 各組分加標(biāo)回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差表

3 結(jié)論

本實驗建立了鮮蛋中氟蟲腈及其代謝物氟甲腈、氟蟲腈亞砜、氟蟲腈砜氣質(zhì)聯(lián)用定性定量分析檢測的方法，對前處理凈化條件進(jìn)行優(yōu)化并對方法進(jìn)行了方法學(xué)試驗。結(jié)果，該方法線性良好，回收率較高，且操作簡便高效，適用于雞蛋中氟蟲腈及其代謝的分析檢測。