李 艷，孫家祥，劉利洪

抗核抗體（ANA）及抗核抗體譜（ANAs）的檢測目前已廣泛用于自身免疫性疾?。ˋID）的診斷與療效評(píng)估。隨著實(shí)驗(yàn)診斷技術(shù)的提高和臨床對(duì)AID的研究深入，對(duì)抗核抗體類自身抗體的認(rèn)識(shí)更加豐富和全面。傳統(tǒng)抗核抗體的定義早已被拓展，其靶抗原被證實(shí)不僅包括細(xì)胞核部分，還涵蓋細(xì)胞漿、細(xì)胞骨架、細(xì)胞分裂周期蛋白等全部細(xì)胞成分[1]?？购丝贵w類自身抗體和其他自身抗體一樣，在體內(nèi)的表達(dá)往往早于AID的臨床癥狀[2]，一般在體內(nèi)潛伏多年，導(dǎo)致機(jī)體發(fā)生強(qiáng)烈自身免疫反應(yīng)才會(huì)引起疾病的發(fā)生。早期加強(qiáng)抗核抗體及ANAS的檢測，對(duì)AID的早診斷、早干預(yù)尤為重要。以往臨床僅對(duì)高度疑似AID患者進(jìn)行抗核抗體檢查，錯(cuò)過疾病干預(yù)和治療的最佳時(shí)機(jī)。近年來，抗核抗體在體檢人群的風(fēng)險(xiǎn)預(yù)警價(jià)值逐漸被重視。本研究通過對(duì)2343例體檢者的抗核抗體及ANAS檢測結(jié)果的回顧性分析，探討其對(duì)體檢人群AID的風(fēng)險(xiǎn)預(yù)警和臨床意義。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 2343例體檢者來自德陽市人民醫(yī)院2014年8月～2017年6月健康體檢中心，肝腎功血脂、血細(xì)胞分析、尿液分析等檢測結(jié)果均未見明顯異常，其中男1181例，女1162例；年齡14～88（49.7±8.6）歲。 排出標(biāo)準(zhǔn)：心、腦、肝、腎、肺等臟器的器質(zhì)性疾?。患韧汛_診為AID的患者；合并嚴(yán)重慢性疾病，如癌癥、糖尿病、活動(dòng)性肝炎，結(jié)核等。

1.2 檢測指標(biāo) 所有體檢者于當(dāng)日清晨空腹抽血，2 h內(nèi)完成血清分離，置2～8℃保存，3 d內(nèi)完成檢測。ANA和抗dsDNA抗體采用間接免疫熒光法(IIF)，試劑由德國歐蒙公司提供；ANAs檢測采用線性免疫印跡法(LIA)，項(xiàng)目組合包括u1-nRNP/Sm、Sm、SS-A60、Ro-52、SS-B、Scl-70、Jo-1、CENP-B、dsDNA、Neukleosmone、Histone、Rib-Prot、AMA-M2 共 13 項(xiàng) ，試劑由蘇州浩歐博生物醫(yī)藥公司提供。采用Olympus-BX1型熒光顯微鏡，Rayto Blotray 866自動(dòng)膜條分析儀。

1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn) ANA以抗體滴度≥1∶100為陽性，dsDNA抗體以抗體滴度≥1∶10為陽性；ANAs 13項(xiàng)以樣本1∶100稀釋后，各抗體模塊反應(yīng)區(qū)顯色≥臨界值顏色為陽性。

1.4 隨訪 綜合考慮年齡因素與其他檢查結(jié)果，重點(diǎn)關(guān)注ANA滴度≥1∶320及ANA滴度≥1∶100合并ANAs陽性者，篩選出138例高危人群，以3～6個(gè)月為周期定期隨訪或?qū)？凭驮\。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，計(jì)數(shù)資料用頻數(shù)和百分率表示，率的比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ANA陽性檢出率及各年齡階段ANA陽性分布情況 2343例中，共篩查出ANA陽性231例，陽性率為9.86%。其中男性80例，陽性率6.77%；女性151例，陽性率為12.99%，二者比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。隨著年齡的增長，ANA陽性率漸呈上升趨勢(shì)，從11～60歲期間，男女陽性率在各階段皆差異顯著（P＜ 0.05，表 1）。

2.2 隨訪結(jié)果 231例陽性中，ANA滴度≥1∶100者 119 例（51.51%），≥1∶320 者 98 例（42.42%），≥1∶1000者14例（6.06%）。隨訪138例陽性者最終確診AID 15例，疑似AID 6。確診的15例AID中，9例 ANA 滴度≥1∶320，6 例 ANA 滴度≥1∶1000；疑似6例 AID 中，1例 ANA 滴度≥1∶100，4例 ANA 滴度≥1∶320，1 例 ANA 滴度≥1∶1000。

2.3 ANAs檢測結(jié)果 2343例中，共檢出ANAs陽性163例，陽性率為6.96%。檢出率較高的單個(gè)自身抗體前幾位依次是抗-Ro-52、抗-SSA-60、抗-AMA-M2、抗-SS-B等。AID確診和疑似病例的抗體大多為二聯(lián)及以上陽性。見表2。

表1 各年齡段不同性別體檢者ANA陽性率分布(%)

表2 ANAs檢測結(jié)果

3 討論

由于AID臨床癥狀和表現(xiàn)往往不典型，潛伏期長，具有相當(dāng)隱匿性，其血清學(xué)自身抗體檢測仍是重要篩查手段。用于臨床檢測常見的自身抗體目前約80余種，其范圍已超越AID本身，拓展至消化、生殖及腫瘤等領(lǐng)域[3]。近幾年逐漸開始重視健康體檢人群自身抗體表達(dá)情況，對(duì)AID的早發(fā)現(xiàn)、早治療有著非常重要意義，但仍存在爭議，認(rèn)為體檢人群較低的陽性預(yù)測值和缺乏必要的分層管理策略，會(huì)對(duì)人群造成心理困擾和經(jīng)濟(jì)上的浪費(fèi)[4]。胡朝軍等[5]認(rèn)為，體檢人群中ANA抗體滴度≥3倍臨界值對(duì)AID具有非常重要預(yù)警價(jià)值。李晞等[6]報(bào)道，其對(duì)1157例體檢篩查出ANA陽性病例中，對(duì)100例自身抗體異常者進(jìn)行了隨診，確診AID患者14例，非AID患者24例，對(duì)疾病的預(yù)警率達(dá)3.28%。本研究資料表明，體檢人群ANA的陽性率為9.86%，略低于胡朝軍報(bào)道的11.27%，高于李晞的7.35%，可能與各自研究對(duì)象的各年齡分布的差異有關(guān)。本研究2343例中，共篩查出231例ANA陽性，最后確診AID 15例，疑為AID 6例，使這些病例及時(shí)得到了治療和干預(yù)。實(shí)際上，本研究觀察的2343例大多是在第1次體檢中各項(xiàng)指標(biāo)均正常，在第2～3次體檢時(shí)擴(kuò)展選擇了ANA和ANAs的檢測，才被篩查出AID和疑似AID。雖ANA陽性本身不能確診任何疾病，但結(jié)合相關(guān)靶抗原，通過?？凭驮\進(jìn)一步追蹤檢查，結(jié)合臨床可以早期確診AID[7]。

筆者分析，體檢人群的ANA陽性率隨年齡增加而上升，11～60歲期間，男女陽性率在各階段皆差異顯著，60歲以后男女ANA陽性率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這種隨年齡不斷增加的ANA陽性率，可能是免疫功能降低后，免疫系統(tǒng)重塑或失調(diào)的結(jié)果[8]。低滴度水平的陽性，有時(shí)易被忽略為生理性或其他非AID引起。但要注意的是，AID臨床癥狀出現(xiàn)以前，自身抗體可以在體內(nèi)蟄伏多年。原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBC）患者在臨床發(fā)病前十幾年，體內(nèi)就長期存在抗線粒體抗體[9]；METCALF等對(duì)AMA-M2陽性的健康體檢者隨訪10余年發(fā)現(xiàn)，有76%的10年內(nèi)最終出現(xiàn)PBC的臨床表現(xiàn)[10]；有人持續(xù)追蹤Ro(SSA)和ANA陽性患者，9年以后臨床診斷為SLE分別占47.00%和80.00%[2]?？梢娫缙跈z出自身抗體，定期隨訪跟蹤，可以有效加強(qiáng)AID的早期診斷。為篩選AID和非AID，榮舉等[11]建議，將ANA滴度1∶320作為閾值，AID診斷特異性可達(dá)81.00%，敏感性仍接近75.00%，這一建議與胡朝軍等基本一致。本研究篩選出的231例ANA陽性體檢者，最后確診的15例AID雖均滴度≥1∶320，但建議ANA滴度≥1∶100且ANAs有陽性的病例，結(jié)合臨床也要隨訪關(guān)注。

本研究發(fā)現(xiàn)，在體檢人群檢出的ANAs單個(gè)抗體陽性率相對(duì)較高的主要有抗-Ro-52、抗-SSA-60、抗-AMA-M2、抗-SS-B，與郭亞平的報(bào)道基本一致[12]。但一些表達(dá)率相對(duì)較低，與疾病關(guān)聯(lián)度較高的自身抗體一旦出現(xiàn)陽性，如抗-dsDNA、抗-Sm、抗-u1-nRNP/Sm等，應(yīng)引起足夠的重視。本研究中檢出的3例抗-dsDNA陽性，最終均被確診為AID。特別是這些抗體出現(xiàn)二聯(lián)及以上陽性時(shí)，對(duì)體檢人員的風(fēng)險(xiǎn)預(yù)警意義就更大，如本研究最后確診的AID病例均是二聯(lián)及以上抗體陽性。值得注意的是，ANA與ANAs的表達(dá)并非完全一致，ANA與ANAs同時(shí)檢測可以互為補(bǔ)充，對(duì)發(fā)現(xiàn)體檢人員潛在AID更具臨床意義。

綜上所述，抗核抗體及ANAS篩查用于健康體檢人群是非常必要的，對(duì)陽性檢出者進(jìn)行定期隨訪或召回?？凭驮\，可有效早期篩查出AID，對(duì)AID控制、改善預(yù)后和提高患者生活質(zhì)量均有重要意義。