天津市黃河醫(yī)院檢驗(yàn)科 （天津 300110）

內(nèi)容提要： 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明糖化血紅蛋白是臨床糖尿病診斷的重要指標(biāo)之一，是衡量糖尿病患者血糖控制水平的金標(biāo)準(zhǔn)，特別是對(duì)于進(jìn)展性視網(wǎng)膜病變的評(píng)估具有重要作用，因此糖化血紅蛋白的實(shí)驗(yàn)室檢測具有重要意義。雖然我國關(guān)于糖化血紅蛋白的研究起步較晚，但是國內(nèi)專家學(xué)者關(guān)于糖化血紅蛋白的實(shí)驗(yàn)室檢測也開展了大量的研究工作，形成了一系列的檢測方法和技術(shù)，取得了豐碩的成果?；诖?，本文對(duì)近些年關(guān)于糖化血紅蛋白實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)及方法研究進(jìn)展進(jìn)行綜述，以期為臨床糖化血紅蛋白檢查提供借鑒，更好服務(wù)于糖尿病的診療。

糖化血紅蛋白最早是由伊朗學(xué)者Rahbar從糖尿病患者血液中發(fā)現(xiàn)的一種異常升高的血紅蛋白組分，其含量與患者的血糖水平具有密切關(guān)系，因此人們將其用于糖尿病的診療之中[1]。隨著研究的不斷深入，人們發(fā)現(xiàn)糖尿病治療中通過有效控制糖化血紅蛋白水平有助于降低糖尿病患者視網(wǎng)膜病變以及神經(jīng)病變等并發(fā)癥的發(fā)生率[2]。因此，糖化血紅蛋白的檢測逐漸受到人們的重視，并且發(fā)展形成了一系列糖化血紅蛋白檢測技術(shù)和方法。

1.離子交換層析技術(shù)

該技術(shù)主要是根據(jù)不同組分電荷的差異來進(jìn)行分離。離子交換層析技術(shù)中的微柱法最早應(yīng)用于臨床糖化血紅蛋白的檢驗(yàn)，但是由于受到溫度、血脂以及膽紅素等多種因素的影響，該技術(shù)的檢驗(yàn)精度較低，目前在臨床檢驗(yàn)中已經(jīng)基本淘汰[3]。當(dāng)前主要采用高通量的高效液相色譜技術(shù)以及低壓系統(tǒng)高效液相色譜技術(shù)。在pH中性環(huán)境下，糖化血紅蛋白所攜帶的正電荷相對(duì)較少，采用高效液相色譜技術(shù)可以有效將其進(jìn)行分離[4]。目前高效液相色譜技術(shù)已經(jīng)被IFCC列為糖化血紅蛋白檢驗(yàn)的金標(biāo)準(zhǔn)。該技術(shù)還具有操作方便簡單、檢測速度快以及檢測精度高等特點(diǎn)，在臨床應(yīng)用中優(yōu)勢明顯，不足之處在于檢測費(fèi)用較高[5]。

2.親和層析技術(shù)

該技術(shù)主要基于糖化血紅蛋白與非糖基化血紅蛋白之間不同的化學(xué)結(jié)構(gòu)，生物大分子可以通過專一配基將糖化血紅蛋白牢固地結(jié)合在固相載體上，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)其分離[6]。該方法檢測得到的為總糖化血紅蛋白，需要經(jīng)過一定的換算得到最后的結(jié)果。同時(shí)該技術(shù)與高效液相色譜技術(shù)之間具有良好的相關(guān)性[7]。但是高效液相色譜技術(shù)在應(yīng)用過程中容易受到多種血紅蛋白變異體的影響，而親和層析技術(shù)基本不受影響，因此親和層析技術(shù)具有更高的準(zhǔn)確性[8]。

3.免疫檢測

該技術(shù)主要是根據(jù)抗原-抗體免疫學(xué)結(jié)合原理，通過抗體特異性對(duì)糖化血紅蛋白β鏈N末端最后4～6個(gè)氨基酸所組成的抗原表位有效識(shí)別，再結(jié)合比色法或者比濁法對(duì)血紅蛋白量進(jìn)行有效檢測[9]。但是由于不同糖化血紅蛋白克隆抗體試劑所對(duì)應(yīng)的抗原決定簇有所不同，進(jìn)而導(dǎo)致具有不同的親和力，這在一定程度上會(huì)影響不同試驗(yàn)結(jié)果之間的可比性[10]。

4.均相酶法

該技術(shù)是近些年研發(fā)的一種糖化血紅蛋白檢測新技術(shù)。該技術(shù)需要首先將全血制備成溶血稀釋液樣本，然后酶解血紅蛋白的β鏈N末端的糖化二肽結(jié)構(gòu)，釋放糖化纈氨酸，其在果糖基氨基酸氧化酶作用下生成雙氧水，雙氧水濃度與糖化血紅蛋白之間具有正向相關(guān)關(guān)系，因此可以對(duì)糖化血紅蛋白含量進(jìn)行檢測[11]。該技術(shù)采用全自動(dòng)生化分析儀便可以實(shí)現(xiàn)，其檢測結(jié)果與高效液相色譜法具有良好相關(guān)性。

5.毛細(xì)管電泳法

毛細(xì)管電泳法也是近些年發(fā)展起來的一種以毛細(xì)管作為分離通道，以高壓直流電場作為驅(qū)動(dòng)力的新技術(shù)。該技術(shù)的主要原理為在堿性緩沖液以及高電壓環(huán)境下，不同血紅蛋白組分具有不同的泳動(dòng)速率，該技術(shù)的檢測精度優(yōu)于傳統(tǒng)的離子交換層析技術(shù)[12]。在堿性緩沖液條件下，距離陰極端最近的為HbA1a和HbA1b，距離陽極端最近的為血紅蛋白中未經(jīng)糖化的HbA0，糖化血紅蛋白位于中間位置。肖翔等[13]分析了毛細(xì)管電泳法檢測糖化血紅蛋白的性能，結(jié)果顯示毛細(xì)管電泳法檢測結(jié)果與高效液相色譜技術(shù)檢測結(jié)果之間具有良好的相關(guān)性（R2=0.994），在醫(yī)學(xué)決定水平10%和16%的偏倚為-2.77%和-1.61%，檢測結(jié)果具有良好的抗干擾性。郭文鵬等[14]分析了基于微流控芯片-毛細(xì)管電泳方法在糖化血紅蛋白分離中的應(yīng)用效果，結(jié)果顯示該方法將糖化血紅蛋白有效分離出來，并且具有特異性好、精度高等特點(diǎn)，具有較高的應(yīng)用價(jià)值。紀(jì)玉松[15]分析了在糖化血紅蛋白檢測中毛細(xì)管電泳技術(shù)的優(yōu)勢，結(jié)果顯示在沒有干擾的情況下，毛細(xì)管電泳法與伯樂D10糖化血紅蛋白分析儀檢測結(jié)果具有良好的相關(guān)性，但是在存在變異體的情況下，毛細(xì)管電泳法的檢測結(jié)果明顯優(yōu)于伯樂D10糖化血紅蛋白分析儀檢測結(jié)果，同時(shí)應(yīng)用更加簡單方便，操作重復(fù)性高，因此具有較高的應(yīng)用價(jià)值。

6.結(jié)束語

基于上述分析糖化血紅蛋白在糖尿病診斷中具有重要作用，因此糖化血紅蛋白檢測受到人們越來越多重視，并且研發(fā)了一系列糖化血紅簡單檢測方法，主要包括離子交換層析技術(shù)、親和層析技術(shù)、免疫檢測技術(shù)、均相酶法以及毛細(xì)管電泳法等。每種方法具有不同的特點(diǎn)，在臨床應(yīng)用中可以基于患者的具體條件選擇合理的檢測方法。