周仲強，程曉英，裴明日

（1吉化集團公司總醫(yī)院藥劑科，吉林 吉林；2吉林省吉林市食品藥品檢驗所，吉林 吉林）

0 引言

牛黃解毒片的配方中含有大黃、黃芩、牛黃、冰片等藥物，毒性較低，唯有雄黃毒性最強[1]，用量又大，其主要成分為二硫化二砷，砷占75%、硫占24.9%，遇熱易分解氧化，變成有劇毒的三氧化二砷，因此牛黃解毒片的質(zhì)量問題就顯得很重要[2]。此次收集6個省、直轄市、自治區(qū)的16家生產(chǎn)企業(yè)30批牛黃解毒片，按藥典規(guī)定檢驗方法進行了全項檢驗，以期為評價該藥品的質(zhì)量和提高質(zhì)量標準提供依據(jù)。

1 檢驗方法

1.1 性狀、鑒別（一項顯微鑒別、五項薄層鑒別）全部合格。

1.2 檢查項中三氧化二砷按藥典方法檢驗，所顯砷斑顏色均淺于標準砷斑。但是每次顯示結果的顏色不統(tǒng)一，有時偏黃色，有時偏綠色。實驗中應注意嚴格把握反應溫度、時間，盡量避光操作。

1.3 檢查

土大黃苷為補充方法，取本品大片2片（小片3片），除去糖衣，研細，加乙酸乙酯20ml，加熱回流30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇5ml使溶解，靜置，取上清液作為供試品溶液。取土大黃苷對照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作為對照品溶液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，不應顯相同顏色的熒光斑點，檢查結果全部合格。

1.4 含量測定

按藥典標準測定，本品每片含黃芩以黃芩苷（C21H18O11）計，大片不得少于4.5mg；小片不得少于3.0mg。結果顯示最低為3.4 mg/片，最高為9.3 mg/片，差異比較大，客觀可以反映藥品質(zhì)量。

2 三氧化二砷檢驗結果分析

砷是一種有害元素，可經(jīng)呼吸道、消化道及皮膚吸收而進入人體，從而引起人體器官的各種病變。在臨床上由砷引起慢性中毒，如腦、末梢神經(jīng)、皮膚病等，甚至還包括呼吸道癌和皮膚癌。從牛黃解毒片的組方看三氧化二砷主要來源于雄黃,每片(大片)牛黃解毒片含有50mg、小片33mg雄黃。雄黃占整個處方量的6.41%，雄黃的化學成分為二硫化二砷,屬不可溶性砷，無毒性，但是遇熱分解變成有劇毒的三氧化二砷,也就是俗稱的砒霜,口服10mg即可中毒,100mg即可致死。由于組方中含有雄黃，而藥典方法受環(huán)境與人員操作影響較大，難以得到滿意的觀察結果，為了更好地控制三氧化二砷的限度，采用原子熒光定量方法進行含量的測定[3]。

3 探索性研究及其檢驗結果分析

儀器：原子熒光光度計 AFS-933 北京吉天儀器有限公司。

測量條件：元素：As， 光電倍增管負高壓（V）：270，原子化器高度（mm）：8。

燈電流（mA）：60，載氣流量（ml/min）：400，屏蔽氣流量（ml/min）：800。

試劑：硝酸、鹽酸均為優(yōu)級純，水為去離子水，硫脲為分析純。

標準物質(zhì)：砷單元素標準溶液1000μg/ml GBW08611 11115 由中國計量科學研究院提供。

實驗前玻璃和塑料器械的處理：使用前先用1∶1HNO3和1∶1HCl交替浸泡12h，再用去離子水浸泡2h，最后用去離子水沖洗干凈后，晾干待用。

操作方法：標準曲線制備：取砷單元素標準溶液1000μg/ml，精密吸取1ml用5mol/鹽酸稀釋至100ml量瓶中，再精密吸取1ml用5mol/鹽酸稀釋至100ml量瓶中。精密吸取1ml、2ml、4ml、8ml、10ml分別至100ml量瓶中,分別加10%硫脲10ml，再用5mol/L鹽酸稀釋至刻度，制成1、2、4、8、10ng/mL的標準溶液，至60℃-70℃水浴上加熱30min后，放冷至室溫，用原子熒光光度計測定標準曲線。見圖1。

圖1 線性關系

相關系數(shù)：0.9999 曲線方程：I=112.3922×C-5.2246

供試品制備：精密稱取牛黃解毒片0.2g，于50ml離心管中，精密加入50%甲醇25ml，于37℃水浴中浸提24h后，超聲提取20min，置離心機中離心（3000r/min）10min，精密吸取上清液5ml，置蒸發(fā)皿中，于60℃水浴上，揮去甲醇，用5mol/鹽酸定容至50ml量瓶中。精密吸取1ml置200ml量瓶中，加10%硫脲10ml，再用5mol/鹽酸稀釋至刻度，至60℃-70℃水浴上加熱30min后，放冷至室溫，用原子熒光光度計測定。本實驗共測定8批樣品，砷的含量分別為0.261mg/g、0.299mg/g、0.044mg/g、0.242mg/g、0.175mg/g、0.304mg/g、0mg/g、0.164mg/g。

在《中國藥典》2015年版一部牛黃解毒片中，關于砷的測定方面只做了可溶性砷（三氧化二砷）的限量檢查，采用古蔡氏法判斷砷斑，精密度不高重復性差，難以做到準確測定[4-6]。已有的研究以側重于牛黃解毒片中砷含量測定方法的研究為多，但對砷測定的前處理方法的影響因素考察較小，本文采用原子熒光光度法測定砷含量，為牛黃解毒片的質(zhì)量控制和安全性評價提供科學依據(jù)[7,8]。