林祥娜 王光強(qiáng) 楊昳津 熊智強(qiáng) 艾連中 夏永軍

（上海理工大學(xué)醫(yī)療器械與食品學(xué)院 上海食品微生物工程技術(shù)研究中心 上海200093）

氧化應(yīng)激是當(dāng)機(jī)體產(chǎn)生的活性氧（reactive oxygen species，ROS）和體內(nèi)的抗氧化防御系統(tǒng)不平衡時(shí)導(dǎo)致的[1-2]。當(dāng)活性氧的含量積累過(guò)多，超過(guò)內(nèi)源性的清除劑的中和能力后，機(jī)體內(nèi)的蛋白質(zhì)、核酸、細(xì)胞等易受到氧化損傷，從而會(huì)引起多種與氧化應(yīng)激相關(guān)的疾病，例如炎癥、癌癥、帕金森、阿茲海默和動(dòng)脈粥樣硬化等疾病[3-8]?？商砑硬煌愋偷目寡趸瘎┤p輕或者阻止胞內(nèi)氧化損傷，從而幫助機(jī)體減輕氧化損傷[9]。盡管目前一些合成的抗氧化劑如叔丁基羥基茴香醚 （Butylated Hydroxyanisole，BHA）、2，6-二叔丁基對(duì)甲酚（Butylated Hydroxytoluene，BHT）等廣泛地用于阻滯脂質(zhì)過(guò)氧化，但是損傷肝臟導(dǎo)致它們的安全性受到質(zhì)疑。目前從自然界中開發(fā)天然、安全、可代替合成抗氧化劑的天然抗氧化劑受到極大的關(guān)注。

乳酸菌（Lactic Acid Bateria，LAB）是一類可發(fā)酵糖水化合物產(chǎn)生乳酸的革蘭氏陽(yáng)性菌的統(tǒng)稱。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外不少報(bào)道稱乳酸菌具有抗氧化作用，Kullisaar 等[7]研究發(fā)現(xiàn)具有抗氧化活性的菌株發(fā)酵乳桿菌 （Lactobacillus fermentum）E-3 和E-8 在一定濃度的過(guò)氧化氫中存活時(shí)間較長(zhǎng)；Li等[9]研究發(fā)現(xiàn)植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum）C88 有較高的清除羥基自由基和DPPH 自由基的能力，清除率分別為44.31%和53.05%；Kuda 等[10]研究發(fā)現(xiàn)乳酸乳球菌（Lactococcus lactis）S-SU2 有較高的對(duì)超氧根離子的清除能力，且植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum）S-SU1 的滅活菌體對(duì)3 mmol/L H2O2損傷的釀酒酵母細(xì)胞有保護(hù)作用。關(guān)于乳酸菌的抗氧化研究雖然很多，但是對(duì)其抗氧化成分及其抗氧化機(jī)制并沒有系統(tǒng)的闡述。

前期研究表明，短乳桿菌AR247 具有較好的抗氧化活性，其菌體對(duì)DPPH 和O2-·的清除力分別為（48.95±0.17）%和（26.85±0.05）%，且其能抗脂質(zhì)過(guò)氧化，對(duì)酵母細(xì)胞具有一定的保護(hù)作用[11]。本文研究了具有抗氧化活性的短乳桿菌AR247不同組分的抗氧化能力，并進(jìn)一步研究了短乳桿菌AR247 對(duì)D-gal 致衰老的氧化小鼠的保護(hù)作用，測(cè)定其血清、肝臟和腦組織中的過(guò)氧化氫酶（catalase，CAT）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）活力和谷胱甘肽（glutathione，GSH）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）的含量，同時(shí)測(cè)定小鼠血清中的白介素2 （interleukin 2，IL-2）、腫瘤壞死因子α（tumour necrosis factor，TNFα）含量，以期為開發(fā)具有抗氧化性的功能性食品提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

上海理工大學(xué)食品生物技術(shù)研究所分離保藏的短乳桿菌AR247（CGMCC 12786）。

菌株活化培養(yǎng)基、發(fā)酵培養(yǎng)基：液體MRS 培養(yǎng)基，按文獻(xiàn)配制[12]。

固體MRS 培養(yǎng)基：液體MRS 培養(yǎng)基加1.5%的瓊脂粉。

正己烷、正丁醇、乙酸乙酯：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。D-半乳糖、LiCl：上海生物工程有限公司。胃蛋白酶、胰酶：上海源葉生物科技有限公司。

ICR 小鼠：雄性，體質(zhì)量（20±2）g，SPF 級(jí)，購(gòu)于上海杰思捷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司。

過(guò)氧化氫酶 （CAT）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶 （SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）、白介素2（IL-2）、腫瘤壞死因子（TNF-α）試劑盒：南京建成生物工程研究所。

1.2 儀器與設(shè)備

3-18 K 型離心機(jī)，德國(guó)sigma 公司；分光光度計(jì)，上海美譜達(dá)儀器有限公司；恒溫培養(yǎng)箱，上海一恒；厭氧培養(yǎng)箱，英國(guó)Ruskin 公司；恒溫水浴鍋，上海一恒；超凈工作臺(tái)，蘇州凈化；酶標(biāo)儀，奧地利Molecular Devices。

1.3 方法

1.3.1 菌株的活化以及無(wú)細(xì)胞提取物和完整細(xì)胞菌體的制備 將凍藏在-80 ℃的短乳桿菌AR247傳代3 次，以1%的接種量接種于100 mL 培養(yǎng)基中，37 ℃培養(yǎng)18 h 后，在4 ℃、6 000 r/min 的條件下離心10 min，分離得到無(wú)細(xì)胞提取物，-20 ℃放置備用；將菌體用無(wú)菌PBS 洗滌3 次后重懸于PBS 中，調(diào)整菌體濃度為1.0×109CFU/mL，此即完整菌體細(xì)胞。

1.3.2 萃取樣品的制備 將得到的無(wú)細(xì)胞提取物置于分液漏斗中，采用極性依次增大的有機(jī)溶劑正己烷、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取，每次萃取到有機(jī)相無(wú)明顯顏色為止。分別得到正己烷相、乙酸乙酯相、正丁醇相、水相，如圖1。

圖1 無(wú)細(xì)胞提取物的連續(xù)萃取Fig.1 Continuous extraction of cell free extracts

1.3.3 菌體部分的處理 根據(jù)Li[9]的研究，稍有改動(dòng)。將上述得到的完整菌體細(xì)胞分成6 組，其處理如下：在第1 組菌體中加入200 μL 20 mg/mL 的溶菌酶37 ℃處理30 min，隨后在冰浴條件下進(jìn)行超聲波破碎，破碎參數(shù)如下：超聲5 s，停歇5 s，功率40%，超聲工作時(shí)間10 min。超聲結(jié)束后在4℃，6 000 r/min 離心10 min，取上清，即為胞內(nèi)物質(zhì)，沉淀加無(wú)菌水至原來(lái)體積；第2 組加入0.5 mg/mL 的胰酶；第3 組加入0.5 mg/mL 的蛋白酶K；第4 組加入5 mol/L 的氯化鋰；第5 組加入10 g/L 的偏高碘酸鈉；第6 組不處理，做空白對(duì)照。將2，3，4，5，6 組放置在37 ℃下培養(yǎng)30 min，隨后在4 ℃，6 000 r/min 離心10 min，取上清，沉淀加無(wú)菌水至原來(lái)體積，備用。

1.3.4 DPPH 清除能力的測(cè)定 據(jù)文獻(xiàn)[12]，稍有改動(dòng)。取不同樣品各2 mL，加入濃度為0.2 mmol/L的DPPH 無(wú)水乙醇溶液1 mL，混勻后置于室溫下避光反應(yīng)30 min，然后在6 000 r/min 下離心10 min，取上清液在517 nm 下測(cè)定吸光度Ai，平行測(cè)定3 次，取平均值?？瞻捉M以等體積無(wú)水乙醇代替DPPH 溶液，測(cè)得吸光度（Aj）；對(duì)照組以等體積蒸餾水代替樣品溶液，測(cè)得吸光度（A0）；并以等體積蒸餾水和無(wú)水乙醇混合液空白調(diào)零。

1.3.5 試驗(yàn)動(dòng)物及分組 將40 只小鼠飼養(yǎng)于動(dòng)物房，12 h 光照/12 h 黑暗，相對(duì)濕度40%～60%，室溫（23±2）℃，自由進(jìn)食和飲水，適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，分組，每組10 只，即：（1）正常組；（2）模型組；（3）陽(yáng)性對(duì)照組；（4）短乳桿菌AR247 組。正常組小鼠皮下注射生理鹽水，其它組小鼠皮下注射濃度為150 mg/kg 體重/天的D-半乳糖，注射6周。6 周后開始灌胃，陽(yáng)性對(duì)照組灌胃10 mL/kg 體重濃度為1 mmol/L 的VC。短乳桿菌AR247 組灌胃10 mL/kg 體重的濃度為1.0×109CFU/mL 的短乳桿菌AR247，正常組和模型組灌胃等量的生理鹽水，連續(xù)灌胃6 周。

1.3.6 小鼠試驗(yàn)樣本的采集 最后一次給藥12 h 后，稱重，取眼球取血，引頸處死小鼠，迅速取肝和腦用生理鹽水沖洗干凈，濾紙吸去水分后，稱量，器官指數(shù)為器官質(zhì)量與體重的比值。血液于4℃、3 000 r/min 離心10 min，收集血清，用于血清生化指標(biāo)的測(cè)定。器官用預(yù)冷PBS 制成10%的組織勻漿，于4 ℃、3 000 r/min 離心10 min 后取上清，用于組織生化指標(biāo)的測(cè)定。

1.3.7 血清和組織中的抗氧化酶活力的測(cè)定 血清、肝、腦組織勻漿的CAT、SOD、GSH-Px 活力和MDA 及GSH 含量測(cè)定按照試劑盒說(shuō)明書的方法進(jìn)行。血清里的IL-2 和TNF-α 按照試劑盒說(shuō)明書的方法進(jìn)行測(cè)定。

1.4 數(shù)據(jù)處理

所有數(shù)據(jù)均用 “平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”（mean±SD）表示，采用SPSS 22.0 數(shù)據(jù)分析軟件進(jìn)行顯著性差異分析，采用LSD 最小顯著性差異法分析其差異性，P＞0.05 無(wú)顯著性差異，P＜0.05 有顯著性差異，P＜0.01 有極顯著差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 連續(xù)萃取的無(wú)細(xì)胞提取物對(duì)DPPH 自由基的清除能力

二苯基苦基苯肼（DPPH）自由基是一種常見的評(píng)價(jià)抗氧化效果的測(cè)定方法[13]。DPPH 是一種穩(wěn)定的自由基，其乙醇溶液呈紫色，加入抗氧化物質(zhì)后，其在517 nm 處有較強(qiáng)吸收，可通過(guò)這一變化評(píng)價(jià)物質(zhì)的抗氧化能力。

由表1可以看到，把短乳桿菌AR247 的無(wú)細(xì)胞提取物按極性依次增大的有機(jī)溶劑正己烷、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取，每次萃取到有機(jī)相無(wú)明顯顏色為止，分別得到正己烷相、乙酸乙酯相和正丁醇相，以及最后剩余的水相，經(jīng)過(guò)逐級(jí)連續(xù)萃取，DPPH 自由基清除率最高的為水相，清除率為90.82%±1.21%，較空白MRS 明顯提高，極性最小的正己烷相的清除率最小，僅為2.7%±0.6%，乙酸乙酯相的清除率高于正丁醇相推測(cè)是無(wú)細(xì)胞提取物中的抗氧化物質(zhì)被乙酸乙酯萃取出來(lái)，故下一級(jí)的正丁醇相清除率較低，但萃取完成后的水相清除率仍較高，這表示無(wú)細(xì)胞提取物中的抗氧化成分多在水溶液中。

表1 連續(xù)萃取的無(wú)細(xì)胞提取物對(duì)DPPH 自由基的清除能力Table 1 DPPH radical scavenging activity of continuous extraction of cell free extracts

2.2 菌體不同處理方法對(duì)DPPH 自由基的清除率

有文獻(xiàn)報(bào)道，益生菌中的抗氧化酶如超氧化物歧化酶（SOD）、含錳假性過(guò)氧化氫酶（Mn-Kat）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GP）以及硫氧還蛋白還原酶（TrxR）具有清除活性氧（ROS）和自由基作用[15]。對(duì)短乳桿菌AR247 的菌體進(jìn)行不同的處理分析，結(jié)果如表2所示，不同菌體成分的DPPH 清除率能力不同，其中第6 組作為不加處理的完整細(xì)胞懸液來(lái)作為對(duì)照組。第1 組對(duì)菌體進(jìn)行了破壁處理，使細(xì)胞內(nèi)容物溶出，其清除率高達(dá)85.70% ±1.70%，與空白相比明顯提高，說(shuō)明其內(nèi)容物抗氧化能力較強(qiáng)；第2 組用胰酶處理了菌體表面的蛋白，使細(xì)胞的粘附性變差，其清除率為47.22%±1.23%，與對(duì)照組相比其清除率并無(wú)顯著性差異；第3 組用蛋白酶K 處理菌體后，其表面蛋白質(zhì)被降解，其菌體清除率與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異，但上清中蛋白質(zhì)降解產(chǎn)物的清除率提高至35.30%±0.80%；第4 組用LiCl 處理菌體，將菌體表面的S 層蛋白去除后，清除率降至25.79% ±0.88%，S 層蛋白的清除率為8.70%±1.21%。說(shuō)明表面的S 層蛋白并非是主要抗氧化組分。第5 組用具有強(qiáng)氧化的偏高碘酸鈉處理菌體表面，加入偏高碘酸鈉后，表面的多糖被氧化，其清除率為43.98%±0.67%，與對(duì)照組并沒有顯著性差異，證明其表面多糖并不是主要的抗氧化成分。綜上，短乳桿菌AR247 的胞內(nèi)成分以及菌體表面的莢蛋白具有一定的抗氧化性，且發(fā)現(xiàn)短乳桿菌AR247胞內(nèi)物質(zhì)的清除DPPH 自由基能力最強(qiáng)，這與之前的文獻(xiàn)報(bào)道相吻合。

2.3 短乳酸菌AR247 對(duì)小鼠體重和器官指數(shù)的影響

在一定時(shí)間內(nèi)，連續(xù)給動(dòng)物注射D-半乳糖，使動(dòng)物機(jī)體內(nèi)半乳糖濃度增高，使其在醛糖還原酶的催化下還原成半乳糖醇，后者不能進(jìn)一步代謝而堆積在細(xì)胞內(nèi)，影響正常滲透壓，導(dǎo)致細(xì)胞腫脹和功能障礙，最終引起衰老[16]。這與正常衰老的過(guò)程較為相似，是衰老研究中常用的一種模型，構(gòu)建簡(jiǎn)單，且成功率高[17-18]。

表2 菌體不同處理方法對(duì)DPPH 自由基的清除率（%）Table 2 DPPH radical scavenging activity of different treatment on intact bacteria （%）

試驗(yàn)期間各組小鼠均自由飲食、飲水，正常組小鼠生長(zhǎng)狀況良好，模型組小鼠出現(xiàn)掉毛，毛發(fā)失去光澤，反應(yīng)遲鈍，所有小鼠未發(fā)生意外損傷和死亡。由表3可發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)結(jié)束后，模型組小鼠體重較正常組顯著下降，灌胃VC 和短乳桿菌AR247后，體重恢復(fù)至正常水平；模型組的肝臟和腦指數(shù)與正常組相比均顯著下降，其中灌胃短乳桿菌AR247 后，腦指數(shù)恢復(fù)至正常水平。

表3 短乳桿菌AR247 對(duì)衰老小鼠體重和器官指數(shù)的影響（±s，n=10）Table 3 Effect of L.brevis AR247 on weight and organ index in D-galactose induced aging mice （±s，n=10）

表3 短乳桿菌AR247 對(duì)衰老小鼠體重和器官指數(shù)的影響（±s，n=10）Table 3 Effect of L.brevis AR247 on weight and organ index in D-galactose induced aging mice （±s，n=10）

注：* 表示與模型組相比有顯著性差異，P＜0.05。

?分組 試驗(yàn)前體重/g 試驗(yàn)結(jié)束時(shí)體重/g 腦指數(shù)/% 肝指數(shù)/%正常組 28.14±0.90 38.43±2.15* 1.42±0.06* 4.41±0.25*模型組 28.56±1.46 35.83±1.79 1.24±0.13 3.35±0.16陽(yáng)性對(duì)照組 28.00±1.53 38.17±3.20* 1.30±0.04 4.31±0.57*短乳桿菌AR247 組 27.83±1.47 38.61±1.66* 1.45±0.07* 3.59±0.16

2.4 短乳桿菌AR247 對(duì)小鼠MDA 含量的影響

在正常情況下，自由基的生成和清除處于一個(gè)動(dòng)態(tài)平衡的狀態(tài)，機(jī)體有一套防御體系，包括非酶系統(tǒng)如谷胱甘肽、VC、硒等，酶防御系統(tǒng)如超氧化物歧化酶、過(guò)氧化氫酶和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶等，抵抗自由基的攻擊[4，19-21]。當(dāng)機(jī)體內(nèi)自由基超過(guò)機(jī)體清除能力時(shí)，可導(dǎo)致脂質(zhì)過(guò)氧化，MDA 是脂質(zhì)過(guò)氧化的副產(chǎn)物之一，其含量，表征了細(xì)胞和器官的氧化應(yīng)激水平[14，22-24]。

MDA 是脂質(zhì)過(guò)氧化的產(chǎn)物之一，其含量表征了細(xì)胞和器官的氧化應(yīng)激水平[14]。由圖2可以看到，模型組的肝臟和腦中的MDA 含量顯著高于正常組，分別為10.77 ± 1.22 和4.33 ± 1.32，衰老模型構(gòu)建成功。灌胃VC 和短乳桿菌AR247 后，肝臟中MDA 含量顯著降低，分別降低至正常組的82.38%和66.13%；短乳桿菌AR247 處理后，腦中的MDA 含量恢復(fù)至正常水平。說(shuō)明短乳桿菌AR247 可緩解小鼠肝臟和腦的氧化應(yīng)激。

圖2 短乳桿菌AR247 對(duì)衰老小鼠的丙二醛含量的影響（±s，n=10）Fig.2 Effect of L.brevis AR247 on MDA in D-galactose induced aging mice （±s，n=10）

2.5 短乳桿菌AR247 對(duì)小鼠血清中的抗氧化水平的影響

SOD、CAT 和GSH-Px 是機(jī)體中非常重要的抗氧化酶，可清除體內(nèi)自由基和活性氧，以及減少過(guò)氧化脂質(zhì)的形成[25-27]。

表4 短乳桿菌AR247 對(duì)小鼠血清中的抗氧化水平的影響（±s，n=10）Table 4 Effect of L.Brevi s AR247 on antioxidant status in serum （±s，n=10）

表4 短乳桿菌AR247 對(duì)小鼠血清中的抗氧化水平的影響（±s，n=10）Table 4 Effect of L.Brevi s AR247 on antioxidant status in serum （±s，n=10）

注：* 表示與模型組相比有顯著性差異，P＜0.05。

?分組 SOD/U·mL-1 GSH-Px/U·mL-1 CAT/U·mL-1 GSH/mg·L-1正常組 24.56±0.52* 180.73±5.90* 5.24±2.72* 58.04±11.48*模型組 23.71±0.64 155.50±9.52 0 5.10±0.04陽(yáng)性對(duì)照組 22.85±0.56 169.68±3.27* 5.57±1.00* 14.54±4.02短乳桿菌AR247 組 23.12±0.49 168.76±1.62* 1.77±0.70 7.99±2.60

由表4可見，灌胃短乳桿菌AR247 后，血清中的GSH-Px 活力與模型組對(duì)照，顯著提高（P＜0.05），提高至正常組的93.99%，CAT 活性和GSH含量雖有增加，但未有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；灌胃VC 后，其GSH-Px 和CAT 顯著高于模型組（P＜0.05），GSH 含量雖有增加，但未有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；所有組中的SOD 的活性除正常組明顯高于模型組（P＜0.05）外，灌胃VC 和短乳桿菌AR247并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。

2.6 短乳桿菌AR247 對(duì)小鼠肝臟中的抗氧化水平的影響

如表5所示，與模型組相比，灌胃短乳桿菌AR247 后，其肝臟中的SOD、GSH-Px 活性以及GSH 含量均有顯著性提高（P＜0.05），分別提高至正常組的68.29%，132.86%和77.94%，且高于陽(yáng)性對(duì)照組；CAT 的活性較模型組有提高，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。

表5 短乳桿菌AR247 對(duì)小鼠肝臟中的抗氧化水平的影響（±s，n=10）Table 5 Effect of L.brevis AR247 on antioxidant status in liver （±s，n=10）

表5 短乳桿菌AR247 對(duì)小鼠肝臟中的抗氧化水平的影響（±s，n=10）Table 5 Effect of L.brevis AR247 on antioxidant status in liver （±s，n=10）

注：* 表示與模型組相比有顯著性差異，P＜0.05。

?分組 SOD/U·mg-1 蛋白 GSH-Px/U·mg-1 蛋白 CAT/U·mg-1 蛋白 GSH/mg·mg-1 蛋白正常組 158.40±7.78* 1 342.42±219.61* 264.72±42.62* 198.16±10.85*模型組 53.82±5.01 350.00±108.34 56.90±13.70 124.39±11.50陽(yáng)性對(duì)照組 82.87±13.40* 1 527.33±70.91* 74.57±10.56 135.95±88.33短乳桿菌AR247 組 108.17±6.33* 1 783.22±122.11* 61.29±16.20 154.44±6.37*

2.7 短乳桿菌AR247 對(duì)小鼠腦中的抗氧化水平的影響

由表6可見，與模型組相比，灌胃短乳桿菌AR247 后，其腦中的SOD 活性和GSH 含量均有顯著性提高（P＜0.05），且恢復(fù)至正常水平；GSHPx 和CAT 的活性較模型組稍有提高，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。陽(yáng)性對(duì)照對(duì)腦的氧化損傷也未見顯著改善。

表6 短乳桿菌AR247 對(duì)小鼠腦中的抗氧化水平的影響（±s，n=10）Table 6 Effect of L.brevis AR247 on antioxidant status in brain （±s，n=10）

表6 短乳桿菌AR247 對(duì)小鼠腦中的抗氧化水平的影響（±s，n=10）Table 6 Effect of L.brevis AR247 on antioxidant status in brain （±s，n=10）

注：* 表示與模型組相比有顯著性差異，P＜0.05。

分組 SOD/U·mg-1 蛋白 GSH-Px/U·mg-1 蛋白 CAT/U·mg-1 蛋白 GSH/mg·mg-1 蛋白正常組 17.96±3.82 23.60±2.96* 66.88±1.70* 75.40±5.12*模型組 12.96±0.38 8.32±2.53 34.52±1.85 38.02±2.90陽(yáng)性對(duì)照組 16.14±2.58 14.22±4.38 78.99±12.54* 47.50±5.65*短乳桿菌AR247 組 20.13±2.34* 12.39±1.79 46.99±25.64 70.11±3.74*?

2.8 短乳桿菌AR247 對(duì)小鼠免疫水平的影響

細(xì)胞因子IL-2 和TNF-α 是兩個(gè)重要的介導(dǎo)免疫反應(yīng)的細(xì)胞因子。IL-2 具有很多的免疫增強(qiáng)作用，如促進(jìn)T、B 細(xì)胞、NK 細(xì)胞和單核細(xì)胞的增殖，增強(qiáng)T 細(xì)胞、NK 細(xì)胞的細(xì)胞毒性。TNF-α 是一種具有抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)活性的細(xì)胞因子，被認(rèn)為是一種重要的宿主防御腫瘤的細(xì)胞因子[28]。如圖3所示，與模型組相比，短乳桿菌AR247 可以顯著提高IL-2 的含量（P＜0.05），提高至正常組的104.50%，優(yōu)于VC；但其TNF-α 與模型組沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），而VC 組恢復(fù)TNF-α 至正常水平。

圖3 短乳桿菌AR247 對(duì)小鼠免疫的影響（±s，n=10）Fig.3 Effect of L.brevis AR247 on immune function （±s，n=10）

3 結(jié)論

研究指出，自由基是機(jī)體的正常代謝產(chǎn)物，在平衡狀態(tài)下對(duì)機(jī)體沒有損傷，但平衡打破后，自由基便會(huì)產(chǎn)生破壞作用，引起疾病。

本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)已知具有抗氧化活性的短乳桿菌AR247 的無(wú)細(xì)胞提取物、菌體表面成分和胞內(nèi)組分進(jìn)行分析，得到了其胞外的抗氧化成分多在水溶液中，同時(shí)胞內(nèi)的抗氧化能力也很高的結(jié)論，但具體成分仍需要進(jìn)一步試驗(yàn)證明。

本文進(jìn)一步研究了短乳桿菌AR247 對(duì)D-半乳糖誘導(dǎo)的早衰小鼠的保護(hù)作用，結(jié)果表明，短乳桿菌AR247 能夠顯著提高衰老小鼠體重和腦指數(shù)，提高血清、腦組織和肝組織的SOD 活性、GSH-PX 活性、CAT 活性，降低MDA 含量，其中肝臟中MDA 含量降至正常組的66.13%，表明短乳桿菌AR247 可延緩衰老小鼠機(jī)體器官退化，可清除機(jī)體內(nèi)的自由基和活性氧，以及提高抗氧化酶活力，且可提高機(jī)體的免疫水平。綜上所述，短乳桿菌AR247 具有抗氧化性和抗衰老作用，其機(jī)制可能與改善機(jī)體的抗氧化功能和增強(qiáng)免疫功能有關(guān)。本試驗(yàn)對(duì)短乳桿菌AR247 抗衰老作用的研究，為深入探討其抗衰老機(jī)理提供理論基礎(chǔ)和試驗(yàn)依據(jù)，為進(jìn)一步開發(fā)延緩衰老的功能性食品提高依據(jù)。