周 航 李同林 宮 帥

(中航工業(yè)三六三醫(yī)院，成都 610000)

急性肺損傷是由感染、創(chuàng)傷、中毒等原因引發(fā)的呼吸系統(tǒng)急癥，發(fā)病急，以嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)、肺泡毛細(xì)血管屏障受損引起的肺水腫為病理特征，如未給予及時(shí)有效治療，可發(fā)展為急性呼吸窘迫綜合征，死亡率較高[1-3]。對(duì)于急性肺損傷主要是藥物治療和機(jī)械通氣，臨床常用藥物有烏司他丁、氨溴索、吸入性一氧化氮或肺表面活性物質(zhì)等[4-7]，均可在短期內(nèi)改善患者臨床癥狀，但無法改善患者生存率，而糖皮質(zhì)激素的遠(yuǎn)期應(yīng)用不良反應(yīng)較大[8]，也不能改善患者生存率，目前尚缺乏有效的治療方法，因此學(xué)者們一直致力于尋找更有效的治療方案。

利拉魯肽是一種人胰高糖素樣肽1類似物，與人胰高糖素樣肽1具有97%的序列同源性，可結(jié)合并激活人胰高糖素樣肽1受體，而人胰高糖素樣肽1受體廣泛分布于胰腺、大腦、肺、腎臟、胃、心臟等組織。以往研究已證實(shí)[9-11]，人胰高糖素樣肽1可促進(jìn)胰島素的分泌和生物合成，促進(jìn)胰腺β細(xì)胞增殖，增加生長(zhǎng)抑素釋放，抑制胰高血糖素分泌；可誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞分化，保護(hù)海馬神經(jīng)元；改善心肌功能，抑制心肌細(xì)胞凋亡。王杰等[12]通過脂多糖誘導(dǎo)的小鼠肺泡上皮MLE-12細(xì)胞損傷模型發(fā)現(xiàn)，人胰高糖素樣肽1類似物利拉魯肽對(duì)損傷Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞具有保護(hù)作用。谷萍姣等[13]通過脂多糖誘導(dǎo)的動(dòng)物急性肺損傷模型發(fā)現(xiàn)，利拉魯肽可通過改善小鼠生理功能、肺組織病理損傷程度、減輕肺水腫、減少肺組織中性粒細(xì)胞聚集來發(fā)揮肺保護(hù)作用。間充質(zhì)干細(xì)胞可調(diào)節(jié)機(jī)體免疫反應(yīng)，促進(jìn)受損組織修復(fù)，為治療急性肺損傷提供了新的思路。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示，間充質(zhì)干細(xì)胞可減輕細(xì)菌性肺炎和缺血再灌注誘導(dǎo)的肺損傷，促進(jìn)呼吸機(jī)相關(guān)肺損傷的修復(fù)。基于以上研究，實(shí)驗(yàn)假設(shè)利拉魯肽聯(lián)合間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療急性肺損傷可獲得更佳的治療效果，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1試劑與儀器 利拉魯肽(204656-20-2)購自，蘇州天馬醫(yī)藥集團(tuán)天吉生物制藥有限公司；胎牛血清(SV30087)、DMEM/F12培養(yǎng)液(SH30021.01B)購自北京美同達(dá)科技有限公司；Percoll 細(xì)胞分離液購自南京森貝伽生物科技有限公司；成軟骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基(M026)、成骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基(M025)購自武漢維諾賽生物技術(shù)有限公司；戊巴比妥鈉(57-33-0)購自北京嵐泰化工科技有限公司；脂多糖購自上海昂一生物科技有限公司；ELISA檢測(cè)試劑盒(MM-0240O1，MM-0163M1，MM-0047R1)購自武漢益普生物科技有限公司；Tunel試劑盒(C1088)購自碧云天；熒光顯微鏡(VMF400I)購自蘇州景通儀器有限公司；兔抗鼠單克隆抗體甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子1(SPT24)購自廣州歐邊生物制品有限公司。

1.1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 10周齡雄性BALB/c小鼠55只，由西南醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(川)2018-17，使用許可證號(hào)：SCXK(川)2018-065。SPF級(jí)，體重(25±3)g，其中5只用于分離培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，其余50只用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處理符合倫理審查指南 GB/T35892-201。實(shí)驗(yàn)中對(duì)動(dòng)物的處理遵循動(dòng)物倫理學(xué)要求，最大程度地減輕其疼痛。

1.2方法

1.2.1骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)與鑒定 細(xì)胞的培養(yǎng)：取BALB/c小鼠，稱質(zhì)量，以戊巴比妥鈉30 mg/kg 腹腔注射麻醉后處死，將其置于乙醇中浸泡5 min，無菌條件下取四肢骨，放入含有PBS的培養(yǎng)皿中，小心剔除肌肉、脂肪與結(jié)締組織，置于含10%胎牛血清、100 U/ml青霉素與0.1 g/L鏈霉素的DMEM/F12培養(yǎng)液中，去除兩端骨，以培養(yǎng)液反復(fù)沖洗骨髓腔至骨發(fā)白；將收集的骨髓液制成單細(xì)胞懸液，加入1.073 g/L的Percoll 細(xì)胞分離液，2 000 r/min 離心30 min，吸取中間云霧狀細(xì)胞層，以PBS洗滌2 次，調(diào)整細(xì)胞濃度為5×108L-1。3 d 后首次換液，以后每2 d或3 d換液1 次，8～12 d 時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)融合達(dá)80%以上，此時(shí)以胰蛋白酶消化貼壁細(xì)胞，按1∶2 比例傳代培養(yǎng)，每2 d或3 d換液1 次。選擇第3代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

細(xì)胞的鑒定：①取第3代細(xì)胞，加入成骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基，誘導(dǎo)21 d后進(jìn)行茜素紅染色，觀察向成骨細(xì)胞的分化；②取第3代細(xì)胞，加入成軟骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基，誘導(dǎo)14 d后進(jìn)行甲苯胺藍(lán)染色，觀察向軟骨細(xì)胞的分化。③取第3代細(xì)胞，應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)志物CD29、CD34、CD45、CD90、CD147的表達(dá)。

1.2.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組與干預(yù) 將50只BALB/c小鼠隨機(jī)分為5組，分別為正常組、模型組、細(xì)胞組、藥物組與實(shí)驗(yàn)組，每組10只。正常組不進(jìn)行任何處理，其余4組均建立急性肺損傷模型，造模前禁食12 h、禁水4 h。

建立急性肺損傷模型：取模型組、細(xì)胞組、藥物組與實(shí)驗(yàn)組小鼠，腹腔注射30 mg/kg戊巴比妥鈉進(jìn)行麻醉。麻醉成功后，將小鼠四肢及上顎固定于傾斜臺(tái)面上，使頭部處于較高位置，去除頸部毛發(fā)，消毒、鋪巾，在頸部皮膚作一0.3 cm的切口，逐層剝離組織，顯露氣管，行氣管穿刺，按5 mg/kg緩慢注射脂多糖溶液，推注后短暫封閉氣管插管5～10 s，使脂多糖均勻分布于全肺中。以肺組織病理：肺泡塌陷出血，肺泡間隔增厚，大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)判定造模成功。造模后，細(xì)胞組尾靜脈注射骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞懸液1 ml(約含細(xì)胞數(shù)4×106)；藥物組腹腔注射100 μg/kg利拉魯肽[13]；實(shí)驗(yàn)組尾靜脈注射骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞懸液1 ml(約含細(xì)胞數(shù)4×106)，腹腔注射100 μg/kg利拉魯肽。正常組尾靜脈注射1 ml生理鹽水。

1.2.3檢測(cè)指標(biāo) 脂多糖注射24 h后，麻醉后處死小鼠，取出雙側(cè)肺組織，進(jìn)行以下觀察。

炎性細(xì)胞因子檢測(cè)：剪開小鼠胸腔，結(jié)扎右肺，利用預(yù)冷的PBS灌洗左肺，反復(fù)灌洗3次，收集支氣管肺泡灌洗液。將支氣管肺泡灌洗液于4℃下500 g離心5 min，取上清，-80℃保存，采用ELISA法檢測(cè)炎癥因子腫瘤壞死因子α、IL-1β和IL-6的濃度。嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。

肺組織細(xì)胞凋亡：采用Tunel法檢測(cè)肺組織細(xì)胞凋亡。取左肺組織，10%中性甲醛固定24 h，石蠟包埋、切片，切片厚度約5 μm，脫蠟入水，滴加蛋白酶K，37℃反應(yīng)15 min，PBS清洗3次，每次5 min；滴加100 μl ddH2O稀釋的1×Equilibration Buffer，室溫孵育10～30 min，添加Tunel標(biāo)記反應(yīng)混合液，37℃孵育1 h后滴加轉(zhuǎn)化液50 μl，37℃孵育30 min后PBS清洗，DAB顯色，HE復(fù)染，每個(gè)切片隨機(jī)取5個(gè)視野，熒光顯微鏡下計(jì)數(shù)凋亡細(xì)胞數(shù)，取平均值。

肺組織濕干質(zhì)量比：取右上葉肺組織，稱重量，記為W0，為肺組織濕質(zhì)量；隨后將肺組織置于80℃烤箱中24 h，取出后稱重量，記為W1，計(jì)算二者比值。

肺組織病理觀察：取右下葉肺組織，置于4%甲醛溶液中固定24 h→乙醇梯度脫水→放入石蠟溶液中浸泡2 h中進(jìn)行包埋固定→切片→37℃烤箱內(nèi)烘烤24 h→65℃烤箱中烤片1 h→脫蠟→HE染色→蒸餾水沖洗，乙醇分色→中性樹膠封固，鏡下觀察。由兩位對(duì)實(shí)驗(yàn)不知情的病理科醫(yī)師對(duì)每張肺組織切片進(jìn)行病理評(píng)分，見表1，最后取平均值。

RT-PCR檢測(cè)甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子1基因表達(dá)：取右中葉肺組織2 mg，提取總RNA，進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，獲取得到cDNA；在無菌EP管中加入1 μl cDNA、10 μl SYBR?Green PCR Master Mix、1 μl甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子1引物、8 μl離子水，總反應(yīng)體系為20 μl，置于實(shí)時(shí)定量PCR儀中完成Real time PCR：預(yù)變性95℃10 min、變性95℃15 s、復(fù)性60℃15 s、延伸72℃ 20 s，共進(jìn)行40個(gè)循環(huán)，記錄ΔCT值。甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子1基因引物，正義鏈：5′-GTGCCGGTCCTA-GTCAAAGA-3′，反義鏈：5′-CAGATGGGATAGGCTG-GAGA-3′；β-actin引物，正義鏈：5′-CGAGCGGG-CTACAGCTTC-3′，反義鏈：5′-GTCACGCACGATTCC-CTCT-3′。

表1 肺組織病理評(píng)分

Tab.1 Lung Histopathological Score

ScoreSlice performance0 pointsNormal lung tissue1 pointAlveolar hyperemia and infiltration of pulmonary interstitial polynuclear granulocytes were found in less than 25% of lung tissues2 pointsAlveolar congestion and infiltration of pulmonary interstitial polynuclear granulocytes were found in 25%-50% of lung tissues3 pointsAlveolar congestion and pulmonary interstitial polynuclear granulocyte infiltration in lung tissue4 pointsPulmonary alveolar congestion and pulmonary interstitial polynuclear granulocyte infiltration5 pointsAlveolar congestion and interstitial polynuclear granulocyte infiltration in all lung tissues

Western blot檢測(cè)甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子1蛋白表達(dá)：取右中葉肺組織2 mg，PBS清洗后過篩研磨，提取總蛋白，配制電泳凝膠→配制buffer與蛋白混合樣，加樣→電泳→根據(jù)目的條帶的大小及marker所指示的具體位置問合適大小的PVDF膜，轉(zhuǎn)膜→放入含有封閉液的孵育盆中搖床孵育2 h→孵育一抗(兔抗鼠單克隆抗體甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子1、β-actin)與二抗→發(fā)光顯影。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS22.0軟件進(jìn)行單因素方差分析或雙因素方差分析，兩組間數(shù)據(jù)之間比較則使用Dunnett′t或Sidak′st檢驗(yàn)完成。P<0.05時(shí)認(rèn)為數(shù)據(jù)差異具有顯著性和統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)與鑒定 小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞接種24 h后開始貼壁，單個(gè)散在分布，細(xì)胞呈圓形；48 h后細(xì)胞伸出突起，呈梭形或三角形，4～6 d可見細(xì)胞集落；約14 d細(xì)胞生長(zhǎng)融合達(dá)80%，胰酶消化后傳代培養(yǎng)，傳代后的細(xì)胞呈梭形，分布均勻，增殖較快(圖1A)；成軟骨誘導(dǎo)分化14 d，甲苯胺藍(lán)染色可見大量藍(lán)色基質(zhì)，提示細(xì)胞向軟骨細(xì)胞分化(圖1B)；成骨誘導(dǎo)分化誘導(dǎo)21d后，茜素紅染色可見紅色的鈣化結(jié)節(jié)，提示細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化(圖1C)。流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示，第3代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞高表達(dá)CD90(94.2%)、CD29(93.1%)、CD147(86.3%)表面標(biāo)志物，未表達(dá)CD34、CD45表面標(biāo)志物，見圖2。

2.2肺組織病理觀察結(jié)果 HE染色顯示：正常組肺泡形態(tài)正常，肺泡間隔正常，無炎性水腫與滲出；模型組肺泡塌陷出血，肺泡間隔增厚，大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；細(xì)胞組、藥物組肺部結(jié)構(gòu)破壞程度相較模型組明顯減輕，而細(xì)胞組與藥物組的病理變化差異不明顯；實(shí)驗(yàn)組肺泡結(jié)構(gòu)較藥物組、細(xì)胞組進(jìn)一步改善，僅見少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)(圖3)。

圖1 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)和成骨、成軟骨誘導(dǎo)分化Fig.1 Culture and differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells into osteoblasts and cartilagesNote:A.B3rd generation bone marrow mesenchymal stem cells;B.Chondrogenesis induced differentiation,toluidine blue staining positive; C.Osteoinduction and differentiation,positive for Alizarin red staining.The 3rd generation bone marrow mesenchymal stem cells are spindle-shaped,uniformly distributed and proliferate rapidly,and can be induced to differentiate into chondrocytes and osteoblasts.

圖2 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的表面標(biāo)志物檢測(cè)結(jié)果Fig.2 Detection results of surface markers of bone marrow mesenchymal stem cells

圖3 肺組織病理改變(HE，×200)Fig.3 Pathological changes of lung tissue(HE,×200)

表2 肺組織細(xì)胞凋亡率與濕干質(zhì)量比

Tab.2 Apoptotic rate and wet-dry mass ratio of lung tissue

GroupsApoptotic rate(%)Wet-dry mass ratioNormal4.32±0.123.62±0.18 Model46.37±3.261)4.52±0.131)Cell31.08±3.172)4.21±0.142)Drug33.55±2.782)4.19±0.162)Experiment10.87±2.152)3) 3.98±0.232)3)

Note：Statistical data were obtained from 10 mice in each group.Compared with normal group,1)P<0.05;compared with model group,2)P<0.05;compared with cell group and drug group,3)P<0.05.

正常組、模型組、藥物組、細(xì)胞組與實(shí)驗(yàn)組的病理組織評(píng)分分別為0.18±0.08、4.79±0.15、3.46±0.16、3.49±0.12、2.26±0.15，模型組評(píng)分高于正常組，藥物組、細(xì)胞組與實(shí)驗(yàn)組評(píng)分低于模型組，實(shí)驗(yàn)組評(píng)分低于藥物組、細(xì)胞組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；細(xì)胞組與藥物組之間無差異。

2.3肺組織濕干質(zhì)量比結(jié)果 正常組、模型組、細(xì)胞組、藥物組、實(shí)驗(yàn)組肺組織濕干質(zhì)量比分別為3.62±0.18、4.52±0.13、4.21±0.14、4.19±0.16、3.98±0.23。模型組與正常組比較差異顯著，細(xì)胞組、藥物組、實(shí)驗(yàn)組與模型組比較差異顯著，實(shí)驗(yàn)組與細(xì)胞組、藥物組比較差異顯著(表2)。

2.4肺組織細(xì)胞凋亡結(jié)果 Tunel染色顯示，正常組僅見極少量凋亡細(xì)胞，模型組可見大量凋亡細(xì)胞，藥物組與細(xì)胞組凋亡細(xì)胞數(shù)較模型組明顯減少，細(xì)胞組與藥物組凋亡細(xì)胞差異不明顯，實(shí)驗(yàn)組凋亡細(xì)胞較細(xì)胞組、藥物組進(jìn)一步減少，見圖4和表2。

2.5炎性細(xì)胞因子檢測(cè)結(jié)果 同正常組對(duì)比，模型組TNF-α、IL-1β、IL-6濃度顯著升高(P<0.05)；經(jīng)過骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞或利拉魯肽治療后，細(xì)胞組、藥物組、實(shí)驗(yàn)組TNF-α、IL-1β、IL-6濃度均較模型組顯著降低(P<0.05)，并且實(shí)驗(yàn)組TNF-α、IL-1β、IL-6濃度低于細(xì)胞組、藥物組(P<0.05)，具體數(shù)據(jù)見表3。

圖4 肺組織細(xì)胞凋亡情況(Tunel染色，×200)Fig.4 Apoptosis of lung tissue(Tunel staining,×200)

表3 各組小鼠肺組織支氣管肺泡灌洗液中炎性因子的比較(ng/L)

Tab.3 Comparison of inflammatory factors in broncho-alveolar lavage fluid of lung tissue in mice of each group(ng/L)

GroupsTNF-αIL-1βIL-6Normal17.21±3.1616.23±3.6327.63±6.48Model548.17±41.381)43.28±4.111)466.94±25.781)Cell214.15±36.882)32.09±3.662)325.31±45.252)Drug223.29±40.152)31.21±2.992)338.17±42.192)Experiment152.94±26.552)3)23.09±3.452)3)159.38±36.872)3)

Note：Statistical data were obtained from 10 mice in each group.Compared with normal group,1)P<0.05;compared with model group,2)P<0.05;compared with cell group and drug group,3)P<0.05.

2.6甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子1基因與蛋白表達(dá)結(jié)果 RT-PCR檢測(cè)顯示：模型組甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子1基因表達(dá)低于正常組(P<0.05)，細(xì)胞組、藥物組、實(shí)驗(yàn)組甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子1基因表達(dá)高于模型組，同時(shí)實(shí)驗(yàn)組甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子1基因表達(dá)高于細(xì)胞組與藥物組(P<0.05)，見圖5；Western blot檢測(cè)顯示：模型組甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子1蛋白表達(dá)低于正常組(P<0.05)，細(xì)胞組、藥物組、實(shí)驗(yàn)組甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子1蛋白表達(dá)高于模型組，同時(shí)實(shí)驗(yàn)組甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子1蛋白表達(dá)高于細(xì)胞組與藥物組(P<0.05)，見圖6。

圖5 肺組織甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子1基因表達(dá)Fig.5 Thyroid transcription factor 1 gene expression in lung tissue

圖6 肺組織甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子1蛋白表達(dá)Fig.6 Thyroid transcription factor 1 protein expression in lung tissueNote:Statistical data were obtained from 10 mice in each group.Compared with normal group,*.P PP

3 討論

胰高糖素樣肽1為主要由腸道內(nèi)L細(xì)胞合成和分泌的腸肽類激素，具有調(diào)節(jié)糖脂代謝、細(xì)胞分化和調(diào)控炎癥反應(yīng)等眾多生物活性，已被用于臨床治療2型糖尿病[14-16]，并且動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示其對(duì)急性肺損傷具有保護(hù)作用。因此，實(shí)驗(yàn)通過脂多糖制作的經(jīng)典動(dòng)物急性肺損傷模型，觀察人胰高糖素樣肽1類似物利拉魯肽與間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療急性肺損傷的效果。實(shí)驗(yàn)采用氣管滴注脂多糖建立急性肺損傷模型后，反映肺水腫的肺組織濕干質(zhì)量比明顯高于正常組，提示肺毛細(xì)血管滲漏；肺泡灌洗液中TNF-α、IL-1β、IL-6等炎性因子濃度顯著升高；肺部組織病理切片顯示肺泡結(jié)構(gòu)異常，肺泡間隔增厚，肺間質(zhì)水腫，大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等表現(xiàn)，證實(shí)本研究造模成功。

脂多糖可誘導(dǎo)包括TNF-α、IL-1β和IL-6在內(nèi)的多種促炎性因子的釋放，參與急性肺損傷的發(fā)生與發(fā)展[17-19]。研究證實(shí)[13，20-21]，利拉魯肽與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞均可有效抑制急性肺損傷炎性因子濃度，發(fā)揮肺保護(hù)作用。本研究結(jié)果顯示，經(jīng)利拉魯肽或骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療后，急性肺損傷小鼠的TNF-α、IL-1β和IL-6濃度明顯下降，與以往研究結(jié)果一致；同時(shí)發(fā)現(xiàn)經(jīng)利拉魯肽與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞聯(lián)合治療后，各炎性因子濃度進(jìn)一步降低，提示將二者聯(lián)合應(yīng)用的抗炎作用更明顯。

肺泡毛細(xì)血管屏障功能障礙是急性肺損傷的重要特征性表現(xiàn)，可使用肺組織濕干質(zhì)量比來評(píng)價(jià)肺泡毛細(xì)血管屏障功能[22,23]。本研究顯示造模后，小鼠肺組織濕干質(zhì)量比發(fā)生了較大變化，但是經(jīng)過利拉魯肽或骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療后，肺組織濕干質(zhì)量比明顯降低，同時(shí)二者聯(lián)合治療的降低效果更顯著。同時(shí)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)造模小鼠肺組織的凋亡細(xì)胞數(shù)量明顯增多，但是經(jīng)過利拉魯肽或骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療可抑制肺組織細(xì)胞凋亡，二者聯(lián)合的抑制效果更明顯。進(jìn)一步的病理觀察同樣證實(shí)利拉魯肽或骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可用于治療急性肺損傷，而二者聯(lián)合應(yīng)用的效果優(yōu)于單一治療方案。

盡管研究已證實(shí)利拉魯肽或骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)急性肺損傷具有保護(hù)作用，但其作用機(jī)制仍不是很明確。早在2005年，李海東等[24]利用免疫組化和RT-PCR檢測(cè)內(nèi)毒素誘導(dǎo)急性肺損傷大鼠肺組織中甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子1、肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A的表達(dá)變化，發(fā)現(xiàn)肺組織甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子1表達(dá)明顯降低，可能與急性肺損傷發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子1是一種屬于NKX2.1同源轉(zhuǎn)錄因子家族的細(xì)胞核蛋白，在肺組織中有表達(dá)，在肺的發(fā)育和成熟過程中具有重要作用[25,26]。實(shí)驗(yàn)對(duì)肺組織的甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子1表達(dá)進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果顯示急性肺損傷后，甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子1表達(dá)發(fā)生變化，明顯降低，證實(shí)甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子1參與了急性肺損傷的發(fā)生與發(fā)展；經(jīng)過利拉魯肽或骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療后，肺組織甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子1表達(dá)明顯回升，提示利拉魯肽與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可促進(jìn)肺組織甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子1的轉(zhuǎn)錄與合成。通過肺組織病理證實(shí)，利拉魯肽與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療急性肺損傷均具有較好的效果，二者可通過抑制細(xì)胞凋亡、減輕炎癥反應(yīng)、降低肺水腫程度來發(fā)揮肺保護(hù)作用，并且二者聯(lián)合應(yīng)用具有協(xié)同作用，可更好的發(fā)揮肺保護(hù)作用。

綜上，利拉魯肽聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療急性肺損傷的效果優(yōu)于單一治療方式，并且其肺保護(hù)作用可能與甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子1有關(guān)。后續(xù)研究將進(jìn)一步觀察利拉魯肽與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞調(diào)控甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子1的分子機(jī)制。