胡衛(wèi)紅， 張洪波， 岳道遠(yuǎn)， 張 馳

（華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖北 武漢 430030）

眾所周知，臨床上在應(yīng)對貧血的診斷和治療方面，作為反映紅骨髓造血功能的指標(biāo)——網(wǎng)織紅細(xì)胞（reticulocyte，RET）及相關(guān)參數(shù)發(fā)揮著舉足輕重的作用，在實(shí)際臨床醫(yī)療決策中，必須依據(jù)實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果。健康人RET成分參考值會(huì)因性別、年齡或生活地域的不同而有所差異，因此建立適用于本地區(qū)特定年齡階段的參考區(qū)間非常重要。雖然國內(nèi)有較多關(guān)于RET參考區(qū)間的研究[1-3]，但針對新生兒RET參考區(qū)間的研究尚為空白。本研究對武漢地區(qū)0～3 d新生兒RET及相關(guān)參數(shù)的生物參考區(qū)間進(jìn)行初步調(diào)查，以期對新生兒貧血性疾病的診療提供一定的依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 一般資料

選取2018年6—12月在華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院新生兒科出生時(shí)間≤72 h健康足月新生兒406名，其中男228名、女178名，剖宮產(chǎn)所生276名，順產(chǎn)所生130名，出生時(shí)體質(zhì)量為2 800～3 800 g；樣本均來自武漢地區(qū)，均為漢族人。入選條件為母親孕期產(chǎn)檢正常，產(chǎn)程/剖宮產(chǎn)手術(shù)順利，產(chǎn)婦妊娠期間無血液疾病、感染性疾病、自身免疫系統(tǒng)疾病、風(fēng)濕類疾病、糖尿病、特殊藥物使用史等；妊娠期間胎兒發(fā)育正常，各項(xiàng)檢查指標(biāo)正常，出生時(shí)孕周為37～41周，1～5 min Apgar評分8分以上[4]；新生兒無各種原發(fā)性血液病、感染性疾病、肝腎疾病及腫瘤，且在醫(yī)護(hù)人員指導(dǎo)下合理喂養(yǎng)，排泄正常，體質(zhì)量變化未見明顯異常。

1.2 儀器與試劑

XN-20全自動(dòng)五分類血液分析儀（日本Sysmex公司）及原裝配套試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控物。BD Microtainer彈片式采血針、含乙二胺四乙酸二鉀抗凝劑末梢采血管（美國Becton Dickinson公司）。研究進(jìn)行前嚴(yán)格按中國合格評定國家認(rèn)可委員會(huì)要求對儀器進(jìn)行日常保養(yǎng)、性能評估、校準(zhǔn)、室內(nèi)質(zhì)控及室間質(zhì)評[5]，以保證檢測儀器性能合格、結(jié)果準(zhǔn)確。

1.3 方法

采集0.5 mL新生兒足跟或耳垂等處末梢全血，收集于含乙二胺四乙酸二鉀末梢采血管中，采血方式嚴(yán)格按照《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》的要求進(jìn)行[6]；抗凝全血于室溫保存，2 h內(nèi)完成檢測，檢測項(xiàng)目包括網(wǎng)織紅細(xì)胞比例（the percentage of reticulocyte，RET%）、網(wǎng)織紅細(xì)胞絕對值（the absolute value of reticulocyte，RET#）、高熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞比例（high fluorescent ratio，HFR%）、中熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞比例（middle fluorescent ratio，MFR%）、低熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞比例（low fluorescent ratio，LFR%）、網(wǎng)織紅細(xì)胞血紅蛋白含量（reticulocyte hemoglobin，RET-He）6項(xiàng)。檢測原理為鞘流直流阻抗法。同時(shí)采用激光流式細(xì)胞術(shù)結(jié)合核酸熒光染色技術(shù)進(jìn)行檢測。操作流程嚴(yán)格遵循實(shí)驗(yàn)室制訂的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，選擇手動(dòng)進(jìn)樣模式CBC+RET檢測通道進(jìn)行檢測。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，先對總體數(shù)據(jù)進(jìn)行Kolmogorov-Smirnov（K-S）正態(tài)性檢驗(yàn)，計(jì)量資料以表示，參考區(qū)間以.96s進(jìn)行計(jì)算（95%可信區(qū)間），組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；非正態(tài)分布數(shù)據(jù)以中位數(shù)（M）四分位數(shù)（P25～P75）表示，參考區(qū)間以P2.5～P97.5表示，組間比較采用Kruskal-Wallis H秩和檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。采用SPSS 19.0軟件計(jì)算所有數(shù)據(jù)的標(biāo)準(zhǔn)化得分，把標(biāo)準(zhǔn)化得分絕對值＞3的數(shù)據(jù)作為離群值剔除。有差異組分別計(jì)算參考區(qū)間，無差異組則合并計(jì)算參考區(qū)間。

2 結(jié)果

2.1 RET及相關(guān)參數(shù)總體結(jié)果

本研究共納入新生兒406名，剔除離群值后共399名，其中男222名（55.6%）、女177名（44.4%）。RET%、RET#、HFR%、MFR%、LFR%、RET-He總體結(jié)果見表1。K-S檢驗(yàn)顯示所有數(shù)據(jù)均成正態(tài)分布（P＞0.05）。

2.2 按性別分組比較結(jié)果

0～3 d健康新生兒RET及相關(guān)參數(shù)按性別分組結(jié)果見表2。獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)顯示，男性組與女性組除HFR%外，其他5項(xiàng)參數(shù)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表1 399名0～3 d健康新生兒RET相關(guān)參數(shù)總體結(jié)果

表1 399名0～3 d健康新生兒RET相關(guān)參數(shù)總體結(jié)果

項(xiàng)目 結(jié)果 P值RET% 4.35%±0.98% 0.215 RET# （0.267±0.066）×1012/L 0.201 HFR% 17.08%±5.93% 0.845 MFR% 19.10%±3.37% 0.821 LFR% 63.82%±7.90% 0.392 RET-He （32.59±2.08）pg 0.136

表2 人0～3 d健康新生兒RET相關(guān)參數(shù)按性別分組比較

表2 人0～3 d健康新生兒RET相關(guān)參數(shù)按性別分組比較

組別 例數(shù) RET%/% RET#/×1012/L HFR%/% MFR%/% LFR%/% RET-He/pg男性組 222 4.29±0.97 0.264±0.066 18.19±5.99 18.95±3.37 62.86±7.85 32.56±2.22女性組 177 4.42±0.99 0.271±0.066 15.70±5.57 19.29±3.38 65.01±7.83 32.63±1.89 t值 -1.285 -1.071 4.251 -0.981 -2.153 -0.373 P值 0.200 0.285 0.000 0.327 0.789 0.709

2.3 按出生天數(shù)分組比較結(jié)果

0～3 d健康新生兒RET及相關(guān)參數(shù)按出生天數(shù)分組（0～1 d組、1～2 d組、2～3 d組）結(jié)果見表3。采用q檢驗(yàn)對3個(gè)組均值進(jìn)行差異性分析，結(jié)果顯示，2～3 d組與0～1 d組、1～2 d組新生兒RET%、RET#、MFR%存在差異（P＜0.05）；HFR%、LFR%、RET-He 3個(gè)組間均存在差異（P＜0.05）。

2.4 RET及相關(guān)參數(shù)的參考區(qū)間

將性別無差異項(xiàng)目合并計(jì)算參考區(qū)間，出生天數(shù)有差異項(xiàng)目分別計(jì)算參考區(qū)間，除HFR%按年齡和性別2層因素分為6組，其他5項(xiàng)參數(shù)按出生天數(shù)分為3組，以.96s表示參考區(qū)間。見表4。

表3 不同出生天數(shù)健康新生兒RET相關(guān)參數(shù)比較

表4 0～3 d健康新生兒RET相關(guān)參數(shù)參考區(qū)間

2.5 與其他文獻(xiàn)RET及相關(guān)參數(shù)參考區(qū)間比較

本研究武漢地區(qū)0～3 d新生兒RET相關(guān)參數(shù)與其他各年齡階段人群進(jìn)行比較[2，6，13-14]，新生兒RET%、RET#參考區(qū)間明顯高于其他各年齡階段，MFR%、HFR%等幼稚RET比例也遠(yuǎn)大于其他年齡階段。相關(guān)RET-He參數(shù)各年齡層研究不多，從部分文獻(xiàn)來看[1-2，9-10]，新生兒RET-He參考區(qū)間為28.51～36.67 pg，與成人基本一致。見表5。

表5 本研究的新生兒RET相關(guān)參數(shù)參考區(qū)間與其他文獻(xiàn)比較

3 討論

貧血在臨床上非常常見，一般把血紅蛋白低于參考區(qū)間下限者認(rèn)定為貧血。新生兒同樣也可發(fā)生貧血，而新生兒貧血原因很多，如產(chǎn)婦因胎兒-胎盤出血等產(chǎn)前出血可導(dǎo)致新生兒失血性貧血，母子ABO血型不合可導(dǎo)致新生兒溶血性貧血，孕婦妊娠期間缺鐵可導(dǎo)致新生兒缺鐵性貧血，新生兒造血干細(xì)胞異常導(dǎo)致紅細(xì)胞生成低下可引起新生兒貧血。如何正確診斷與分析新生兒貧血的原因、新生兒RET及相關(guān)參數(shù)檢測成為關(guān)鍵。RET是介于晚幼紅細(xì)胞和成熟紅細(xì)胞之間的一個(gè)階段，被認(rèn)為是尚未成熟的無核紅細(xì)胞，胞質(zhì)內(nèi)殘留著部分嗜堿性物質(zhì)——核糖核酸，和原卟啉一起組成胞內(nèi)網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，并可通過活體煌焦油藍(lán)染色呈現(xiàn)出來，被稱為RET。因RET可反映紅骨髓造血功能，增生性貧血時(shí)數(shù)量增加并被釋放入血，非增生性貧血時(shí)數(shù)量不變或減低，所以常用于貧血及相關(guān)疾病的診斷與鑒別診斷[11-12]。

現(xiàn)階段RET及相關(guān)參數(shù)的參考區(qū)間還以廠商推薦的健康成人參考區(qū)間為主，而出生72 h的新生兒的RET參考區(qū)間尚未提及。本研究選取406名出生72 h健康新生兒，采集其末梢血檢測RET相關(guān)參數(shù)，并統(tǒng)計(jì)獲得適用于武漢地區(qū)的新生兒RET參考區(qū)間。本研究結(jié)果顯示，0～3 d健康新生兒RET參數(shù)，可能因不存在性激素影響，除HFR%外，RET%、RET#、MFR%、LFR%、RET-He共5項(xiàng)參數(shù)男女性別間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），這與健康成人明顯不同（性別間存在顯著差異）；且新生兒與健康成人RET相比[1-2，7-10]，除RET-He外，其余5項(xiàng)參數(shù)數(shù)值均明顯高于成人，提示新生兒的骨髓造血功能比成年人明顯活躍。隨著新生兒出生時(shí)間的延長，所有RET均表現(xiàn)出明顯改變，如RET%、RET#到第3天時(shí)表現(xiàn)出一定程度的降低，而RET-He降低則更為明顯（3 d內(nèi)每天都有減低）。幼稚RET HFR%、MFR%均快速下降，HFR%降低更為明顯（從20%下降至10%）。而LFR%快速增高，從60%左右升至70%，說明新生兒RET不但數(shù)量多，且更為幼稚，但隨著出生時(shí)間的延長，RET迅速成熟分化，一部分幼稚RET轉(zhuǎn)變?yōu)檩^成熟RET，而另一部分較成熟RET則轉(zhuǎn)變?yōu)槌墒旒t細(xì)胞。反映機(jī)體鐵代謝情況的RET-He[13]，新生兒與其他各年齡段人群相比，水平基本一致，提示健康個(gè)體在各年齡階段，體內(nèi)鐵代謝水平都較為穩(wěn)定。本研究針對出生72 h內(nèi)健康新生兒的研究，已盡量克服健康個(gè)體篩查及標(biāo)本留取、抗凝處理、保存等多方面的困難，但仍因入選標(biāo)本量較少、研究對象年齡覆蓋面較窄而存在某些遺憾，有待進(jìn)一步的研究來完善數(shù)據(jù)。