楊松，吳涵，張?jiān)剖?，栗克?/p>

精神分裂癥和雙相障礙是常見的重性精神障礙，都存在明顯的認(rèn)知功能障礙，研究[1-3]顯示，精神分裂癥斷裂基因1(DISC1) 3'末端變異與兩種疾病患者的認(rèn)知功能損害有關(guān)，其中rs821616位點(diǎn)與言語流暢性相關(guān)；研究[4]顯示血清同型半胱氨酸(Hcy)水平增高可能是認(rèn)知功能障礙的重要危險(xiǎn)因素。經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，本研究比較首發(fā)精神分裂癥和伴有精神病性癥狀的雙相障礙患者認(rèn)知功能、DISC1 rs821616位點(diǎn)多態(tài)性及血清Hcy水平，探討兩種疾病間認(rèn)知障礙模式和嚴(yán)重程度及生物學(xué)指標(biāo)差異。

1 對象和方法

1.1 對象

入組者均為2016年至2018年本院住院患者；首發(fā)精神分裂癥組：①符合《國際疾病分類》(International Classification of Diseases 10th Revision，ICD-10)精神分裂癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)，首發(fā)的定義采用Lieberman標(biāo)準(zhǔn)[5]，病程≤60個(gè)月；②年齡≥18周歲，漢族；③患者既往未使用抗精神病藥或使用時(shí)間≤14 d； 排除患有腦器質(zhì)性損害、精神發(fā)育遲滯、物質(zhì)依賴或成癮、合并其他精神疾病、嚴(yán)重的軀體疾病及處于孕/哺乳期患者；雙相障礙組：①符合ICD-10雙相障礙診斷標(biāo)準(zhǔn)，目前為躁狂發(fā)作或抑郁發(fā)作(為準(zhǔn)確診斷，不限定為首發(fā)患者)；②年齡≥18周歲，漢族；③抗抑郁藥物或情感穩(wěn)定劑使用時(shí)間≤14 d；排除標(biāo)準(zhǔn)同首發(fā)精神分裂癥組?；颊呋蚱浔O(jiān)護(hù)人對本研究知情同意，簽署知情同意書。精神分裂癥組：男50例，女50例；平均年齡(30.2±11.1)歲； 文化程度：≤小學(xué)14例，中學(xué)71例，≥大學(xué)15例。雙相障礙組：男53例，女47例；平均年齡(29.5±8.4)歲；文化程度：≤小學(xué)11例，中學(xué)77例，≥大學(xué)12例。兩組一般情況比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 方法

1.2.1 血清 Hcy水平測定 采集空腹肘靜脈血4 ml，置于EDTA抗凝管中，離心分離血漿，-20°C冰箱保存。采用全自動(dòng)生化分析儀及Hcy測定試劑盒檢測，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法測定血清Hcy水平。參照血清Hcy檢驗(yàn)學(xué)標(biāo)準(zhǔn)[6]正常值：5～15 μmol/L。

1.2.2 認(rèn)知功能評估 采用MATRICS共識認(rèn)知成套測驗(yàn)(MATRICS Consensus Cognitive Battery，MCCB)測量入組者認(rèn)知功能狀況；本研究選取連線測試(TMT)、持續(xù)操作測驗(yàn)(CPT)、Stroop色詞測驗(yàn)、簡易視覺空間記憶進(jìn)行檢測。TMT：測驗(yàn)考察視覺掃描和視覺運(yùn)動(dòng)的軌跡，反映被試的信息處理速度。要求被試按照從小到大的順序畫線，將答題卡上的數(shù)字連接起來。完成這個(gè)測驗(yàn)大約需要3 min。評分標(biāo)準(zhǔn)：記錄被試完成時(shí)間和錯(cuò)誤次數(shù)作為評分標(biāo)準(zhǔn)。如果被試中途停止，要求他做完。如果被試超時(shí)，則時(shí)間記作300 s，未在時(shí)限內(nèi)完成的按錯(cuò)誤計(jì)算。CPT：是一個(gè)計(jì)算機(jī)化的測驗(yàn)，主要考察被試的持續(xù)注意水平。測驗(yàn)中，顯示屏?xí)噪S機(jī)順序多次呈現(xiàn)不同的數(shù)字，要求被試識別連續(xù)出現(xiàn)的同一數(shù)字，并在規(guī)定時(shí)間內(nèi)做出反應(yīng)。主要評估的認(rèn)知領(lǐng)域?yàn)樽⒁?警覺，分值越高，表明被試完成越好。Stroop色詞：主要評估被試的工作記憶，要求被試盡量快而準(zhǔn)確地說出印刷色彩的名稱，而不管文字含義。共有100個(gè)刺激，呈10行排列，呈現(xiàn)時(shí)間為60 s。評分標(biāo)準(zhǔn)：記錄60 s內(nèi)被試回答的正確數(shù)目作為評分標(biāo)準(zhǔn)。簡易視覺空間記憶：主要評估被試的視覺學(xué)習(xí)，要求被試觀察一張圖片，包括6個(gè)幾何圖形，觀察10 s后，要求憑記憶在空白答題卡上畫出來，以被試所畫圖形的準(zhǔn)確性及所在位置為評分標(biāo)準(zhǔn)，整個(gè)測驗(yàn)需要重復(fù)3次。

1.2.3 DISC1 rs821616位點(diǎn)多態(tài)性檢測 抽取靜脈血5 ml分離血清與血細(xì)胞；用分離后的血細(xì)胞進(jìn)行 DNA 的提取，用 NanoDrop1000 分光光度計(jì)按公認(rèn)方法測定基因組 DNA的濃度及純度，每例樣本測定 3 次后取平均值。使 DNA的純度[OD 值(A280/A260)]為 1.6～1.9、濃度為 200～500 ng/μl樣本溶于TE緩沖液，-20℃冰箱保存待用。設(shè)計(jì)引物序列Forward：5'-GAC CTC TTT CTG TTC ACC TCC-3' Reverse：5'-GTA TTG GGC TGC TGA GTC TG-3'。94 ℃預(yù)變性5 min，每一循環(huán)94 ℃變形30 s，62 ℃退火30 s，72℃延伸30 s，共35個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸7 min。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction，PCR)反應(yīng)完成后，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測，進(jìn)行測序。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清Hcy水平比較

精神分裂癥組血清Hcy為(23.45±16.41)μmol/L，雙相障礙組為(24.32±18.06)μmol/L，兩組血清Hcy水平明顯高于正常值(t=5.149，t=5.161；P均<0.01)；兩組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.358，P>0.05)。

2.2 兩組認(rèn)知功能測驗(yàn)結(jié)果比較

兩組TMT、Stroop色詞測驗(yàn)、簡易視覺和空間記憶測驗(yàn)結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)； CPT評分兩組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1。

2.3 兩組DISC1 rs821616位點(diǎn)基因型及等位基因頻率比較

兩組rs821616位點(diǎn)的基因型的觀察值和期望值Hard-Weinberg平衡吻合度良好(P>0.05)，表明具有群體代表性。兩組間AA、AT和TT基因型頻率及A、T等位基因頻率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.59，P=0.018；χ2=9.53，P=0.0085)。見表2。

組別例數(shù)TMTCPTStroop視覺空間精神分裂癥組10033.84±11.1235.99±10.8038.68±6.9946.05±11.02雙相障礙組10039.36±11.4438.62±11.1840.94±6.9449.81±11.12t值3.4601.6922.2942.401P值0.0010.0920.0230.017

表2 兩組rs821616位點(diǎn)的基因型及等位基因頻率比較(例數(shù)，%)

3 討論

臨床上精神分裂癥與伴有精神病性癥狀的雙相障礙的鑒別難度很大[7]；目前臨床鑒別主要依賴于癥狀學(xué)及病史資料，缺乏客觀的生物學(xué)指標(biāo)。有研究[8-9]顯示，二者在神經(jīng)認(rèn)知功能、生化指標(biāo)和遺傳易感基因等多方面存在交叉；說明兩種疾病可能具有一些共同的病理生理機(jī)制。本研究對兩組患者的血清Hcy水平、認(rèn)知功能、rs821616位點(diǎn)基因多態(tài)性進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)，兩組血清Hcy水平均明顯高于正常值，但兩組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

認(rèn)知功能檢測結(jié)果顯示，精神分裂癥組的TMT、stroop色詞測驗(yàn)、簡易視覺空間記憶成績顯著差于雙相障礙組，而CPT評分兩組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；提示精神分裂癥患者的認(rèn)知功能在信息處理速度和視覺學(xué)習(xí)領(lǐng)域受損較伴有精神病性癥狀的雙相障礙組患者更為嚴(yán)重，而在注意/警覺領(lǐng)域兩組患者表現(xiàn)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這與以往大多數(shù)研究[10-11]結(jié)果顯示的精神分裂癥患者的認(rèn)知受損程度及范圍更為嚴(yán)重的結(jié)果相一致。也有研究[12]顯示兩種疾病表現(xiàn)出相當(dāng)?shù)纳窠?jīng)認(rèn)知功能障礙?？赡芘c藥物對認(rèn)知功能的影響、疾病癥狀特點(diǎn)及亞型和測查工具的不同有關(guān)，需要進(jìn)一步的研究。

DISC1基因位于染色體1q42.1區(qū)域，由13個(gè)外顯子組成。其編碼的多肽由854個(gè)氨基酸組成。 DISC1蛋白羧基端的變化發(fā)生在8、 9號外顯子之間，是第597個(gè)氨基酸位點(diǎn)發(fā)生了變化。該變化是由染色體t(1； 11)的平衡易位引起的，并且是在一個(gè)患有多種精神疾病的蘇格蘭大家系中發(fā)現(xiàn)的[13]。多項(xiàng)研究顯示[1-2、14]，該基因與精神分裂癥和雙相障礙的認(rèn)知功能受損有關(guān)。其編碼多種功能蛋白，在腦神經(jīng)發(fā)育、軸突生長、突出調(diào)節(jié)和信號傳導(dǎo)中起到重要的作用，特別在海馬齒狀回表達(dá)最多[2]。r8821616位于DISCl基因的第11個(gè)外顯子上，這個(gè)外顯子被認(rèn)為功能編碼某種蛋白的特定區(qū)域，該蛋白與ATF4/ATF5和Nudel相互作用。rs821616非同意義突變可能會(huì)通過單體型作用或連鎖不平衡等功能變異增加精神分裂癥的患病易感性[15-17]。本研究結(jié)果顯示兩組rs821616基因型的觀察值和期望值Hard-Weinberg平衡吻合度良好(P>0.05)，表明具有群體代表性及研究結(jié)果的可靠性。兩組間AA、AT和TT基因型頻率及A、T等位基因頻率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。今后可以進(jìn)行正常人群對照及遺傳學(xué)一級親屬的對照，并結(jié)合DISC 1基因其他位點(diǎn)進(jìn)一步研究。

本研究仍有以下不足之處：①采用了橫斷面研究設(shè)計(jì);②沒有獲得疾病的癥狀特點(diǎn)、亞型及藥物使用情況等充足信息，可能導(dǎo)致結(jié)果的偏倚。③納入研究的樣本量較小，未與正常人群及一級親屬進(jìn)行基因型對照，應(yīng)該在以后進(jìn)行深入的研究。