陳金　陳旭艷

[摘要] 目的 探討T細(xì)胞發(fā)育在系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）發(fā)病機(jī)制中的作用。 方法 選取2017年9月～2019年8月我院收治的活動(dòng)期SLE患者120例為病例組，選取同期我院中青年健康體檢者50例為對(duì)照組。檢測(cè)CD4+、CD8+、CD4+CD25+和CD8+CD25+T細(xì)胞百分率，血清TGF-β、IL-10和IL-12水平，分析T細(xì)胞亞群分布特點(diǎn)及活化與SLE活動(dòng)度評(píng)分、TGF-β、IL-10和IL-12水平的相關(guān)性。 結(jié)果 病例組的CD4+、CD4+CD25+T細(xì)胞百分率與對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。病例組的CD8+T細(xì)胞百分率高于對(duì)照組（P<0.05），CD4+/CD8+比值低于對(duì)照組（P<0.05），CD8+CD25+T細(xì)胞百分率低于對(duì)照組（P<0.05），CD4+CD25+/CD8+CD25+比值高于對(duì)照組（P<0.05）。病例組的血清TGF-β水平低于對(duì)照組（P<0.05），IL-10和IL-12水平高于對(duì)照組（P<0.05）。CD4+、CD8+、CD4+CD25+和CD8+CD25+與SLE活動(dòng)度評(píng)分、TGF-β水平無(wú)明顯相關(guān)關(guān)系（P>0.05）。CD4+CD25+和CD8+CD25+與血清IL-10和IL-12水平呈負(fù)相關(guān)（P<0.05）。 結(jié)論 SLE患者存在T細(xì)胞發(fā)育中CD4+、CD8+亞群分布紊亂和活化異常，可能通過(guò)細(xì)胞因子TGF-β、IL-10和IL-12參與SLE的發(fā)病機(jī)制。

[關(guān)鍵詞] 系統(tǒng)性紅斑狼瘡;T淋巴細(xì)胞;CD4+;CD8+;CD25+;發(fā)病機(jī)制

[中圖分類號(hào)] R593.2? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1673-9701（2020）07-0011-04

Effects of T cell development in the pathogenesis of systemic lupus erythematosus

CHEN Jin? ?CHEN Xuyan

Department of Hematology and Rheumatology， the Second Affiliated Hospital of Xiamen Medical College， Xiamen 361101， China

[Abstract] Objective To investigate the effects of T cell development on the pathogenesis of systemic lupus erythematosus（SLE）. Methods A total of 120 active-phase SLE patients admitted in our hospital from September 2017 to August 2019 were enrolled in the SLE group， and 50 healthy participants at young or middle age for physical examinations in the same period were enrolled in the control group. The proportions of CD4+， CD8+， CD4+CD25+ and CD8+CD25+ T cells and serum levels of transforming growth factor β （TGF-β）， interlukin-10 （IL-10） and IL-12 were determined. Correlations between the distribution and activation of T-lymphocyte subsets and SLE disease activity index （SLEDAI）， serum levels of TGF-β， IL-10 and IL-12 were analyzed. Results There were nonsignificant differences in the proportions of CD4+ T cells and CD4+CD25+ T cells between the SLE group and the control group（P>0.05）. The proportion of CD8+ T cells in the SLE group was higher than that in the control group（P<0.05）. CD4+/CD8+ ratio in the SLE group was lower than that in the control group（P<0.05）. The proportion of CD8+CD25+ T cells in the SLE group was lower than that in the control group（P<0.05）. CD4+CD25+/CD8+CD25+ ratio in the SLE group was higher than that in the control group（P<0.05）. The serum level of TGF-β was lower and levels of IL-10 and IL-12 were higher in the SLE group than those in the control group（P<0.05）. There were nonsignificant correlations between CD4+， CD8+， CD4+CD25+ and CD8+CD25+ and SLEDAI， and between CD4+， CD8+， CD4+CD25+ and CD8+CD25+ and TGF-β levels（P>0.05）. CD4+CD25+ and CD8+CD25+ were negatively correlated with serum levels of IL-10 and IL-12（P<0.05）. Conclusion The uneven distribution and abnormal activation of CD4+ and CD8+ T-lymphocyte subsets in T cell development in SLE patients can be involved in the pathogenesis of SLE via the regulation of cytokines， such as TGF-β， IL-10 and IL-12.

[Key words] Systemic lupus erythematosus; T lymphocytes; CD4+; CD8+; CD25+; Pathogenesis

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（Systemic lupus erythematosus，SLE）為慢性、系統(tǒng)性自身免疫疾病，免疫復(fù)合物的形成和沉積是SLE發(fā)病的主要機(jī)制，血清產(chǎn)生多種抗核抗體，通過(guò)免疫復(fù)合物等途徑引起各個(gè)臟器和組織的炎癥反應(yīng)和血管病變[1-2]。目前研究發(fā)現(xiàn)，T細(xì)胞發(fā)育中CD4+、CD8+亞群分布紊亂和活化異常有可能是導(dǎo)致自身免疫疾病的重要原因，SLE患者的CD4+、CD8+T細(xì)胞功能失調(diào)，導(dǎo)致B細(xì)胞繼續(xù)活化產(chǎn)生多種自身抗體，使自身免疫持續(xù)存在[3-4]。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞與相關(guān)細(xì)胞因子如轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）、白細(xì)胞介素10（IL-10）和白細(xì)胞介素12（IL-12）等在SLE發(fā)病機(jī)制中的作用是目前臨床研究熱點(diǎn)，但未有確切定論。為探討T細(xì)胞發(fā)育在系統(tǒng)性紅斑狼瘡發(fā)病機(jī)制中的作用，本研究分別檢測(cè)SLE患者與正常人群中的CD4+、CD8+、CD4+CD25+和CD8+CD25+T細(xì)胞百分率，血清TGF-β、IL-10和IL-12水平，分析T細(xì)胞亞群分布特點(diǎn)及活化與SLE活動(dòng)度評(píng)分、TGF-β、IL-10和IL-12水平的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年9月～2019年8月我院收治的活動(dòng)期SLE患者120例為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合SLE診斷標(biāo)準(zhǔn)[5];根據(jù)SLE活動(dòng)度評(píng)分≥5分為活動(dòng)期SLE;于我院接受規(guī)范治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他自身免疫系統(tǒng)疾病，如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、硬皮病、結(jié)節(jié)性動(dòng)脈炎等;合并嚴(yán)重心血管、肝、肺等疾病。其中男14例，女106例，年齡20～45歲，平均（32.46±5.33）歲;平均病程（27.29±10.67）個(gè)月;SLE活動(dòng)度評(píng)分為6～24分，平均（14.22±3.69）分。選取同期我院中青年健康體檢者50例為對(duì)照組，男10例，女40例，年齡22～42歲，平均（31.86±4.73）歲，排除妊娠期、自身免疫系統(tǒng)疾病、慢性病史。兩組一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑? 檢測(cè)儀器為美國(guó)BD公司生產(chǎn)的FACSCalibur流式細(xì)胞儀。主要試劑：熒光染料R-藻紅蛋白標(biāo)記小鼠抗人CD4單克隆抗體、CD8單克隆抗體、CD25單克隆抗體，均為美國(guó)BD公司的配套試劑盒。TGF-β試劑盒（上海江萊生物科技有限公司）、IL-10和IL-12試劑盒（武漢默沙克生物科技有限公司）。

1.2.2 檢測(cè)方法? 所有受檢者均于清晨空腹采血，乙二胺四乙酸抗凝，采集后6 h內(nèi)送檢。T細(xì)胞檢測(cè)：取外周血標(biāo)本100 μL分別放入檢測(cè)管，分別加入CD4、CD8、CD25單克隆抗體?；靹蚝蟊芄鉁赜?0 min，加入紅細(xì)胞裂解液，混勻加速離心棄上清，加入PBS緩沖液懸浮細(xì)胞，重復(fù)3次離心和加入PBS緩沖液懸浮細(xì)胞。最后經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD4+、CD8+、CD4+CD25+和CD8+CD25+T細(xì)胞百分率。血清TGF-β、IL-10和IL-12水平檢測(cè)：雙抗體夾心ELISA法，將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，輕輕晃動(dòng)混勻，37℃溫育30 min，重復(fù)5次加速離心和棄上清，酶標(biāo)板孔加入酶標(biāo)試劑50 μL，用封板膠紙封住反應(yīng)孔。重復(fù)溫育和洗滌，最后1次洗滌置厚吸水紙上拍干。再加入顯色劑，震蕩混勻避光顯色15 min。最后加入終止液終止反應(yīng)，450 nm波長(zhǎng)依序測(cè)量吸光度。以上均嚴(yán)格按照說(shuō)明書操作。

1.3 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

SLE病情的判斷依據(jù)SLE活動(dòng)度評(píng)分。其中0～4分為基本無(wú)活動(dòng)，5～9分為輕度活動(dòng)，10～14分為中度活動(dòng)，≥15分為重度活動(dòng)[6]。分析T細(xì)胞與SLE活動(dòng)度評(píng)分的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。滿足正態(tài)分布的計(jì)量資料以（x±s）描述，進(jìn)行t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以[n（%）]描述，采用χ2檢驗(yàn)。相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組外周血CD4+和CD8+T細(xì)胞分布比較

病例組的CD4+T細(xì)胞百分率與對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。病例組的CD8+T細(xì)胞百分率明顯高于對(duì)照組（P<0.05），且CD4+/CD8+比值低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表1。

2.2 兩組外周血CD4+CD25+和CD8+CD25+T細(xì)胞分布比較

病例組的CD4+CD25+T細(xì)胞百分率與對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。病例組的CD8+CD25+T細(xì)胞百分率明顯低于對(duì)照組（P<0.05），且CD4+CD25+/CD8+CD25+比值高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表2。

2.3 兩組血清TGF-β、IL-10和IL-12水平比較

病例組的血清TGF-β水平明顯低于對(duì)照組（P<0.05），IL-10和IL-12水平明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表3。

2.4 T細(xì)胞與SLE活動(dòng)度評(píng)分、TGF-β、IL-10和IL-12水平的相關(guān)性分析

患者SLE活動(dòng)度評(píng)分為6～24分，平均（14.22±3.69）分，其中輕度活動(dòng)32例，中度活動(dòng)49例，重度活動(dòng)39例。CD4+、CD8+、CD4+CD25+和CD8+CD25+與SLE活動(dòng)度評(píng)分、TGF-β水平無(wú)明顯相關(guān)關(guān)系（P>0.05）。CD4+CD25+和CD8+CD25+與血清IL-10和IL-12水平呈負(fù)相關(guān)（P<0.05）。見(jiàn)表4。

3 討論

T細(xì)胞的發(fā)育與成熟歷經(jīng)從干細(xì)胞到成熟T細(xì)胞再到分化的效應(yīng)T細(xì)胞，在發(fā)育中將增殖、前受體表達(dá)、再增殖、抗原受體表達(dá)、正負(fù)選擇的過(guò)程[7]。是否表達(dá)前抗原受體、是否表達(dá)抗原受體、表達(dá)的抗原受體對(duì)抗原識(shí)別的正選擇與負(fù)選擇是T細(xì)胞的發(fā)育與成熟的重要檢查點(diǎn)。在胸腺中，早期T淋巴細(xì)胞發(fā)育，DP細(xì)胞經(jīng)歷陽(yáng)性或陰性選擇階段，快速增殖發(fā)育為其表面標(biāo)志為CD4或CD8的單陽(yáng)性T細(xì)胞。CD4+細(xì)胞，即輔助性T細(xì)胞，可以分泌多種細(xì)胞因子，主要發(fā)揮體液免疫和細(xì)胞免疫的功能。CD8+細(xì)胞，即細(xì)胞毒T細(xì)胞，產(chǎn)生特殊抗原反應(yīng)，具有殺傷靶細(xì)胞的功能[8]。CD4+和CD8+T細(xì)胞在胸腺中分化、發(fā)育成熟后，通過(guò)淋巴和血液循環(huán)分布到全身的免疫器官和組織中發(fā)揮免疫功能[9]。多項(xiàng)研究提出，其發(fā)病與淋巴亞群的異常分布密切相關(guān)[10-11]。本研究采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)SLE患者與正常人群的淋巴細(xì)胞亞群CD4+和CD8+T細(xì)胞百分率，結(jié)果顯示，SLE患者的CD8+T細(xì)胞百分率明顯升高，CD4+/CD8+比值明顯降低，提示活動(dòng)期SLE患者存在T細(xì)胞亞群分布紊亂。這與劉暘等[12]研究結(jié)果相符，該研究表示，SLE患者CD4+ T細(xì)胞明顯降低，CD8+ T細(xì)胞明顯增加，CD4+/CD8+比值明顯降低，認(rèn)為SLE的發(fā)病及病情活動(dòng)度與T細(xì)胞亞群水平及Th1/Th2平衡紊亂、Th2細(xì)胞占優(yōu)勢(shì)有關(guān)。

T細(xì)胞的抗原活化過(guò)程是體液和細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)的中心事件，TCR-CD復(fù)合物與抗原肽-MHC復(fù)合物的相互作用起始T細(xì)胞的活化，而T細(xì)胞活化離不開(kāi)APC表面輔助刺激信號(hào)配體與其表面對(duì)應(yīng)輔助刺激信號(hào)受體相互作用，為T細(xì)胞的活化提供第二信號(hào)。近年來(lái)研究中，CD25被認(rèn)為是T細(xì)胞的活化標(biāo)志之一，可能與胸腺微環(huán)境中多種分子和相關(guān)信號(hào)途徑有關(guān)，對(duì)維持自身免疫耐受具有重要意義[13-14]。本研究發(fā)現(xiàn)，SLE患者的CD8+CD25+T細(xì)胞百分率明顯降低，CD4+CD25+/CD8+CD25+比值明顯升高，提示活動(dòng)期SLE患者存在T細(xì)胞活化異常。Yin ZJ等[15]研究證實(shí)，CD4+CD25+和CD8+CD25+T細(xì)胞參與自身免疫疾病的發(fā)生，與疾病活動(dòng)和器官受累有關(guān)，活動(dòng)期SLE患者CD4+CD25-Foxp3+T細(xì)胞百分率明顯增加，可以作為SLE活動(dòng)和器官受累的生物標(biāo)志物。Maraghy N等[16]研究也發(fā)現(xiàn)，SLE患者CD4+CD25-Foxp3+T細(xì)胞百分率明顯升高，與SLE活動(dòng)評(píng)分和病程有顯著相關(guān)性，且與腎功能損害和血液系統(tǒng)損害呈正相關(guān)。在本研究中，發(fā)現(xiàn)SLE患者的T細(xì)胞與SLE活動(dòng)度評(píng)分未見(jiàn)明顯相關(guān)性，但由于本研究?jī)H納入活動(dòng)期SLE患者，缺乏與穩(wěn)定期SLE患者的比較，也未能長(zhǎng)期隨訪其病情變化特點(diǎn)，故T細(xì)胞的亞群分布與活化異常與SLE病情嚴(yán)重程度的關(guān)聯(lián)仍待進(jìn)一步探討。

T細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子主要有白細(xì)胞介素、生長(zhǎng)因子、趨化因子等。各種細(xì)胞因子一般通過(guò)結(jié)合相應(yīng)受體調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、分化和效應(yīng)，對(duì)于調(diào)控免疫應(yīng)答具有重要意義。有研究發(fā)現(xiàn)，在CD4+CD25+T細(xì)胞中分泌IL-10和IL-12，參與組織炎癥損傷，具有免疫刺激和免疫抑制雙重作用[17]。IL-10也具有單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞依賴，抑制其他細(xì)胞因子合成，促進(jìn)可溶性TNF受體的釋放，在疾病不同階段表現(xiàn)出不同作用。朱強(qiáng)等[18]研究發(fā)現(xiàn)，IL-10與TGF-β共同參與了SLE的發(fā)病過(guò)程，IL-10的表達(dá)與SLE活動(dòng)度評(píng)分呈正相關(guān)，而TGF-β的表達(dá)與SLE活動(dòng)度呈負(fù)相關(guān)。趙凌等[19]研究表示， CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞與IL-10表達(dá)密切相關(guān)，SLE患者誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化后形成的 Treg細(xì)胞以及未轉(zhuǎn)化的CD4+CD25+T細(xì)胞內(nèi)表達(dá)IL-10的水平均顯著高于正常人。本研究發(fā)現(xiàn)，SLE患者的血清IL-10和IL-12水平明顯較高，可能與SLE發(fā)病機(jī)制有一定關(guān)聯(lián)。TGF-β是新近發(fā)現(xiàn)的調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)和分化的TGF-β超家族，具有抑制淋巴細(xì)胞分化的作用，近年來(lái)有關(guān)TGF-β治療自身免疫性疾病有廣闊前景。進(jìn)一步分析T細(xì)胞與TGF-β、IL-10和IL-12水平的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)CD4+CD25+和CD8+CD25+與血清IL-10和IL-12水平呈負(fù)相關(guān)，提示調(diào)節(jié)性T細(xì)胞可能通過(guò)細(xì)胞因子TGF-β、IL-10和IL-12參與SLE的發(fā)病機(jī)制。楊舟等[20-22]研究提出，SLE患者CD4+CD25+ Treg及TGF-β水平可隨疾病的進(jìn)展而下調(diào)表達(dá)，在預(yù)測(cè)患者病情進(jìn)展上有一定價(jià)值。

綜上所述，SLE患者存在T細(xì)胞發(fā)育中CD4+、CD8+亞群分布紊亂和活化異常，可能通過(guò)細(xì)胞因子TGF-β、IL-10和IL-12參與SLE的發(fā)病機(jī)制。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Aringer M，Schneider M.Systemic lupus erythematosus[J].Dtsch Med Wochenschr，2016，141（8）：537-543.

[2] Celhar T，F(xiàn)airhurst AM.Modelling clinical systemic lupus erythematosus： Similarities，differences and success stories[J].Rheumatology，2017，56（1）：88-99.

[3] Ding Y，Liao W，He XJ，et al. Effects of 1，25（OH）2 D3 and vitamin D receptor on peripheral CD4+/CD8+ double-positive T lymphocytes in a mouse model of systemic lupus erythematosus[J].J Cell Mol Med，2017，21（5）：975-985.

[4] Ugarte MF，Sánchez C，Gamboa RV，et al. Circulating CD4+CD28 null and extra-thymic CD4+CD8+ double positive T cells are independently associated with disease damage in systemic lupus erythematosus patients[J]. Lupus，2016，25（3）：233-240.

[5] Vasquez N，Wahezi D，Putterman C.Diagnostic and prognostic tests in systemic lupus erythematosus[J]. Best Pract Res Clin Rheumatol，2017，31（3）：351-363.

[6] Furie R，Wang L，Illei G，et al. Systemic lupus erythematosus（SLE） responder index response is associated with global benefit for patients with SLE[J]. Lupus，2018，27（6）：955-962.

[7] Seo W，Taniuchi I.Transcriptional regulation of early T-cell development in the thymus[J].Eur J Immunol，2016， 46（3）：531-538.

[8] Ling GS，Crawford G，Buang N，et al. C1q restrains autoimmunity and viral infection by regulating CD8+ T cell metabolism[J].Science，2018，360（6388）：558-563.

[9] Poznanski SM，Barra NG，Ashkar AA，et al. Immunometa-bolism of T cells and NK cells：Metabolic control of effector and regulatory function[J]. Inflamm Res，2018，67（10）：813-828.

[10] 路峰，吉恒東，孫華，等.T細(xì)胞亞群、IL-6、IL-18及IFN-γ水平變化與系統(tǒng)性紅斑狼瘡發(fā)病的相關(guān)性及可能的作用機(jī)制分析[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)裝備，2019，16（3）：95-98.

[11] 王麗娟，托婭，白世杰，等.流式細(xì)胞術(shù)對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡病人淋巴細(xì)胞亞群的檢測(cè)[J].內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2016，38（1）：128-131.

[12] 劉暘，張曉煒，霍麗珍，等.SLE病人T淋巴細(xì)胞亞群功能紊亂的研究[J].內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2015，37（3）：225-228.

[13] 汪瀚，翟原.天然型調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在胸腺內(nèi)的分化發(fā)育機(jī)制[J].南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2017，37（1）：15-19.

[14] 陶弋婧，趙娟娟，郭萌萌，等.天然CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在胸腺中發(fā)育的研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代免疫學(xué)，2015， 35（1）：72-76.

[15] Yin ZJ，Ju BM，Zhu L，et al. Increased CD4+CD25-Foxp3+ T cells in Chinese systemic lupus erythematosus：Correlate with disease activity and organ involvement[J]. Lupus，2018，27（13）：2057-2068.

[16] Maraghy N，Ghaly MS，Dessouki O，et al. CD4+CD25-Foxp3+ T cells as a marker of disease activity and organ damage in systemic lupus erythematosus patients[J]. Arch Med Sci，2018，14（5）：1033-1040.

[17] Alahgholi M，Durmus H，Aysal F，et al. The effect of interleukin（IL）-12 and CD4+ CD25++ T cells on cytokine production of CD4+ responder T cells in patients with myasthenia gravis[J].Clin Exp Immunol，2017，190（2）：201-207.

[18] 朱強(qiáng)，朱明華，羅俊，等.IL-10和TGF-β-1在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血清中的表達(dá)及意義[J].軍事醫(yī)學(xué)，2015， 39（4）：276-278.

[19] 趙凌，楊曉帆，周小斌，等.SLE患者CD4+CD25-T細(xì)胞來(lái)源的體外誘導(dǎo)型Treg細(xì)胞IL-10表達(dá)特征的初步研究[J].南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2017，37（9）：1114-1119.

（收稿日期：2019-11-11）