陳建玲， 李 婷， 向 偉， 錢時興， 陸光華， 胡衛(wèi)紅

阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)是一種隱匿起病于老年前期或老年期的、以進行性認知功能障礙和行為障礙為主要臨床表現(xiàn)的、進行性發(fā)展的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病[1]。目前，AD的臨床診斷主要基于患者病史、神經(jīng)心理測試及腦影像技術(shù)等，而確診則需要進行病理學檢查。但是，目前取樣大腦中的物質(zhì)進行檢驗仍是困難和風險并存的問題。因此，在臨床癥狀出現(xiàn)之前，通過客觀可測量的生物標志物檢測來早期診斷AD將對早期干預(yù)至關(guān)重要。中樞神經(jīng)系統(tǒng)慢性炎癥反應(yīng)一直被認為是AD的病因之一[1]。研究發(fā)現(xiàn)，AD患者腦組織中存在大量的補體(如C3)及炎性細胞因子(如IL-1、IL-6、IL-3、TNF、NO等)[2～6]。這些因子的過度表達和復雜的相互作用能夠損傷神經(jīng)元并刺激膠質(zhì)增生，從而加劇神經(jīng)元退行性變[7,8]。髓樣細胞觸發(fā)受體2(triggering receptor expresses on myeloid cells-2，TREM2)是由TREM2基因編碼的膜蛋白，能夠在免疫反應(yīng)和慢性炎癥中刺激結(jié)構(gòu)性炎癥細胞因子的產(chǎn)生[9,10]。全基因組測序及遺傳學研究表明，TREM2的罕見變異可以使AD的發(fā)病風險增加[11]。然而，TREM2對AD的診斷價值尚不明確。在此，本研究檢測外周血中的TREM2，以期為AD的及時診斷和預(yù)后提供更可靠的證據(jù)。

1 對象與方法

1.1 材 料

1.1.1 研究對象 隨機收集2017年1月-2018年12月在長寧區(qū)精神衛(wèi)生中心住院治療的60例AD患者(研究組)。根據(jù)臨床癡呆評定量表(Clinical Dementia Rating，CDR)將AD組分為輕度、中度、重度3組。采用頻數(shù)匹配的方法從同一時期本院體檢中心選擇年齡、性別、文化程度與AD患者匹配且認知功能正常的健康體檢人員20例。

研究組入組標準：(1)符合美國《精神疾病診斷和統(tǒng)計手冊》 第四版(diagnostic and statistical manual of mental disorders，fourth edition，DSM-IV)的癡呆診斷標準；(2)符合美國國立神經(jīng)病學、語言障礙和卒中-老年癡呆和相關(guān)疾病學會(National Institute of Neurological and Communicative Disorders and Stroke and the Alzheimer’s Disease and Related Disorders Association，NINCDS-ADRDA)的“很可能AD”的診斷標準；(3)發(fā)病年齡≥65 歲，無癡呆家族遺傳史；(4)簡易精神狀態(tài)量表(mini-mental state examination，MMSE)得分低于臨界值(文盲≤ 17分、小學文化程度≤20分、初中及以上文化程度≤24分)；(5)漢密爾頓抑郁量表(Hamilton Depression Scale，HAMD)(17 項版本)<7 分；(6)Hachinski缺血指數(shù)量表≤4 分；(7) 經(jīng)過至少1名主治醫(yī)生診斷；(8)患者或者其監(jiān)護人同意參加本試驗，并在知情同意書上簽字。排除標準：(1)有癡呆家族遺傳史的患者；(2)不符合入組標準者；(3)癲癇患者；(4)可能影響認知功能的疾病(如嚴重的帕金森病)、自身免疫疾病、近期有感染史，嚴重的心、肺、肝、腎疾病及腫瘤。

正常對照組納入標準：(1)簽署知情同意書；(2)年齡≥65 歲，無癡呆家族遺傳史；(3)MMSE評分≥29分；HAMD(17 項)評分<7分。排除標準：維生素B12缺乏者；梅毒血清學試驗陽性或甲狀腺功能不全患者；存在精神疾病史如精神分裂癥或情感障礙者；伴發(fā)其他嚴重軀體疾病者；排除尿液異常者如尿液中白細胞、紅細胞異常、細菌生長和蛋白陽性等。本研究通過長寧區(qū)精神衛(wèi)生中心倫理委員會批準，且所有研究對象均已簽署了知情同意書。

1.1.2 主要試劑 ELISA試劑盒：TREM2、IL-6、CRP(均abcam公司)。

1.2 方 法

1.2.1 血液采集 AD患者于入院后次日清晨空腹抽取5 ml靜脈血，健康體檢者則于體檢當日清晨空腹抽取5 ml靜脈血。將血液樣品在37 ℃放置約30 min，然后4 ℃冷藏2 h，再1600×g離心10 min，丟棄溶血樣品。再將血清轉(zhuǎn)移到新的試管中，并在20000×g下4 ℃離心10 min，然后將上清液轉(zhuǎn)移到新的EP管中并在-80 ℃下保存直到分析。

1.2.2 酶聯(lián)免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)法檢測外周血中TREM2、CRP和IL-6的含量 按照ELISA試劑盒說明書，測定血清中TREM2、CRP和IL-6的含量。大致步驟為：先將標準或樣品加入96孔板中，孵化并移除；再加入特異性的檢測抗體，孵育和洗滌；然后加入酶結(jié)合物，孵育和洗滌；最后加入終止液，立即在酶標儀的450 nm處測量吸光度值，根據(jù)標準曲線計算結(jié)果。

1.2.3 認知功能和日常行為能力評定 所有研究對象均在MMSE、Hachinski 缺血量、HAMD、CDR量表的基礎(chǔ)上，使用蒙特利爾認知評估量表(Montreal Cognitive Assessment，MoCA)作為主要認知評估工具。MMSE是癡呆篩查的首選工具，可以全面、準確、快速地反映精神狀態(tài)和認知障礙程度。癡呆癥嚴重程度的評估由CDR量表確定。

2 結(jié) 果

2.1 AD患者血清中TREM2、IL-6和CRP水平顯著升高 輕度AD組TREM2的表達水平為(22.56±0.23)ng/L；中度AD組TREM2的表達水平為(24.62±0.29)ng/L；重度AD組TREM2的表達水平為(25.89±0.36)ng/L。對照組的TREM2的表達水平為(20.75±0.63)ng/L；AD組TREM2表達水平明顯升高，與對照組相比，差異有統(tǒng)計學意義(見圖1)。

2.2 TREM2水平與MMSE、MoCA評分的相關(guān)性 為了進一步評估血清TREM2與癡呆嚴重程度之間的相關(guān)性，本研究分析了TREM2水平與MMSE和MoCA評分之間的相關(guān)性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，TREM2水平與MMSE和MoCA評分之間發(fā)生了負相關(guān)(r分別為-0.567和-0.538，P均<0.01)(見圖2)。

2.3 TREM2水平與血清IL-6和CRP的相關(guān)性 AD患者的IL-6和CRP水平升高(P<0.05)。為了進一步評估血清TREM2與AD的相關(guān)性，我們分析了TREM2水平與IL-6和CRP之間的相關(guān)性。TREM2水平與血清IL-6和CRP呈正相關(guān)(r分別為0.405和0.363)(見圖2)。

2.4 TREM2對AD診斷價值的ROC分析 本研究采用ROC曲線來分析TREM2對AD診斷性能。TREM2的曲線下面積為0.893(95%CI：0.808～0.977，P<0.01)。這個結(jié)果提示TREM2可能是一個敏感的生物標志物，可以區(qū)分AD患者和非AD患者(見圖3)。

A：輕度AD患者及正常對照組血清中TREM2的表達水平;B：中度AD患者及正常對照組血清中TREM2的表達水平;C：重度AD患者及正常對照組血清中TREM2的表達水平;D：所有AD受試者TREM2的表達水平及正常對照組血清中TREM2的表達水平

圖1 AD及對照組血清中TREM2的表達水平

A：TREM2水平與MMSE評分的相關(guān)性；B：TREM2水平與MoCA評分的相關(guān)性；C：TREM2水平與IL-6的相關(guān)性；D：TREM2水平與CRP的相關(guān)性

圖2 AD患者血清中TREM2水平與MoCA、MMSE、IL-6和CRP的相關(guān)性

基于TREM2水平的用于區(qū)分AD患者(n=60)和非AD者(n=20)的ROC曲線。曲線下面積(AuC)為0.893(95%CI：0.808～0.977)

圖3 血清TREM2對AD的診斷價值

3 討 論

目前，AD的診斷過分依賴量表評分，具有非典型臨床癥狀的病例可能很復雜，診斷具有挑戰(zhàn)性。因此，迫切需要高度特異性和靈敏性的生物標志物來提高AD的診斷和治療水平。

本研究顯示AD患者的血清中TREM2的表達顯著高于認知功能正常的老年人，TREM2的變化與患者的MMSE和MoCA評分呈負相關(guān)，與CDR評分呈正相關(guān)。說明TREM2的表達水平與認知功能損害程度呈正相關(guān)。提示將來可能通過檢測TREM2的表達來預(yù)測患者的認知功能，TREM2可能有望成為AD的診斷或預(yù)測標志物之一。與本研究類似，先前已有研究表明，TREM2水平升高與癡呆的危險因素-血糖和血脂水平升高有關(guān)[12]。最近有一項研究檢測了非肥胖性糖尿病患者的認知功能，發(fā)現(xiàn)TREM2與非肥胖性糖尿病患者的認知功能相關(guān)[13]。

此外，本研究還發(fā)現(xiàn)AD患者血清IL-6和CRP水平升高，且AD患者外周血TREM2水平與IL6及CRP均呈現(xiàn)顯著正相關(guān)關(guān)系。由于IL-6和CRP是炎癥早期的非特異性指標，因而本研究也進一步表明AD可能與神經(jīng)炎癥有關(guān)，這與先前的研究相一致[14]。

總體而言，這項研究顯示TREM2是診斷AD的有前途的生物標志物。然而，樣本量有限，更大規(guī)模的研究可能會提供更令人信服的結(jié)果。未來的研究將有助于闡明TREM2在神經(jīng)變性疾病中的調(diào)節(jié)作用及其分子機制，驗證其作為生物標志物的作用，并為新藥開發(fā)及AD的臨床管理提供更好的依據(jù)。