李曼，翟成凱，張祥杰

（新鄉(xiāng)市第一人民醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科，河南 新鄉(xiāng) 453000）

臨床上非小細胞肺癌（NSCLC）的發(fā)生，能夠顯著影響到肺癌患者的臨床結(jié)局,導(dǎo)致肺癌患者遠期生存時間的縮短[1,2]。臨床上對于NSCLC 的早期診斷, 能夠在NSCLC 的早期手術(shù)治療或者臨床預(yù)后隨訪方面發(fā)揮作用。腫瘤調(diào)控蛋白的改變，能夠在NSCLC 的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮一定的作用。其中微小RNA-145（miR-145）能夠通過影響到癌細胞的轉(zhuǎn)錄激活程度，加劇癌細胞的核DNA 分裂的風(fēng)險，最終促進肺癌的發(fā)生[3]；癌胚抗原（CEA）是非特異性的腫瘤標(biāo)志物,在癌細胞異常分裂或者癌細胞膜破碎的過程中，CEA 的表達濃度可明顯上升[4]；人多效蛋白（PTN）是癌細胞分化調(diào)控因子，其能夠通過影響到腫瘤細胞定向分化過程,干擾到腫瘤細胞的凋亡過程,導(dǎo)致腫瘤細胞分化成熟的異常[5]。為了揭示miRNA-145 聯(lián)合CEA、PTN 診斷肺癌的臨床價值，從而為臨床上NSCLC 的診療提供參考，本次研究選取我院經(jīng)病理學(xué)檢查確診的67 例NSCLC 患者, 探討了 miRNA-145、CEA、PTN 的表達情況及診斷學(xué)價值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取 2016 年 3 月-2018 年 6 月我院經(jīng)病理學(xué)檢查確診的 67 例NSCLC 患者為NSCLC 組、60 例健康體檢對象作為對照組。NSCLC組，男 39 例、女 28 例,年齡 35~76 歲,平均 57.3±9.0歲,TNM 分期：Ⅰ期 13 例、Ⅱ期 22 例、Ⅲ期 25 例、Ⅳ期 6 例；腫瘤組織學(xué)分級：G1 級 15 例、G2 級 32例、G3 級 20 例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 36 例；病理學(xué)類型：鱗癌 14 例、腺癌 53 例。對照組，男 31 例、女 29 例，年齡 37～75 歲,平均 55.3±12.0 歲。兩組研究對象的年齡、性別比較,差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。入選標(biāo)準：⑴NSCLC 的診斷標(biāo)準參考中華醫(yī)學(xué)會制定的標(biāo)準[6]；⑵患者經(jīng)CT、MRI 檢查及纖支鏡活檢或術(shù)后病理學(xué)檢查證實;⑶對照組為無肺部病變的志愿者；⑷本研究符合《赫爾透辛基宣言》相關(guān)醫(yī)學(xué)倫理規(guī)定，對研究對象的各項資料保密。排除標(biāo)準：⑴具有放化療、免疫學(xué)治療史；⑵類風(fēng)關(guān)、強直性脊柱炎等免疫學(xué)疾病患者;⑶甲狀腺功能障礙患者；⑷合并其他系統(tǒng)的重大疾病。

1.2 CEA、PTN 指標(biāo)檢測 采用一次性靜脈血采集器進行肘部靜脈血采集,采集5ml 靜脈血后自然放置，取上清液體進行檢測。采用貝克曼庫爾特公司UniCel DxI 800 免疫發(fā)光儀器進行CEA、PTN 的檢測，配套試劑盒購自北京九強生物公司。

1.3 miRNA-145 檢測方法 采用組織研磨的方法進行組織細胞中RNA 的提取，在無酶的操作條件下加入焦炭酸二乙酯，測量RNA 濃度后，逆轉(zhuǎn)錄成cRNA 后進行基因擴增，采用primer 5 軟件進行檢測基因的合成和引物設(shè)計，采用GADPH 作為內(nèi)參,miRNA-145 引物 5’CAAGGACCAACTACAACC 3’：下游 5’TGCCTCTTCTTTAATTG3’,經(jīng)歷 45 個循環(huán)后進行曲線溶解，每個孔設(shè)置3 個復(fù)孔，取平均值，Bio-Rad iQ5 實時熒光定量PCR 儀購自美國伯樂公司。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 本研究收集的所有數(shù)據(jù)均在SPSS21.0 中進行統(tǒng)計分析,年齡、血清miRNA-145、CEA、PTN 水平采用進行統(tǒng)計描述,數(shù)據(jù)比較分析應(yīng)用t 檢驗；兩組間性別構(gòu)成比比較采用χ2檢驗；P 值＜0.05 說明差異具有統(tǒng)計學(xué)顯著性。

2 結(jié)果

2.1 NSCLC 組和對照組血清的miRNA-145、CEA、PTN 水平比較 經(jīng)檢驗，NSCLC 患者的血清的miRNA-145、CEA、PTN 水平均高于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；見表1。

表1 NSCLC 組和對照組血清的miRNA-145、CEA、PTN 水平比較（）

組別 n NSCLC 組對照組t 值P 值67 60 miRNA-145（2-△△ct） CEA（ng/ml）1.38±0.44 0.51±0.17 14.380 0.000 16.90±7.40 1.77±0.78 15.753 0.000 PTN（pg/ml）176.48±59.71 75.03±30.17 11.870 0.000

2.2 血清 miRNA-145、CEA、PTN 水平檢測診斷NSCLC 患者的價值 經(jīng)ROC 曲線分析，血清miRNA-145、CEA、PTN 水平診斷 NSCLC 患者的價值見表2、圖1；其中血清 miRNA-145、CEA、PTN 水平聯(lián)合應(yīng)用時, 診斷NSCLC 的靈敏度為96.91%、特異度為80.44%、漏診率為3.09%、誤診率為19.5 6%、ROC 曲線下的面積 AUC 值為 0.924；見表2、圖1。

圖1 血清 miRNA-145、CEA、PTN 水平檢測診斷NSCLC 的ROC 曲線圖

3 討論

臨床上長期的肺泡上皮細胞的損傷修復(fù)過程，能夠在異常突變的癌細胞蓄積的基礎(chǔ)上,加劇局部微小腫瘤病灶的形成速度[7]。在長期吸煙、特殊工作環(huán)境或者長期精神壓力較大的群體中,肺癌特別是 NSCLC 的發(fā)病率可持續(xù)上升[8]。NSCLC 多數(shù)患者臨床診斷時已處于疾病的中晚期,而失去手術(shù)機會, 而通過對于NSCLC 的早期診斷，能夠為NSCLC 創(chuàng)造手術(shù)條件，進而改善肺癌患者的臨床結(jié)局。影像學(xué)檢查能夠在NSCLC 的診斷過程中發(fā)揮作用，但對于微小病灶或者腫瘤特征不典型的病灶，胸部CT 等影像學(xué)檢查診斷的靈敏度較低。血清中腫瘤蛋白, 能夠在NSCLC 的發(fā)生早期即可出現(xiàn)顯著的波動,因此其臨床血清學(xué)水平的檢測能夠為疾病的診斷提供參考。血清中CA125 能夠在NSCLC 的診斷中發(fā)揮參考作用, 但依靠CA125 診斷NSCLC 的假陽性率較高，其診斷的漏診率水平可超過18%以上[9]。本次研究通過對于NSCLC 患者血清中 miRNA-145 聯(lián)合 CEA、PTN 的分析,能夠在揭示NSCLC 發(fā)生機理的同時，為臨床上NSCLC的早期診斷提供參考因子。

表2 血清miRNA-145、CEA、PTN 水平檢測診斷NSCLC 患者的價值

miRNA-145 是微小RNA 家族成員，其能夠在癌基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控,癌細胞上游轉(zhuǎn)錄啟動子的激活方面發(fā)揮作用。miRNA-145 對于腫瘤細胞內(nèi)腫瘤蛋白結(jié)構(gòu)的修飾作用,能夠影響到癌細胞核周邊染色體的分裂速度, 最終促進惡性腫瘤細胞的發(fā)生[10]；CEA 是癌胚抗原家族成員, 主要表達與消化系統(tǒng)及婦科惡性腫瘤中, 在癌細胞異常凋亡的過程中，部分細胞骨架結(jié)構(gòu)的破碎，能夠顯著促進癌細胞內(nèi)CEA 的釋放；PTN 作為多效調(diào)控因子，其能夠在癌細胞的多向分化成熟的過程中發(fā)揮作用，影響到癌細胞的定向分化成熟過程[11]。多數(shù)研究者揭露了CEA 在肺癌患者中的表達情況，認為在肺癌患者血清中CEA 的表達有助于肺癌的診斷及預(yù)后評估[12,13]，但對于 miRNA-145、PTN 的分析較少。

本次研究發(fā)現(xiàn), 在NSCLC 患者血清中，miRNA-145、CEA、PTN 蛋白的表達水平均明顯上升，高于健康對照組群體，統(tǒng)計學(xué)差異顯著，表明miRNA-145、CEA、PTN 的高表達均能夠影響到肺癌的病情進展過程。miRNA-145 的高表達對于肺癌細胞的異常分裂的影響,主要在于其能夠影響到癌細胞轉(zhuǎn)錄開放閱讀區(qū)的翻譯速度,提高腫瘤蛋白的轉(zhuǎn)錄和翻譯速度；CEA 的表達上升主要考慮由于癌細胞的持續(xù)性增殖過程中,部分癌細胞的異常凋亡有關(guān)；PTN 的上升對于肺癌的影響，在于其能夠調(diào)控癌細胞膜內(nèi)側(cè)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,加劇癌細胞的持續(xù)DNA 復(fù)制過程。另外有研究者也發(fā)現(xiàn)，在肺癌患者血清中，miRNA-145 的表達水平可隨著肺癌患者治療轉(zhuǎn)歸的惡化而明顯上升,在肺癌患者復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率較高或者病死率較高的群體中，miRNA-145 的表達水平可明顯上升[14-16]。本次研究還重點探討了miRNA-145、CEA、PTN 的診斷學(xué)價值，發(fā)現(xiàn)在肺癌患者中,采用 miRNA-145、CEA、PTN 單獨診斷肺癌的靈敏度或者特異度均具有一定的局限, 雖然miRNA-145 診斷肺癌的靈敏度或者特異度較為理想,但CEA、PTN 單獨診斷肺癌的靈敏度較低，不足50%，靈敏度的下降能夠影響到早期不典型肺癌的檢出率。而通過聯(lián)合 miRNA-145、CEA、PTN 指標(biāo)進行診斷,可以顯著提高肺癌的整體診斷靈敏度和特異度水平，降低肺癌診斷的漏診率和誤診率。但其聯(lián)合診斷仍然存在漏診和誤診的可能,診斷的誤診率仍然接近20%。提示臨床上對于肺癌的高危人群，必要時可以通過聯(lián)合影像學(xué)檢查，進而提高肺癌的診斷效能。

綜上所述, 在 NSCLC 患者血清中，miRNA-145、CEA、PTN 的表達明顯上升，同時 miRNA-145聯(lián)合CEA、PTN 診斷NSCLC 可在一定程度上彌補單項指標(biāo)的不足,在保證診斷特異度的情況下提高靈敏度。