劉 紅，景 艷，鄒德琴，侯雄軍，彭洪薇，，周 健，黎玉華，熊冬生，溫金華，魏筱華，

(1. 南昌大學(xué)藥學(xué)院，2. 南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部，3. 江西省人民醫(yī)院藥學(xué)部，江西 南昌 330006; 4. 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院血液學(xué)研究所, 天津 300020)

他克莫司(Tacrolimus)又名FK506，由于其較強(qiáng)免疫抑制作用及較低的不良反應(yīng)發(fā)生率，在目前臨床中已經(jīng)逐漸取代環(huán)孢素，成為器官移植術(shù)后應(yīng)用的最為廣泛的抗免疫排斥藥物。然而該藥物治療窗狹窄，存在較大個(gè)體化差異， 價(jià)格昂貴且需長期堅(jiān)持服用，給患者帶來沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。FK506主要由肝腸中的CYP氧化酶(主要是CYP3A4和CYP3A5)代謝，是糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)的底物[1]。研究證明，五酯膠囊與FK506聯(lián)用能明顯提高正常人或移植術(shù)后患者的FK506血藥濃度及生物利用度，同時(shí)可改善肝功能和降低不良反應(yīng)發(fā)生率，而發(fā)揮作用的是五酯片中所含的五味子木脂素。五味子木脂素能抑制CYP3A活性，同時(shí)也是P-gp抑制劑，而五味子甲素(schisandra A，Sch-A)是五味子木脂素中的主要成分，其通過介導(dǎo)CYP3A酶的代謝對(duì)FK506起增效作用[2]。靛藍(lán)是青黛的主要成分，研究證明對(duì)肝藥酶表達(dá)有調(diào)控作用[3]。我們從靛藍(lán)中提取到其有效成分——靛玉紅，PHⅡ-7是以靛玉紅為模板合成的衍生物，它可調(diào)節(jié)細(xì)胞表面ABCB1的表達(dá)，揭示核受體蛋白對(duì)ABCB1的激活作用，體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證明，在有效劑量下對(duì)正常細(xì)胞毒性較低[4]。

結(jié)合FK506的體內(nèi)過程及對(duì)PHⅡ-7的前期研究結(jié)果，我們推測PHⅡ-7可能對(duì)FK506具有增效作用，并且可能是通過核受體(pregnane X receptor，PXR)-CYP3A5/ABCB1的信號(hào)通路影響FK506的轉(zhuǎn)運(yùn)及代謝，從而提高FK506的療效。本研究以五酯膠囊的有效成分Sch-A為陽性對(duì)照，通過體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)初步探索PHⅡ-7對(duì)FK506的增效作用及其機(jī)制，旨在為今后開發(fā)新的FK506節(jié)約劑提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 動(dòng)物♂ SD大鼠，清潔級(jí)，體質(zhì)量(270～290) g，由卡文斯公司提供，許可證號(hào)：SCXK(蘇)2016-0010。

1.2 藥物PHⅡ-7由我室自主合成，由DMSO溶解成50 mmol·L-1母液，Sch-A(S818221)購自上海麥克林生化科技有限公司，由DMSO溶解成20 mmol·L-1母液，置-20 ℃冰箱備用，用完全培養(yǎng)基稀釋母液至所需藥物濃度，其中DMSO的終濃度<1%。FK506(T101159)購自上海阿拉丁生化科技有限公司，原藥用55% PEG400+25% 丙二醇+20%水溶解成所需溶度使用。

1.3 培養(yǎng)基DMEM培養(yǎng)基(北京索萊寶公司)；胎牛血清(澳洲Gibco公司)。

1.4 其他試劑MTT(M2128)購自美國Sigma公司；RNA提取試劑(003340)購自美國Axygen公司；逆轉(zhuǎn)錄(RR037A)和RT-qPCR試劑盒(RR064A)購自日本TaKaRa公司；由華大基因公司合成β-actin、PXR、ABCB1、CYP3A4、CYP3A5引物；兔抗人β-actin(20536-1-AP)購自武漢三鷹公司；ABCB1(129450)、CYP3A4(124921)、CYP3A5(108624)抗體購自美國Abcam公司；鼠抗人PXR(61816)抗體購自美國Novus公司；山羊抗兔IgG(ZB-5301)、山羊抗鼠IgG(ZB-2301)購自北京中杉金橋公司；BCA定量試劑盒(E112-01)購自南京諾唯贊公司；

1.5 細(xì)胞培養(yǎng)HepG2(人肝癌細(xì)胞株)、LS174T(人結(jié)腸癌細(xì)胞株)由上海富衡細(xì)胞庫提供。孵箱條件：37 ℃，5% CO2。

1.6 實(shí)驗(yàn)儀器QT-2A旋渦混合器(天津恒祥泰科技公司)；高效液相色譜儀(美國安捷倫公司)；細(xì)胞培養(yǎng)箱(濟(jì)南宇鑫生物公司)；倒置顯微鏡(美國賽默飛公司)；酶標(biāo)儀(上海精其儀器有限公司)；高速低溫離心機(jī)(德國艾本德公司)；q-PCR儀(美國應(yīng)用生物公司)；電泳儀(美國伯樂公司)。

2 方法

2.1 大鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)

2.1.1動(dòng)物處理 將8只大鼠隨機(jī)均分為對(duì)照組(FK506+Sch-A)，實(shí)驗(yàn)組(FK506+PHⅡ-7)，每組4只，灌胃給藥，給藥前大鼠禁食8 h(自由飲水)，對(duì)照組給予FK506：SchA為1.89 mg·kg-1：10 mg·kg-1，實(shí)驗(yàn)組給予FK506：PHⅡ-7為1.89 mg·kg-1：3 mg·kg-1，僅給藥1次，給藥4 h后給予動(dòng)物飼料。兩組大鼠于0、0.167、0.5、0.75、1、2、3、4、6、8、12和24 h由大鼠頸靜脈穿刺采血，收集全血約0.2 mL，置于EDTA抗凝管，血液樣本分析前存放于-80 ℃冰箱。

2.1.2檢測條件 色譜條件 AcclaimTM120 C18色譜柱，250×4.6 mm，(5 μm)；流動(dòng)相：甲醇- 0.1% 甲酸- 104mmol·L-1醋酸銨(80 ∶15 ∶5)；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量6 μL。

質(zhì)譜條件 電噴霧離子化源四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)；離子源溫度 550 ℃；離子化電壓 5 500 V；源內(nèi)壓力 70 psi(氣體1)，60 psi(氣體2)；噴撞氣：8 psi；多重反應(yīng)監(jiān)測模式。乙腈(acetonitrile)作為內(nèi)標(biāo)溶液，具體檢測條件如Tab 1所示。

Tab 1 Different drug testing conditions

2.1.3樣本處理 將血樣高速離心后，取1支1.5 mL離心管，加入20 μL血漿和180 mL 乙腈溶液后，混旋3 min后，8 ℃，13 000 r·min-1條件下，離心15 min，取6 μL上機(jī)檢測。

2.2 細(xì)胞活力檢測接種7.5×104個(gè)每毫升狀態(tài)良好的HepG2和LS174T細(xì)胞于96孔板中，每孔200 μL(約15 000個(gè)/孔)，隔天，待融合率為80%左右時(shí)，經(jīng)(0～30 μmol·L-1)PHⅡ-7和(0～60 μmol·L-1)Sch-A處理，每個(gè)濃度設(shè)置3個(gè)重復(fù)孔，陰性對(duì)照組用同體積的培養(yǎng)基代替，使得每孔的終體積為200 μL，24 h后，加入20 μL MTT溶液，避光孵育4 h后棄除上清，加入150 μL DMSO溶液，震蕩混勻，于酶標(biāo)儀檢測490 nm波長處吸光度。計(jì)算3次重復(fù)實(shí)驗(yàn)的平均半數(shù)抑制濃度IC50值。

各處理的物候期與生育期詳見表1。由表1可知對(duì)照田的生育期為142d，示范田生育期為136d。雖然播種日期相同，但是由于所鋪地膜不同，加之可降解地膜鋪得過早，在玉米抽雄期地膜已經(jīng)開始降解，而此時(shí)又受干旱的影響，使玉米的抽雄期、吐絲期及成熟期也有不同體現(xiàn)，對(duì)照田的抽雄期、吐絲期明顯早于示范田。這說明可降解地膜的保溫保墑效果在玉米生長的前期與普通地膜幾乎沒有差別，而后期對(duì)照田的玉米成熟期晚一些，這有利于有機(jī)質(zhì)的積累，提高了玉米的品質(zhì)。之所以會(huì)有這樣的差異，可能與雨水有關(guān)?？山到獾啬び捎诮到膺^早，保溫保墑效果比普通地膜弱。

2.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測PXR/CYP3A4/3A5/ABCB1基因mRNA的表達(dá)接種2.5×105個(gè)每毫升狀態(tài)良好的HepG2和LS174T細(xì)胞于6孔板中，每孔2 mL，其中實(shí)驗(yàn)分組進(jìn)行如下處理：9 μmol·L-1PHⅡ-7孵育HepG2細(xì)胞24 h，18 μmol·L-1PHⅡ-7分別孵育HepG2細(xì)胞24 h或72 h；3.5 μmol·L-1PHⅡ-7孵育LS174T細(xì)胞24 h，7 μmol·L-1PHⅡ-7分別孵育LS174T細(xì)胞24 h或48 h；20 μmol·L-1Sch-A孵育HepG2細(xì)胞24 h，40 μmol·L-1Sch-A分別孵育HepG2細(xì)胞24 h或48 h；22 μmol·L-1Sch-A孵育LS174T細(xì)胞24 h，44 μmol·L-1Sch-A分別孵育LS174T細(xì)胞24 h或48 h，收集不同組別細(xì)胞，提取細(xì)胞總RNA，cDNA合成根據(jù)TaKaRa cDNA合成試劑盒說明操作，RT-qPCR檢測細(xì)胞內(nèi)各個(gè)基因表達(dá)水平，內(nèi)參為β-actin。每個(gè)組別設(shè)置3個(gè)重復(fù)孔，根據(jù)比較Ct值法獲得不同組別相關(guān)基因的表達(dá)值。

本研究所用的引物序列信息由Gene-Bank數(shù)據(jù)庫提供，采用Primer 6.0軟件設(shè)計(jì)，經(jīng)BLAST驗(yàn)證后，由華大基因公司合成。如Tab 2所示。

Tab 2 Primer sequence for real time PCR

2.4 免疫印跡法檢測PXR/CYP3A4/3A5/ABCB1基因蛋白的表達(dá)接種2.5×105個(gè)每毫升狀態(tài)良好的HepG2和LS174T細(xì)胞于6孔板中，每孔2 mL，其中實(shí)驗(yàn)分組進(jìn)行如下處理：9 μmol·L-1PHⅡ-7孵育HepG2細(xì)胞24 h，18 μmol·L-1PHⅡ-7分別孵育HepG2細(xì)胞24 h和72 h；3.5 μmol·L-1PHⅡ-7孵育LS174T細(xì)胞24 h，7 μmol·L-1PHⅡ-7分別孵育LS174T細(xì)胞24 h和48 h；20 μmol·L-1Sch-A孵育HepG2細(xì)胞24 h，40 μmol·L-1Sch-A分別孵育HepG2細(xì)胞24 h和48 h；22 μmol·L-1Sch-A孵育LS174T細(xì)胞24 h，44 μmol·L-1Sch-A分別孵育LS174T細(xì)胞24 h和48 h。收集不同組別細(xì)胞，提取總蛋白后定量，再用于Western blot檢測。以每孔100 μg蛋白量上樣，進(jìn)行電泳，轉(zhuǎn)膜，封閉后分別與PXR(1 ∶1 000)、ABCB1(1 ∶1 000)、CYP3A4(1 ∶5 000)、CYP3A5(1 ∶10 000)及β-actin(1 ∶10 000)抗體溶液于4 ℃孵育，過夜，再與二抗室溫孵育1 h后，化學(xué)發(fā)光法發(fā)光曝片。

3 結(jié)果

3.1 PHⅡ-7和Sch-A對(duì)大鼠FK506藥動(dòng)學(xué)的影響根據(jù)檢測結(jié)果，以采血時(shí)間為橫坐標(biāo)，F(xiàn)K506血藥濃度為縱坐標(biāo)，繪制兩組大鼠的藥-時(shí)曲線(Fig 1)，大鼠血漿中的FK506藥動(dòng)學(xué)參數(shù)計(jì)算結(jié)果如Tab 3所示。

結(jié)果顯示，與FK506+Sch-A組比較，F(xiàn)K506+PHⅡ-7組 AUC0-t、CL明顯增加(P<0.05)；提示PHⅡ-7像Sch-A一樣，可提高FK506 Cmax，增加AUC0-t、CL。

Fig 1 Blood concentration-time curve of FK506 in rats of FK506+Sch-A and FK506+PHⅡ-7 combination group n=4)

Tab 3 Pharmacokinetic parameters of FK506 in rats of

*P<0.05vsFK506+Sch-A group

3.2 PHⅡ-7和Sch-A對(duì)細(xì)胞的毒性作用以藥物濃度為橫坐標(biāo)，生存率為縱坐標(biāo)，繪制細(xì)胞生存曲線，觀察藥物對(duì)細(xì)胞生長的抑制作用。結(jié)果顯示，PHⅡ-7和Sch-A均會(huì)抑制HepG2或LS174T細(xì)胞生長，HepG2和LS174T細(xì)胞關(guān)于PHⅡ-7的IC50分別為(17.82±1.33) μmol·L-1和(7.17±0.37) μmol·L-1，關(guān)于Sch-A的IC50分別為(40.38±4.1) μmol·L-1和(44.1±1.94) μmol·L-1(Fig 2)。

3.4 PHⅡ-7和Sch-A對(duì)HepG2和LS174T的PXR/CYP3A4/3A5/ABCB1基因蛋白水平的影響將(0～18 μmol·L-1)PHⅡ-7和(0～44 μmol·L-1)Sch-A分別作用于HepG2和LS174T細(xì)胞，作用24、48或72 h后，與control組相比，PHⅡ-7和Sch-A加藥處理后，HepG2和LS174T細(xì)胞的PXR、CYP3A4、CYP3A5和ABCB1基因蛋白表達(dá)降低，且呈劑量依賴性與時(shí)間依賴性(Fig 4)。

Fig 2 Effect of PHⅡ-7 and Sch-A on HepG2 or LS174T, Sch-A as positive control n=3)

A：HepG2 cells were exposed to different concentrations of PHⅡ-7；B：HepG2 cells were exposed to different concentrations of Sch-A；C：LS174T cells were exposed to different concentrations of PHⅡ-7；D：LS174T cells were exposed to different concentrations of Sch-A.

3.5 PHⅡ-7對(duì)他克莫司作用的信號(hào)通路根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，PHⅡ-7對(duì)他克莫司作用機(jī)制為：PHⅡ-7可通過調(diào)節(jié)PXR降低CYP3A4、CYP3A5、ABCB1基因的表達(dá)，從而影響FK506的轉(zhuǎn)運(yùn)與代謝，提高血藥濃度。相關(guān)信號(hào)通路如下(Fig 5)。

4 討論

FK506是目前療效好無腎毒性的一線免疫抑制劑，但長期應(yīng)用易引起糖尿病、高血壓等并發(fā)癥，且藥物價(jià)格高。因此，降低移植術(shù)后FK506的用藥劑量有十分重要的臨床意義和經(jīng)濟(jì)學(xué)價(jià)值。

本實(shí)驗(yàn)首次通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí)PHⅡ-7對(duì)FK506具有增效作用，與FK506“節(jié)約劑”五酯膠囊的有效成分Sch-A對(duì)比發(fā)現(xiàn)，PHⅡ-7較Sch-A有更強(qiáng)的增效作用。體外實(shí)驗(yàn)表明，PHⅡ-7可通過調(diào)節(jié)PXR降低CYP3A4、CYP3A5、ABCB1基因的表達(dá)，從而影響FK506的轉(zhuǎn)運(yùn)與代謝，提高血藥濃度。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，小分子化合物PHⅡ-7作為FK506增效劑具有較好的開發(fā)前景，我們今后將進(jìn)一步完善實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，探索PHⅡ-7調(diào)節(jié)上述基因表達(dá)的具體機(jī)制。

FK506血藥濃度差異的主要受個(gè)體間CYP3A酶基因表達(dá)強(qiáng)弱的影響，CYP3A4和CYP3A5是CYP3A家族中的主要成員，富集于人的肝臟與小腸，參與包括FK506在內(nèi)的50%以上臨床藥物的代謝[5-6]。各種原因引起的CYP3A4/CYP3A5表達(dá)降低將增加FK506的體內(nèi)暴露量，提高藥物濃度[7]。大量研究證明，CYP3A5基因多態(tài)性對(duì)FK506體內(nèi)代謝過程影響更大[8-9]。除CYP3A5外，在胃腸道中廣泛表達(dá)的ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白也會(huì)對(duì)FK506的濃度產(chǎn)生影響，其中最具代表性的就是ABCB1。體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)均已證明ABCB1對(duì)FK506藥動(dòng)學(xué)特性有一定影響[10]。因此本研究以CYP3A5/ABCB1作為研究靶點(diǎn)。

PXR屬于核受體中的一員，可調(diào)節(jié)細(xì)胞色素基因及藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的表達(dá)。藥物可視作PXR配體，吸收進(jìn)入細(xì)胞并與之結(jié)合，激動(dòng)PXR受體，與視黃醛X受體(retinaldehyde X receptor，RXR)發(fā)生聚合反應(yīng)形成復(fù)合物，該產(chǎn)物轉(zhuǎn)移至CYP3A5或ABCB1基因上游調(diào)控部位，從而影響CYP3A5和ABCB1基因的表達(dá)[11]。

Fig 3 Effect of PHⅡ-7 and Sch-A on different gene mRNA in HepG2 and LS174T n=3)

A：HepG2 cells were exposed to 9 or 18 μmol·L-1PHⅡ-7 for 24 h；B：HepG2 cells were exposed to 18 μmol·L-1PHⅡ-7 for 24 or 72 h；C：LS174T cells were exposed to 3.5 or 7 μmol·L-1PHⅡ-7 for 24 h；D：LS174T cells were exposed to 7 μmol·L-1PHⅡ-7 for 24 or 48 h；E：HepG2 cells were exposed to 20 or 40 μmol·L-1Sch-A for 24 h；F：HepG2 cells were exposed to 40 μmol·L-1Sch-A for 24 or 48 h；G：LS174T cells were exposed to 22 or 44 μmol·L-1Sch-A for 24 h；H：LS174T cells were exposed to 44 μmol·L-1Sch-A for 24 or 48 h．

Fig 4 Effect of PHⅡ-7 and Sch-A on different gene protein in HepG2 and LS174T cells n=3)

A：HepG2 cells were exposed to 9 or 18 μmol·L-1PHⅡ-7 for 24 h；B：HepG2 cells were exposed to 18 μmol·L-1PHⅡ-7 for 24 or 72 h；C：HepG2 cells were exposed to 20 or 40 μmol·L-1Sch-A for 24 h；D：HepG2 cells were exposed to 40 μmol·L-1Sch-A for 24 or 48 h；E：LS174T cells were exposed to 3.5 or 7 μmol·L-1PHⅡ-7 for 24 h；F：LS174T cells were exposed to 7 μmol·L-1PHⅡ-7 for 24 or 48 h；G：LS174T cells were exposed to 22 or 44 μmol·L-1Sch-A for 24 h；H：LS174T cells were exposed to 44 μmol·L-1Sch-A for 24 or 48 h．

Fig 5 Schemic pathway of PHⅡ-7 on tacrolimus pharmacokinetic pathway in vivo and in vitro

五酯膠囊是中藥南五味子經(jīng)醇提獲得的脂溶性活性產(chǎn)物，其主要成分為Sch-A[2]。大量的臨床研究已發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)K506與五酯膠囊聯(lián)用后血藥濃度明顯升高，目前我國臨床上器官移植受者合用FK506和五酯膠囊較為普遍。五酯膠囊不僅可升高FK506濃度，還可能降低FK506慢性腎臟毒性的風(fēng)險(xiǎn)[12]。然而五酯膠囊對(duì)FK506的增效作用影響因素較多：五酯膠囊有效成分中雖然Sch-A抑制CYP450酶系作用最強(qiáng)，但五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素等均具有抑制P-gp/CYP3A酶系的活性[13]，在臨床應(yīng)用過程中可能會(huì)帶來更大的個(gè)體差異，且目前缺乏準(zhǔn)確方便的定量方法前瞻性地系統(tǒng)評(píng)價(jià)五酯膠囊對(duì)他克莫司的增效作用，不利于制定患者的聯(lián)合用藥方案。本實(shí)驗(yàn)主要采取國家藥典中載明的五酯膠囊主要有效成分Sch-A作為陽性對(duì)照藥物。開發(fā)新型的他克莫司小分子增效藥物可克服目前五酯膠囊由于成分復(fù)雜帶來的不確定性，有利于制定規(guī)范的個(gè)體化聯(lián)合用藥方案，減輕腎移植患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。

聯(lián)合我們的前期研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)歸龍薈丸中主要成分青黛對(duì)肝藥酶表達(dá)具有調(diào)節(jié)作用，靛藍(lán)是青黛的主要成分，PHⅡ-7作為靛藍(lán)中有效成分-靛玉紅的衍生物，已有實(shí)驗(yàn)證明，它可升高活性氧水平，抑制ABCB1表達(dá)，且體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)證實(shí)有效作用劑量下對(duì)細(xì)胞毒性較低[14]，因此推測PHⅡ-7可能對(duì)FK506也有增效作用。

FK506用于肝移植抗排斥的推薦劑量為0.1～0.3 mg·kg-1，折算成大鼠等效劑量為0.63～1.89 mg·kg-1[15]，本實(shí)驗(yàn)取1.89 mg·kg-1。通過大鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)及藥代動(dòng)力學(xué)分析，表明PHⅡ-7可以提高FK506血藥濃度。然后利用分子手段，以人肝癌細(xì)胞株HepG2和結(jié)腸癌細(xì)胞株LS174T為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，發(fā)現(xiàn)在抑制作用的濃度范圍內(nèi)，PHⅡ-7對(duì)PXR、CYP3A4、CYP3A5、ABCB1 mRNA的表達(dá)存在一定的抑制作用，且在蛋白水平得到證實(shí)；構(gòu)建CYP3A5、ABCB1啟動(dòng)子，分別與表達(dá)PXR質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染，進(jìn)一步證明PXR對(duì)CYP3A5/ABCB1表達(dá)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用，利福平有較強(qiáng)的PXR激活效應(yīng)，在研究藥物對(duì)核受體信號(hào)通路調(diào)節(jié)作用時(shí)(尤其是對(duì)核受體抑制時(shí))常作為陽性對(duì)照[16]，探索藥物通過PXR對(duì)下游蛋白轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用機(jī)制，這種效應(yīng)可被酮康唑抑制，鄧蓉蓉等[17]通過類似的報(bào)告基因分析，確定了白黎蘆醇(RES)作為PXR激活劑。

FK506是CYP3A和P-gp的底物，而Sch-A作為五酯膠囊的有效成分，也是兩者底物，與該藥聯(lián)合應(yīng)用時(shí)會(huì)產(chǎn)生競爭性作用，抑制其代謝與轉(zhuǎn)運(yùn)，從而提高其血藥濃度[2]。本實(shí)驗(yàn)首次對(duì)靛玉紅衍生物PHⅡ-7對(duì)FK506增效作用及其機(jī)制闡述，目前關(guān)于PHⅡ-7對(duì)FK506的增效作用尚未見報(bào)道，本研究從細(xì)胞、動(dòng)物水平多角度首次系統(tǒng)闡述PHⅡ-7通過核受體信號(hào)通路對(duì)CYP3A5/ABCB1表達(dá)的調(diào)節(jié)作用，證實(shí)PHⅡ-7可作為潛在的FK506增效劑進(jìn)一步開發(fā)，也可為開發(fā)新的FK506增效劑提供參考。