馬馥薈，史昊，馬玉潔，田成成，聞爽，吳曌婷，張向陽，宋文妍

(鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心/河南省生殖與遺傳重點實驗室，河南 鄭州 450052)

在孕齡人群中，男性因素不育約占不孕因素的1/3[1]。對于生精功能嚴(yán)重低下的患者，微量精子冷凍技術(shù)的創(chuàng)新為此類稀少精子者提供了更好的保障，成為此類患者生育親代的唯一的希望[2]。相關(guān)研究表明SperMagic在宮腔內(nèi)人工授精、常規(guī)補救卵胞質(zhì)內(nèi)單精子注射(intracytoplasmic sperm injection，ICSI)助孕的輔助生殖技術(shù)中起積極作用，有效改善精子活力[3-4]。本研究將通過回顧性分析2015年3月至2018年4月于鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院生殖中心采用SperMagic改善凍融微量精子活動力行ICSI助孕的87例新鮮周期臨床數(shù)據(jù)，探討其在提高凍融微量精子活力，保存男性生育力方面的臨床影響。

1 對象與方法

1.1 研究對象女方排除高齡(年齡≤38歲)、子宮畸形、內(nèi)分泌異常、多囊卵巢綜合征、子宮內(nèi)膜異位癥、遺傳及重大疾病等不孕因素，男方排除遺傳因素、畸形精子、重大疾病等因素。無精子癥診斷標(biāo)準(zhǔn)為3次精液分析無精，經(jīng)皮附睪精子抽吸術(shù)(testicular sperm aspiration，TESA)、經(jīng)皮睪丸穿刺精子抽吸術(shù)(percutaneous epididymal sperm aspiration，PESA)診斷性穿刺活檢可見成熟精子。收集2015年3月至2018年4月因無精癥行微量精子冷凍保存、于女方取卵日使用凍精進行ICSI助孕患者的資料共87個周期，患者對本研究表示理解與支持，數(shù)據(jù)僅用于科學(xué)研究，倫理審查編號為：2019-KY-78。

1.2 分組根據(jù)有無經(jīng)SperMagic處理進行初分組：SperMagic組，經(jīng)SperMagic處理，44個周期；Control組，未經(jīng) SperMagic處理，43個周期。進一步根據(jù)精子來源分組：A1組，經(jīng)SperMagic處理TESA，33個周期；A2組，經(jīng)SperMagic處理PESA，11個周期；B1組，未經(jīng)SperMagic處理TESA，6個周期；B2組，未經(jīng)SperMagic處理PESA，37個周期。

1.3 微量精子的獲取及凍融TESA、PESA組織加入1 mL SpermRinse培養(yǎng)液，觀察有精者，采用稀少精子冷凍方案冷凍[2]。解凍時，觀察到D級精子行ICSI前加入SperMagic，孵育10 min后觀察，找到活力好的精子行ICSI注射。

1.4 觀察指標(biāo)比較兩組間實驗室指標(biāo)如2個原核(pronucleus，2PN)受精率、總受精率、卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎形成率；妊娠結(jié)局如生化妊娠率、種植率、早期流產(chǎn)率、臨床妊娠率等。

2 結(jié)果

2.1 基礎(chǔ)資料SperMagic組女方年齡、體質(zhì)量指數(shù)、抗繆勒管激素、促性腺激素總量、扳機日內(nèi)膜厚度指標(biāo)與Control組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)。見表1。SperMagic組與Control組男方年齡、不孕年限、男方基礎(chǔ)內(nèi)分泌(黃體生成素、睪酮、泌乳素、雌激素)指標(biāo)比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)；SperMagic組卵泡刺激素高于Control組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表1 SperMagic組與Control組女方基線資料情況比較[M(P25，P75)]

表2 SperMagic組與Control組男方基線資料情況比較[M(P25，P75)]

2.2 實驗室指標(biāo)情況SperMagic組總受精率低于Control組，卵裂率、D3優(yōu)質(zhì)胚胎率高于Control組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)。見表3。各亞組間各項指標(biāo)比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)。見表4。

表3 SperMagic組與Control組實驗室指標(biāo)情況比較

注：PN—原核；D3—授精后第3天。

表4 各亞組實驗室指標(biāo)比較

注：PN—原核；D3—授精后第3天。

3 討論

凍融微量精子行ICSI的輔助生殖技術(shù)為無精癥患者生育親生子代帶來了希望，其最大程度增大了此類患者獲得子代的可能性[5]。目前，已有研究證明在極度嚴(yán)重少、弱精癥、無精癥患者精液中添加SperMagic可明顯改善精子活力[6]，且不會影響胚胎早期發(fā)育[7]。本研究回顧性分析了SperMagic在此類助孕技術(shù)中的實驗室結(jié)局，以期對臨床應(yīng)用SperMagic的療效評估提供一定的幫助。

有研究認(rèn)為，睪丸精子和附睪精子的ICSI 結(jié)局沒有差別[8-9]，國內(nèi)外多篇文獻報道表明凍融睪丸、附睪精子與新鮮精子行ICSI注射后的受精率、臨床妊娠率及流產(chǎn)率差異無統(tǒng)計學(xué)意義[10-11]。本研究結(jié)果顯示，SperMagic組卵裂率較Control組高，分析原因是SperMagic的加入很好的篩選了具有較高DNA完整性或較低DNA碎片的精子，此類精子的形態(tài)和染色質(zhì)結(jié)構(gòu)已基本成熟，遺傳物質(zhì)完整可使卵子正常受精和卵裂[12]。

SperMagic作為美國專利產(chǎn)品，其有效成分作用于精子膜受體，通過膜Ca2+通道增強Ca2+內(nèi)流，從而增加微管的動態(tài)運動，最終加快精子的前進速度。研究報道，SperMagic具有顯著提高冷凍解凍、TESE、PESA、少精子、弱精子的進展和運動能力，提高男性不孕因素治療周期中的臨床結(jié)局[13]。

本研究的創(chuàng)新之處在于，對稀少精子解凍后加入SperMagic的實驗及臨床結(jié)局進行統(tǒng)計學(xué)分析，細化評估了SperMagic的臨床效應(yīng)。本研究結(jié)果顯示，SperMagic在微量精子解凍周期中的臨床應(yīng)用對于卵裂率差異有統(tǒng)計學(xué)意義，提示其具有臨床積極作用。SperMagic組卵泡刺激素高于Control組，提示臨床操作者可能更傾向于對由卵泡刺激素所致活力差的精子使用SperMagic。另本研究結(jié)果提示SperMagic可能影響成熟卵子受精及優(yōu)質(zhì)胚胎形成，受精率及優(yōu)質(zhì)胚胎率差異有統(tǒng)計學(xué)意義。本研究樣本量較小，仍需進一步的大樣本數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計求證。

綜上所述，對于因無精癥需提前行微量精子凍存助孕的患者，使用SperMagic提高其精子活力，有利于改善實驗室卵裂率及D3優(yōu)質(zhì)胚胎率。