高珍珍，穆祥，高魁，呂博，楊英*

(1. 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010018；2. 北京農(nóng)學(xué)院，北京 102206；3. 內(nèi)蒙古鄂爾多斯市東勝區(qū)成郊動物衛(wèi)生監(jiān)督站，內(nèi)蒙古 鄂爾多斯 017000)

仔豬斷奶后因其各項生理機(jī)能發(fā)育尚未完全，胃酸分泌不足，內(nèi)源性消化酶活性較低，加之?dāng)嗄?、換料及飼養(yǎng)環(huán)境等發(fā)生變化，容易引起斷奶仔豬應(yīng)激，表現(xiàn)為胃腸道菌群失衡、腹瀉、生長緩慢、免疫力下降，嚴(yán)重者可導(dǎo)致死亡，給養(yǎng)殖戶造成重大的經(jīng)濟(jì)損失。此階段豬群的各類疾病曾常用抗生素來預(yù)防控制，然而抗生素的長期大量使用已使豬群病原菌產(chǎn)生了耐藥性，造成疾病防控的效果不理想，同時抗生素的殘留也給人類健康帶來諸多影響。許多國家已經(jīng)開始限制抗生素在動物飼糧中的使用，因此，開發(fā)安全高效的防控疾病和提高生產(chǎn)性能的藥物與添加劑，在養(yǎng)豬業(yè)生產(chǎn)中顯得尤為重要。中草藥由于具有安全、毒副作用低、資源豐富等優(yōu)點現(xiàn)被廣泛應(yīng)用于仔豬飼糧中[1-2]。謝紅兵等[3]將從白術(shù)、黃芪、牛膝中提取的多糖添加到飼糧中用于改善腸道內(nèi)環(huán)境，降低腹瀉率，提高仔豬的生長性能。

課題組前期研究結(jié)果表明，溫腎益精散(主要組成：五味子、熟地黃、肉蓯蓉等)可以顯著提高腎陽虛模型大鼠生長性能[4]。因仔豬在斷奶期間生長特點和疾病發(fā)生規(guī)律與腎陽虛病證相似，為此，本研究將進(jìn)一步探討飼糧中添加不同劑量溫腎益精散對斷奶仔豬生長性能及免疫水平的影響，為溫腎益精散在斷奶仔豬飼糧中的臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗所用溫腎益精散由北京農(nóng)學(xué)院提供，以五味子、熟地黃、肉蓯蓉為主要功能性成分。

1.2 試驗設(shè)計

選擇120頭、35日齡、平均體重(10.05±0.25)kg的“杜長大”斷奶仔豬，隨機(jī)分為3組：空白對照組，溫腎益精散高劑量組，溫腎益精散低劑量組。每組4個重復(fù)，每個重復(fù)10頭斷奶仔豬，對照組飼喂基礎(chǔ)日糧(由正大集團(tuán)提供)，溫腎益精散高、低劑量組分別在飼喂基礎(chǔ)日糧的基礎(chǔ)上，添加0.5%、0.25%的溫腎益精散。

1.3 飼養(yǎng)管理

動物試驗在內(nèi)蒙古鄂爾多斯市德鑫種豬場進(jìn)行。試驗前1周對圈舍進(jìn)行消毒。試驗豬飼養(yǎng)在封閉式斷奶仔舍內(nèi)，自由采食和飲水，按常規(guī)養(yǎng)殖場操作規(guī)范進(jìn)行管理和免疫。每日分上、下午、晚上3次觀察各重復(fù)豬只生長及采食情況，并記錄每日采食量。適應(yīng)性飼養(yǎng)一周，試驗期為40 d。

1.4 指標(biāo)測定及方法

1.4.1 生長性能指標(biāo)

試驗期，記錄每個重復(fù)的初始體重和終末體重，計算每頭仔豬的平均日增重(ADG)。記錄每個重復(fù)的喂料量和剩料量，計算每頭仔豬的平均日采食量(ADFI)。料重比(F/G) 為平均日采食量除以平均日增重。

試驗第0，30及40天，分別從每個重復(fù)中隨機(jī)選擇體況相近的2頭仔豬，于前腔靜脈處采血，室溫靜置30 min，3 000 r/min離心10 min，分離血清，-20 ℃下冷凍保存。胰島素樣生長因子1(IGF-1)、生長激素(GH)、生長抑素(SST)試驗操作嚴(yán)格按照試劑盒(由北京利德曼生化技術(shù)有限公司提供) 說明書進(jìn)行。

1.4.2 免疫相關(guān)指標(biāo)

試驗第0，30及40天，分別從每個重復(fù)中隨機(jī)選擇體況相近的2頭仔豬，于前腔靜脈處采血，室溫靜置30 min，3 000 r/min 離心10 min，分離血清，-20 ℃下冷凍保存。免疫球蛋白A(IgA)，免疫球蛋白G(IgG)，免疫球蛋白M(IgM)，白介素2(IL-2)和白介素4(IL-4)，試驗操作嚴(yán)格按照試劑盒(由北京利德曼生化技術(shù)有限公司提供) 說明書進(jìn)行。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)，用Duncan氏法進(jìn)行多重比較，P<0.05為差異顯著。試驗結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(X±SD)表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 溫腎益精散對斷奶仔豬生長性能的影響

2.1.1 溫腎益精散對斷奶仔豬ADG、ADFI和F/G的影響

由表1可知，給藥結(jié)束(第30天)時，溫腎益精散高、低劑量組的平均日增重顯著高于空白對照組(P<0.05)，高、低劑量組之間的平均日增重差異不顯著(P>0.05)；溫腎益精散高、低劑量組的平均日采食量和料重比與空白對照組差異不顯著(P>0.05)。

表1 溫腎益精散對斷奶仔豬ADG、ADFI和F/G的影響

組別ADG/kgADFI/kgF/G高劑量0.412±0.010 a0.713±0.092 a1.731±0.242 a低劑量0.413±0.033 a0.800±0.775 a1.940±0.237 a空白對照0.352±0.029b0.717±0.753 a2.037±0.234 a

注：同列數(shù)據(jù)標(biāo)不同字母者差異顯著(P<0.05)，相同字母者無顯著差異(P>0.05)。下同

2.1.2 溫腎益精散對斷奶仔豬IGF-1、GH和SST的影響

由表2可知，試驗前(第0天)，空白對照組、低劑量組、高劑量組之間IGF-1、GH、SST的差異不顯著(P>0.05)；給藥結(jié)束(第30天)，低劑量組與高劑量組的IGF-1和GH含量顯著高于空白對照組(P<0.05)，低劑量組與高劑量組的SST含量顯著低于空白對照組(P<0.05)；試驗結(jié)束(第40天)，高劑量組與低劑量組IGF-1、GH含量顯著高于空白對照組(P<0.05)，高劑量組與低劑量組SST含量與空白對照組差異不顯著。給藥結(jié)束(第30天)和試驗結(jié)束(第40天)，高劑量組與低劑量組相比，IGF-1、GH、SST含量差異均不顯著(P>0.05)。

表2 溫腎益精散對斷奶仔豬血清中IGF-1、GH、SST含量的影響 ng/mL

2.2 溫腎益精散對斷奶仔豬免疫功能的影響

2.2.1 溫腎益精散對斷奶仔豬IgA、IgG、IgM的影響

由表3可知，試驗前(第0天)，空白對照組、低劑量組、高劑量組三組IgA、IgG、IgM的差異不顯著(P>0.05)；給藥結(jié)束(第30天)，低劑量組與高劑量組的IgA、IgG、IgM含量顯著高于空白對照組(P<0.05)；試驗結(jié)束(第40天)，高劑量組與低劑量組IgA、IgG、IgM含量顯著高于空白對照組(P<0.05)；給藥結(jié)束(第30天)和試驗結(jié)束(第40天)，低劑量組與高劑量組相比，IgA、IgG、IgM含量差異均不顯著(P>0.05)。

表3 溫腎益精散對斷奶仔豬血清中IgA、IgG、IgM含量的影響 ng/mL

2.2.2 溫腎益精散對斷奶仔豬血清IL-2、IL-4的影響

由表4可知，試驗前(第0天)，空白對照組、低劑量組、高劑量組三組IL-2、IL-4的差異不顯著(P>0.05)；給藥結(jié)束(第30天)，低劑量組與高劑量組的IL-2、IL-4含量顯著高于空白對照組(P<0.05)；試驗結(jié)束(第40天)，高劑量組與低劑量組IL-2、IL-4含量顯著高于空白對照組(P<0.05)；給藥結(jié)束(第30天)和試驗結(jié)束(第40天)，低劑量組與高劑量組相比，IL-2、IL-4含量差異均不顯著(P>0.05)。

表4 溫腎益精散對斷奶仔豬血清中IL-2、IL-4含量的影響 pg/mL

3 討論

散劑作為中藥傳統(tǒng)劑型之一，具有易分散、吸收快、制作工藝簡單、生產(chǎn)不污染環(huán)境、生物活性穩(wěn)定、儲運方便、不易發(fā)霉變質(zhì)等優(yōu)點，可以有效節(jié)約中藥資源，提高經(jīng)濟(jì)價值。研究表明，仔豬斷奶后生長遲緩主要與由應(yīng)激造成的腸道損傷、胃腸酶活性下降、腸道微生態(tài)環(huán)境紊亂等相關(guān)[5-6]。中獸醫(yī)將各因素導(dǎo)致的內(nèi)分泌功能紊亂，進(jìn)而引起的生長遲緩歸納為腎陽虛證。筆者認(rèn)為仔豬在斷奶期間生長遲緩特點和疾病發(fā)生規(guī)律為腎陽虛病證[4]。因此，以五味子、熟地黃、肉蓯蓉等溫補腎陽的中藥為主要成分組成溫腎益精散，防治仔豬生長遲緩，以期替代抗生素和激素的使用，服務(wù)于食品安全。其中，五味子具有益腎固精，澀腸止瀉，改善仔豬胃腸道微生物菌群平衡，調(diào)節(jié)胃液及促進(jìn)膽汁分泌，提高生長速度，降低仔豬腹瀉率的作用；肉蓯蓉溫而不燥，補而不峻，是性質(zhì)溫和的滋補強壯藥，可激活腎上腺、釋放皮質(zhì)激素，促進(jìn)機(jī)體生長；熟地黃能夠補血滋陰，填精益髓,增強機(jī)體免疫力[7-8]

平均日增重是反映動物生長過程中的一個重要指標(biāo)，本試驗給藥結(jié)束(第30天)，溫腎益精散高、低劑量組的平均日增重顯著高于空白對照；高、低劑量組的料重比與對照組相比，雖然差異不顯著，但總體還是低于對照組的。IGF-1是動物機(jī)體中由肝細(xì)胞、腎細(xì)胞、脾細(xì)胞等多種細(xì)胞通過自分泌/旁分泌途徑產(chǎn)生的一種活性蛋白多肽物質(zhì)，具有促進(jìn)肌肉發(fā)育，骨骼生長，葡萄糖代謝等多種功能[9-10]。GH是動物腦垂體遠(yuǎn)側(cè)部腺垂體合成并分泌一種單鏈蛋白質(zhì)類激素，廣泛存在于各種脊椎動物中，與機(jī)體生長、發(fā)育、繁殖等密切相關(guān)[11]。SST能夠抑制生長素、胃泌素、胰島素和促胰液素等激素的合成和釋放，減少胃、腸和胰液的分泌，因此，在一定范圍內(nèi)，降低SST含量，有利于動物的生長發(fā)育[12]。本試驗給藥結(jié)束(第30天)和試驗結(jié)束(第40天)時，溫腎益精散高、低劑量組斷奶仔豬血清中IGF-1和GH含量顯著高于空白對照組；給藥結(jié)束(第30天)，溫腎益精散高、低劑量組血清中SST含量顯著低于空白對照組。這些結(jié)果表明，溫腎益精散可以促進(jìn)飼糧中營養(yǎng)成分的消化吸收，提高對飼糧的轉(zhuǎn)化率，通過提高斷奶仔豬血清中的IGF-1和GH，降低SST含量，提高斷奶仔豬生長性能。

機(jī)體免疫包括體液免疫和細(xì)胞免疫。體液免疫是由B淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的特異性抗原抗體反應(yīng)[13]。免疫球蛋白是由漿細(xì)胞合成和分泌的一組能與抗原發(fā)生特異性結(jié)合的球蛋白，是體液免疫的主要抗體，血清中抗體的高低在一定程度上反映機(jī)體對疾病的抵抗能力[14-15]。IgA在維持腸道微生物組的正常穩(wěn)態(tài)平衡中起重要作用[16]；IgG在動物體內(nèi)的合成和分泌時效長、含量高，在感染或人工免疫后，可顯著提高機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)作用[17]；IgM是機(jī)體抗感染和免疫刺激后首先產(chǎn)生的抗體成分，產(chǎn)量少，時效短，但是在早期免疫防御中起重要作用[18-19]。試驗給藥結(jié)束(第30天)和試驗結(jié)束(第40天)時，溫腎益精散高、低劑量組的血清中IgA、IgG和IgM含量顯著高于空白對照組，說明溫腎益精散可顯著提高斷奶仔豬血清中IgA、IgG和IgM含量，從而提高斷奶仔豬機(jī)體的體液免疫功能。

細(xì)胞免疫主要由T淋巴細(xì)胞分化成效應(yīng)性T淋巴細(xì)胞和分泌細(xì)胞因子而發(fā)揮免疫作用[20]。T淋巴細(xì)胞主要包括Th1和Th2 兩個細(xì)胞亞群，IL-2是由Th1細(xì)胞分泌[21]，對T、B細(xì)胞、自然殺傷性細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞及少數(shù)膠質(zhì)細(xì)胞都能直接促進(jìn)其生長[22]。IL-4由Th2細(xì)胞分泌，作用于Th2細(xì)胞，促進(jìn)其增殖、分化[23]。據(jù)報道，Th1和Th2之間的動態(tài)平衡在維持生物體的正常免疫功能中起重要作用[24]。本試驗結(jié)果顯示：給藥結(jié)束(第30天)和試驗結(jié)束(第40天)時，溫腎益精散高、低劑量組中IL-2、IL-4含量顯著高于空白對照組，說明溫腎益精散可以通過調(diào)節(jié)Th1和Th2之間的動態(tài)平衡，更好地協(xié)調(diào)機(jī)體的細(xì)胞免疫應(yīng)答。

4 結(jié)論

飼糧中添加適量溫腎益精散可以提高斷奶仔豬的生長性能和免疫水平。在本試驗條件下，斷奶仔豬飼糧中添加0.5% 的溫腎益精散效果為最佳。