張 燕,王 億,緱靈山,王 鵬，方 媛,王傳霞,王 娜，索 峰,顧茂勝

(1.徐州市婦幼保健院遺傳醫(yī)學(xué)中心，江蘇徐州 221000；2.蘇州貝康醫(yī)療器械有限公司，江蘇蘇州 215123）

在我國，出生缺陷是造成嬰兒死亡率和兒童發(fā)病率升高的主要原因[1]，致使出生缺陷發(fā)生的最常見原因之一為染色體非整倍體異常，主要包括21三體綜合征（21 trisomic syndrome,T21）,18三體綜合征（18 trisomic syndrome,T18）,13三體綜合征（13 trisomic syndrome,T3）等[2]，此類疾病尚缺少有效的治療方法，故孕婦進(jìn)行產(chǎn)前染色體非整倍體篩查及診斷是降低出生缺陷率的最有效辦法。傳統(tǒng)的早中孕期產(chǎn)前篩查主要依靠血清學(xué)篩查及影像學(xué)排畸，但檢出率只有50%～95%，還存在5%的假陽性率[3]。介入性穿刺進(jìn)行核型分析準(zhǔn)確率高，是產(chǎn)前診斷金標(biāo)準(zhǔn)，但其存在一定的流產(chǎn)及感染風(fēng)險，導(dǎo)致孕婦依從性差。無創(chuàng)產(chǎn)前檢測（non invasive prenatal testing,NIPT）因其深度測序、高通量性、無創(chuàng)性、高特異度、高靈敏度、高檢出率等優(yōu)點(diǎn)被廣泛應(yīng)用于產(chǎn)前胎兒染色體非整倍體篩查[4-6]。故本研究對8 001例孕婦NIPT結(jié)果行回顧性分析，探討NIPT檢測技術(shù)在評估胎兒染色體非整倍體風(fēng)險中的臨床應(yīng)用價值。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選取2018年4月～2019年10月于徐州市婦幼保健院因各種原因行NIPT檢測的孕婦8 001人，年齡16～48（29.8±5.0）歲，采血孕周12+0～31+0周（對于孕周大于22+6周的孕婦，均已告知其可能錯過介入性診斷最佳時間并簽署知情同意書）。孕婦均已簽署檢查知情同意書。

1.2 儀器與試劑 NIPT檢測采用中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司研發(fā)的DA8600高通量DNA測序平臺及其配套生產(chǎn)的檢測試劑。

1.3 方法

1.3.1 NIPT檢測：EDTA管采集孕婦靜脈全血8～10ml，分離血漿，提取血漿中游離DNA，進(jìn)行文庫構(gòu)建、乳液PCR,ES富集、上機(jī)測序等步驟。實(shí)驗(yàn)加入陰陽性對照，測序結(jié)果經(jīng)過生物信息分析后，將各三體風(fēng)險指數(shù)Z值處于[-3.00～3.00]之間的樣本判斷為相應(yīng)T21,T18和T13低風(fēng)險，各Z值＞3.00的樣本判斷為相應(yīng)T21,T18和T13高風(fēng)險。

1.3.2 羊水染色體核型確診：對NIPT結(jié)果高風(fēng)險者進(jìn)行遺傳咨詢，告知其進(jìn)行羊膜腔穿刺及羊水染色體核型分析，避免NIPT結(jié)果假陽性，對在本院行此檢查者簽署知情同意書，對在外院行此檢查者進(jìn)行電話隨訪。低風(fēng)險者進(jìn)行后續(xù)常規(guī)產(chǎn)檢。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 計(jì)量資料采用均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，計(jì)數(shù)資料采用率（%）表示，組間比較采用行×列表資料χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 NIPT結(jié)果分析 8 001例樣本中共檢出34例高風(fēng)險(0.425%)，其中包括28例T21(0.350%)，4例T18(0.050%)，2例T13(0.025%)。

2.2 核型分析 所有NIPT高風(fēng)險者均在本院或外院行羊水染色體核型分析，確診19例T21，3例T18，1例T13，陽性預(yù)測值分別為67.86%,75%和50%，復(fù)合陽性預(yù)測值為67.65%(23/34)。

2.3 不同篩查指征組的陽性率比較 見表1。六組數(shù)據(jù)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=5.454，P＞0.05）。

表1 不同篩查指征組的陽性率[n（真陽性數(shù)）]

3 討論

本研究8 001例樣本中共檢出34例三體高風(fēng)險，陽性率為0.425%，所有高風(fēng)險者經(jīng)回訪均已行羊水染色體核型分析，T21,T18和T13復(fù)合陽性預(yù)測值為67.65%，符合指南與共識要求不低于50%的標(biāo)準(zhǔn)[7]，但稍低于其他檢測機(jī)構(gòu)[2,8-9]，這主要與篩查人群有關(guān)。NIPT技術(shù)規(guī)范[10]將產(chǎn)篩臨界風(fēng)險為1/1 000～1/270的孕婦納入NIPT篩查范圍，但本產(chǎn)前診斷中心將該范圍擴(kuò)大為1/2 000～1/270，在增加真陽性例數(shù)的同時假陽性例數(shù)也有所提高，因此降低了復(fù)合陽性預(yù)測值。

根據(jù)篩查指征將孕婦分為六組，其中彩超提示異常組陽性率最高，這與染色體異常者的臨床表現(xiàn)有關(guān)，與NIPT檢測技術(shù)無關(guān)[11]，其次為產(chǎn)篩高風(fēng)險組、高齡組、產(chǎn)篩臨界風(fēng)險組，孕婦要求及其他篩查指征組陽性率最低。因此，NIPT均適用于這六組人群，尤其是前五組以及有介入性產(chǎn)前診斷禁忌者，與傳統(tǒng)的介入性診斷相比，大大減少了行介入性診斷的人數(shù)，同時也減輕了部分孕婦的心理壓力。

本研究入選產(chǎn)篩臨界風(fēng)險（1/2 000～1/1 000）組的孕婦有1 709例，確診1例T18，該組的核型分析陽性率為0.059%，NIPT假陽性率（3/4）高于產(chǎn)篩臨界風(fēng)險（1/1 000～1/270）組的假陽性率（2/4）。因此，將NIPT適用產(chǎn)篩臨界風(fēng)險范圍擴(kuò)大為1/2 000～1/270可以提高染色體非整倍體的檢出率，避免三體患兒的出生，但會導(dǎo)致NIPT假陽性率有一定比例的升高。

NIPT檢測技術(shù)的自身優(yōu)勢以及該技術(shù)的不斷升級優(yōu)化等優(yōu)點(diǎn)使其在臨床具有越來越廣泛的應(yīng)用前景，但該技術(shù)仍存在一定的假陽性率及假陰性率[12]，所以也僅局限用于染色體非整倍體的篩查，對于檢出高風(fēng)險者仍需進(jìn)一步確診，檢出低風(fēng)險者仍需進(jìn)行后續(xù)常規(guī)產(chǎn)檢。