周海清，劉洋，陳宇，李榮霞，楊淑均，張偉麗

心腦血管疾病是危害我國(guó)居民生命健康的“第一殺手”，患病人數(shù)達(dá)2.9 億，居總死亡率的首位[1]。動(dòng)脈粥樣硬化是心腦血管疾病發(fā)生和發(fā)展的重要病理基礎(chǔ)，循環(huán)血中的單核細(xì)胞遷移并黏附于活化的血管內(nèi)皮細(xì)胞，浸潤(rùn)至內(nèi)膜下層形成巨噬細(xì)胞是動(dòng)脈粥樣硬化的起始環(huán)節(jié)，單核-巨噬細(xì)胞通過(guò)表型轉(zhuǎn)換和分泌炎癥因子等機(jī)制調(diào)控動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展的各個(gè)階段[2-3]。斑塊的穩(wěn)定性決定了動(dòng)脈粥樣硬化的危險(xiǎn)程度，穩(wěn)定斑塊可不產(chǎn)生臨床癥狀，而不穩(wěn)定斑塊發(fā)生破裂、血栓形成后，可引發(fā)冠心病、腦卒中等急性心腦血管事件[4]。因此，探究斑塊穩(wěn)定性的機(jī)制和分子標(biāo)志物是早期預(yù)防心腦血管事件的關(guān)鍵。

長(zhǎng)鏈非編碼RNA 分子（lncRNA）是一類長(zhǎng)度大于 200 個(gè)堿基，沒(méi)有蛋白質(zhì)編碼潛能的核苷酸序列，在表觀遺傳、轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后水平等多個(gè)層面調(diào)控基因達(dá)，在細(xì)胞增殖、分化、凋亡等生物學(xué)過(guò)程中發(fā)揮著重要作用[5]。LncRNA 在動(dòng)脈粥樣硬化病理生理中的作用受到廣泛關(guān)注。我們?cè)诠谛牟∫讚p斑塊患者外周血中鑒別出一種與動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性相關(guān)的新的lncRNA 分子，即分化拮抗非編碼RNA-201（differentiation antagonizing non-protein coding RNA，DANCR-201）。DANCR-201 是DANCR 最 重要的轉(zhuǎn)錄本（轉(zhuǎn)錄本序列號(hào)：ENST00000411630.6），位于人4 號(hào)染色體。DANCR 在表皮細(xì)胞分化過(guò)程、干細(xì)胞特性維持以及腫瘤進(jìn)展中發(fā)揮重要的調(diào)控作用，影響細(xì)胞增殖、遷移和炎癥反應(yīng)[6-7]。DANCR-201 在動(dòng)脈粥樣硬化中的作用鮮有報(bào)道。本工作擬研究DANCR-201 對(duì)單核-巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)及其功能的影響，為闡明動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成的機(jī)制提供理論基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1 細(xì)胞與試劑

實(shí)驗(yàn)細(xì)胞：人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞系（THP）-1細(xì)胞（中國(guó)科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會(huì)）。主要試劑包括：胎牛血清、無(wú)酚紅RPMI-1640 培養(yǎng)基（均購(gòu)自Gibco 公司，美國(guó)）；RPMI-1640 培養(yǎng)基、牛血清蛋白和油紅O 染料（均購(gòu)自Sigma 公司，美國(guó)）；干擾素-γ 和白細(xì)胞介素-4（IL-4）（均購(gòu)自PeproTech 公司，美國(guó)）；Lipofectamine 3000 和NBD膽固醇（22-(N-(7-Nitrobenz-2-Oxa-1,3-Diazol-4-yl)Amino)-23,24-Bisnor-5-Cholen-3β-Ol）（均購(gòu)自Invitrogen 公司，美國(guó)）；氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）和乙酰化低密度脂蛋白（均購(gòu)自廣州奕源生物技術(shù)有限公司，中國(guó)）；重組人載脂蛋白A1（Abcam公司，英國(guó)）；Trizol（Thermo fisher 公司，美國(guó)）；Prime Script RT reagent Kit with gDNA Eraser 試劑盒（Takara 公司，日本）；SYBR Green qPCR Mix（上海翊圣生物科技有限公司，中國(guó)）。主要耗材包括：96 孔黑色細(xì)胞培養(yǎng)板（Corning 公司，美國(guó)）；TempusTMBlood RNA Tube 采血管和TempusTMSpin RNA Isolation Kit 試劑盒（均購(gòu)自Applied Biosystems公司，美國(guó)）。

DANCR-201 慢病毒載體購(gòu)自上海吉?jiǎng)P基因科技有限公司（中國(guó)），該慢病毒載體是以人類免疫缺陷Ⅰ型病毒為基礎(chǔ)發(fā)展起來(lái)的基因治療載體，可將DANCR-201 高效導(dǎo)入細(xì)胞系。DANCR-201 Smart Silencer 購(gòu)自廣州銳博科技有限公司（中國(guó)），這是一種包括三條小干擾RNA 和三條反義寡核苷酸的混合物，靶向DANCR-201 的不同序列位點(diǎn)，可有效提高細(xì)胞中DANCR-201 的敲低效率。

1.2 方法

1.2.1 研究對(duì)象及分組

納入中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院阜外醫(yī)院疑為冠心病接受冠狀動(dòng)脈CT 檢查的患者25例，年齡≥45 歲。排除血液疾病、消化性潰瘍、肝腎功能不全、感染、自身免疫疾病和腫瘤患者。使用64 排螺旋CT 進(jìn)行冠狀動(dòng)脈掃描，兩名放射科醫(yī)師分別對(duì)冠狀動(dòng)脈圖像進(jìn)行分析。冠狀動(dòng)脈粥樣硬化斑塊特點(diǎn)分型：明顯區(qū)別于冠狀動(dòng)脈管腔，且＞1 mm2的結(jié)構(gòu)被判定為動(dòng)脈粥樣硬化斑塊[8]；斑塊中CT值＞130 HU 的高密度成分≥70 %，被定義為鈣化斑塊[9]；易損斑塊則包含脂質(zhì)、纖維和鈣化等成分[10]；冠狀動(dòng)脈無(wú)＞1 mm2斑塊者為無(wú)斑塊健康對(duì)照組。根據(jù)冠狀動(dòng)脈CT 血管造影圖像，25例患者分為3組，包括無(wú)斑塊健康對(duì)照組（n=10）、完全鈣化斑塊組（n=10）和易損斑塊組（n=5）。研究已通過(guò)中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院阜外醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有的入選患者均已簽署知情同意。

血標(biāo)本來(lái)自于晨起空腹抽血。使用TempusTMBlood RNA Tube 采血管收集患者外周血2～3 ml，立即劇烈震蕩15～30 s，充分混勻，隨后使用TempusTMSpin RNA Isolation Kit 試劑盒提取總RNA，-80℃儲(chǔ)存，用于全轉(zhuǎn)錄組測(cè)序檢測(cè)。

1.2.2 單核-巨噬細(xì)胞的培養(yǎng)

用含10% 胎牛血清的RPMI-1640 培養(yǎng)基培養(yǎng)THP-1 單核細(xì)胞，并置于37℃、5% CO2的培養(yǎng)箱中傳代。將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的THP-1 細(xì)胞以2×105/孔的密度接種于12 孔細(xì)胞培養(yǎng)板，用于建立M1 和M2 型巨噬細(xì)胞極化模型：在培養(yǎng)基中加入10 μl 佛波酯（10 ng/ml），孵育48 h后THP-1細(xì)胞分化成為M0型巨噬細(xì)胞；在M0 型巨噬細(xì)胞中加入2 μl 脂多糖（0.5 ng/ml）和2 μl 干擾素-γ（10 ng/ml），孵育24 h，使其極化為M1 型巨噬細(xì)胞（促炎型巨噬細(xì)胞）；在M0 型巨噬細(xì)胞中加入2 μl IL-4（10 ng/ml），孵育24 h，使其極化為M2 型巨噬細(xì)胞（抑炎型巨噬細(xì)胞）。

1.2.3 過(guò)表達(dá)或敲低DANCR-201 的細(xì)胞模型

渠道融合式閱讀推廣的“融合”更強(qiáng)調(diào)integration和cohesion，即側(cè)重于多種閱讀推廣渠道的有機(jī)整合應(yīng)用，使其產(chǎn)生一種聚合力。

將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的THP-1 細(xì)胞以1×105/孔的密度接種于12 孔細(xì)胞培養(yǎng)板，感染DANCR-201 慢病毒載體，培養(yǎng)72 h 后使用流式細(xì)胞分選儀（FACS Aria 2 Flow Cytometry/Cell Sorting System，美國(guó)）篩選表達(dá)綠色熒光蛋白標(biāo)簽的THP-1 細(xì)胞，建立穩(wěn)定表達(dá)DANCR-201 的細(xì)胞系。用Lipofectamine 3000轉(zhuǎn)染DANCR-201 Smart Silencer，培養(yǎng)48 h 后，檢測(cè)巨噬細(xì)胞中DANCR-201 的表達(dá)效率，建立敲低DANCR-201 的細(xì)胞模型。

1.2.4 油紅O 染色實(shí)驗(yàn)

將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的THP-1 細(xì)胞以2×105/孔的密度接種于底部放置蓋玻片的12 孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔加入10 μl 佛波酯（10 ng/ml）誘導(dǎo)48 h，然后更換為含1%牛血清蛋白的 RPMI-1640 培養(yǎng)基，每孔加入終濃度50 μg/ml 的ox-LDL 刺激12 h，誘導(dǎo)分化為泡沫巨噬細(xì)胞。取出載玻片，用磷酸鹽緩沖液（PBS）輕柔沖洗，然后將載玻片置于0.3%油紅O 染色液中染色2 min，接著用蘇木素伊紅染色液復(fù)染細(xì)胞核2 min。洗去浮色，使用甘油封片，在Leica DM6000B光學(xué)顯微鏡（Leica Microsystems,德國(guó)）下觀察巨噬細(xì)胞的脂質(zhì)吞噬能力，細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色，脂滴為紅色，每孔隨機(jī)拍攝5 個(gè)視野，每個(gè)視野下約20 個(gè)細(xì)胞。

1.2.5 膽固醇流出實(shí)驗(yàn)

將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的THP-1 細(xì)胞以1×104/孔的密度接種于96 孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔加入1 μl 佛波酯（10 ng/ml）誘導(dǎo)48 h 后，更換為含0.2%牛血清蛋白的RPMI-1640 培養(yǎng)基，每孔加入終濃度5 μg/ml 的NBD 膽固醇和50 μg/ml 的乙?；兔芏戎鞍?，共同孵育12 h。使用無(wú)酚紅RPMI-1640 培養(yǎng)基輕柔洗滌細(xì)胞2 次，接著每孔給予終濃度20 μg/ml 的重組人載脂蛋白A1（溶于含0.2% 牛血清蛋白的RPMI-1640 培養(yǎng)基中）刺激4 h，誘導(dǎo)細(xì)胞的膽固醇外流。吸取細(xì)胞上清培養(yǎng)液并保存于96 孔黑色細(xì)胞培養(yǎng)板中，然后在細(xì)胞中每孔加入100 μl 0.1% Triton X-100細(xì)胞裂解液，充分吹打、震蕩30 min。采用Infinite M200 Pro 光柵型多功能酶標(biāo)儀（Tecan,瑞士）分別檢測(cè)上清培養(yǎng)液與細(xì)胞裂解液的熒光強(qiáng)度值，吸收光469 nm，發(fā)射光537 nm。膽固醇流出率用上清液熒光值除以總熒光值（上清和細(xì)胞沉淀熒光值之和）的比值乘以100%來(lái)表示。

1.2.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 法檢測(cè)基因表達(dá)水平

使用RNA 抽提試劑Trizol 提取巨噬細(xì)胞的總RNA，繼而用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒Prime Script RT reagent Kit with gDNA Eraser 將mRNA 逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。實(shí)時(shí)熒光定量PCR 反應(yīng)體系以cDNA 為模板，加入SYBR Green qPCR Mix 和引物序列，采用ABI ViiA7 System（Applied Biosystems，美國(guó)）檢測(cè)基因的mRNA 表達(dá)水平。以甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）為內(nèi)參，ΔΔCt 法計(jì)算基因的mRNA 相對(duì)表達(dá)量。實(shí)時(shí)熒光定量PCR 反應(yīng)體系為：（1）5 μl 2×SYBR PCR mix；（2）0.5 μl 正向引物，0.5 μl 反向引物；（3）3 μl 模板 cDNA；（4）1 μl ddH2O。反應(yīng)條件為：（1）94 ℃預(yù)變性3 min；（2）94 ℃變性15 s，55 ℃退火1 min，40 個(gè)循環(huán)；（3）72 ℃后延伸10 min。檢測(cè)基因的引物序列見(jiàn)表1。

表1 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 引物序列

1.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法

采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量變量使用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 DANCR-201 在易損斑塊組患者的外周血中高表達(dá)

采用全轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)檢測(cè)無(wú)斑塊健康對(duì)照組、完全鈣化斑塊組和易損斑塊組患者外周血中表達(dá)差異的lncRNA 分子，發(fā)現(xiàn)有23 個(gè)lncRNA 存在差異表達(dá)。進(jìn)一步驗(yàn)證測(cè)序發(fā)現(xiàn)DANCR-201 在易損斑塊組患者外周血中的表達(dá)水平顯著升高，分別為無(wú)斑塊健康對(duì)照組的1.6 倍和完全鈣化斑塊組的1.2 倍（P＜0.01，圖1）。這提示其可能參與動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成的病理生理過(guò)程，因此擬探究DANCR-201 是否通過(guò)調(diào)控巨噬細(xì)胞相關(guān)功能影響動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成。

2.2 DANCR-201 促進(jìn)單核-巨噬細(xì)胞的炎癥反應(yīng)

首先，通過(guò)檢測(cè)M1 和M2 型巨噬細(xì)胞的標(biāo)志分子確定巨噬細(xì)胞極化模型是否成功建立。結(jié)果顯示，M1 型巨噬細(xì)胞標(biāo)志物單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）在M1 型巨噬細(xì)胞中表達(dá)顯著增高（P＜0.01），M2 型巨噬細(xì)胞標(biāo)志物白細(xì)胞介素-10（IL-10）在M2 型巨噬細(xì)胞表達(dá)顯著增高（P＜0.01），說(shuō)明巨噬細(xì)胞極化模型成功建立（圖2）。

圖1 三組患者外周血中DANCR-201 表達(dá)水平比較

圖2 M0、M1 和M2 型巨噬細(xì)胞的炎癥因子表達(dá)水平（n=5）

采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR 法檢測(cè)慢病毒穩(wěn)定過(guò)表達(dá)DANCR-201 的不同亞型單核-巨噬細(xì)胞中炎癥因子表達(dá)水平。結(jié)果顯示，與慢病毒過(guò)表達(dá)對(duì)照組比較，在THP-1 細(xì)胞中，DANCR-201 顯著促進(jìn)炎癥因子MCP-1 和TNF-α 的表達(dá)水平，分別為慢病毒過(guò)表達(dá)對(duì)照組的1.5 倍和1.2 倍（P＜0.01）；反之，采用ASO 技術(shù)敲低DANCR-201 時(shí)，MCP-1和TNF-α 的表達(dá)水平顯著降低（P＜0.01，圖3A）。在M1 型巨噬細(xì)胞中，DANCR-201 顯著抑制抗炎因子IL-10 的表達(dá)水平（P＜0.01，圖3B）。在M2 型巨噬細(xì)胞中，DANCR-201 顯著促進(jìn)炎癥因子TNF-α的表達(dá)水平，約為敲低對(duì)照組的1.5 倍（P＜0.01）；敲低DANCR-201 時(shí)，TNF-α 表達(dá)水平下降37%（P＜0.01，圖3C）。

2.3 DANCR-201 調(diào)節(jié)鈣化相關(guān)基因的表達(dá)（圖4）

建立慢病毒穩(wěn)定過(guò)表達(dá)DANCR-201 的單核-巨噬細(xì)胞系，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR 法檢測(cè)單核-巨噬細(xì)胞中鈣化相關(guān)基因的表達(dá)改變。結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，在M1 和M2 型巨噬細(xì)胞中，DANCR-201 顯著抑制Runt 相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2（Runx 2）的表達(dá)水平（P＜0.01），并同時(shí)促進(jìn)骨保護(hù)素（OPG）的高表達(dá)（P＜0.05）。反之，采用ASO 技術(shù)敲低DANCR-201 時(shí)，M1 和M2 型巨噬細(xì)胞中的Runx 2表達(dá)水平升高（P＜0.01），而OPG 的表達(dá)水平下降（P＜0.01）。

2.4 DANCR-201 對(duì)單核-巨噬細(xì)胞脂質(zhì)吞噬能力的影響

采用油紅O 染色法觀察DANCR-201 對(duì)巨噬細(xì)胞脂質(zhì)吞噬能力的影響，發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)或者敲低DANCR-201 時(shí)，巨噬細(xì)胞脂滴形成和脂質(zhì)攝取能力與對(duì)照組比較無(wú)顯著差異，脂質(zhì)吞噬相關(guān)基因血凝素樣氧化型低密度脂蛋白受體（LOX-1）、清道夫受體CD36、A1 類清道夫受體（SR-A1）的表達(dá)水平與對(duì)照組比較差異亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖3 DANCR-201 對(duì)不同類型巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)的影響（n=5）

圖4 DANCR-201 對(duì)巨噬細(xì)胞中鈣化相關(guān)基因表達(dá)水平的影響（n=5）

2.5 DANCR-201 對(duì)巨噬細(xì)胞膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)能力的影響（圖5）

采用膽固醇流出實(shí)驗(yàn)檢測(cè)巨噬細(xì)胞膽固醇流出率，觀察DANCR-201 對(duì)巨噬細(xì)胞膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)能力的影響。結(jié)果顯示，敲低DANCR-201 對(duì)巨噬細(xì)胞膽固醇流出率無(wú)顯著影響。過(guò)表達(dá)DANCR-201 可促進(jìn)M1 型巨噬細(xì)胞中ATP 結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體G1（ABCG1）的表達(dá)水平增加30%（P＜0.05），而膽固醇外排相關(guān)基因如B1 類清道夫受體（SR-B1）、ATP 結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1（ABCA1）等表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖5 DANCR-201 對(duì)巨噬細(xì)胞膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因表達(dá)水平的影響（n=5）

3 討論

動(dòng)脈粥樣硬化實(shí)質(zhì)上是一種慢性炎癥反應(yīng)性疾病，單核/巨噬細(xì)胞是炎癥反應(yīng)的核心[11-12]。本研究通過(guò)全轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)首次發(fā)現(xiàn)lncRNA 分子DANCR-201 在冠狀動(dòng)脈易損斑塊組患者外周全血中的表達(dá)水平顯著高于健康對(duì)照組和鈣化斑塊組患者，進(jìn)一步的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究顯示DANCR-201 能夠促進(jìn)單核-巨噬細(xì)胞釋放趨化因子MCP-1 和炎癥因子TNF-α 等，并顯著下調(diào)鈣化相關(guān)基因Runx 2的表達(dá)水平，但對(duì)巨噬細(xì)胞脂質(zhì)吞噬和膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)能力無(wú)顯著影響，提示DANCR-201 可能通過(guò)影響單核-巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)可以促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)程。

研究表明急性冠狀動(dòng)脈綜合征患者的外周血MCP-1 水平顯著升高，且與心血管病死亡率增高密切相關(guān)，MCP-1 高表達(dá)能夠促進(jìn)單核細(xì)胞大量增殖并進(jìn)一步向動(dòng)脈粥樣硬化病變部位聚集[13-15]。TNF-α 作為一種強(qiáng)效炎性因子，可促進(jìn)單核細(xì)胞向內(nèi)皮細(xì)胞黏附，促進(jìn)巨噬細(xì)胞吞噬脂質(zhì)形成泡沫細(xì)胞，從而影響動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展。MCP-1、TNF-α等多種炎性因子共同作用，能顯著增加動(dòng)脈粥樣硬化晚期斑塊破裂出血與血栓形成的風(fēng)險(xiǎn)，誘發(fā)急性心腦血管事件[16-17]。本研究結(jié)果顯示DANCR-201在冠狀動(dòng)脈易損斑塊組患者外周血中的表達(dá)水平升高，可促進(jìn)單核細(xì)胞釋放MCP-1、TNF-α。這提示DANCR-201 可能通過(guò)調(diào)控單核巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)影響動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的穩(wěn)定性。

動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中的巨噬細(xì)胞主要分為M1促炎亞型和M2 抗炎亞型，在特定的環(huán)境下可發(fā)生相互轉(zhuǎn)換進(jìn)而影響斑塊形成[18]。M1 型巨噬細(xì)胞在不穩(wěn)定斑塊中大量存在，通過(guò)分泌TNF-α、IL-1β和IL-6 等促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展，而M2 型巨噬細(xì)胞主要存在于較穩(wěn)定的鈣化斑塊中，分泌抗炎因子IL-10，發(fā)揮抑制斑塊形成的作用[19]。本研究中，DANCR-201 能夠顯著促進(jìn)M1 型巨噬細(xì)胞分泌炎癥因子TNF-α，抑制抗炎因子IL-10 表達(dá)，同時(shí)促進(jìn)M2 型巨噬細(xì)胞分泌炎癥因子TNF-α。這提示DANCR-201 在兩種類型巨噬細(xì)胞中均發(fā)揮促炎癥作用，可能影響動(dòng)脈粥樣硬化中晚期的發(fā)展。

此外，血管鈣化是動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展中的一種常見(jiàn)的病理特征，管腔表面鈣鹽結(jié)晶聚集使斑塊更易破裂形成血栓，而在動(dòng)脈粥樣硬化中晚期，鈣化性斑塊逐漸融合，形成較厚的鈣化帽能夠使斑塊更趨于穩(wěn)定，有效防止急性血栓形成，并限制斑塊形成。Runx 2 是細(xì)胞成骨分化的特異性轉(zhuǎn)錄因子，可作為鈣化形成的早期標(biāo)志[20]。OPG 是腫瘤壞死因子受體超家族成員之一，OPG 水平升高與機(jī)體對(duì)抗血管鈣化的自我保護(hù)機(jī)制密切相關(guān)[21]。我們發(fā)現(xiàn)在M1、M2 型巨噬細(xì)胞中，DANCR-201 可顯著抑制Runx 2，并上調(diào)OPG 的表達(dá)水平，這提示其在鈣化形成中發(fā)揮著重要作用。DANCR-201 在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成中的分子機(jī)制，還需實(shí)驗(yàn)證據(jù)。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)DANCR-201 在冠狀動(dòng)脈易損斑塊組患者外周血中的表達(dá)水平顯著高于健康對(duì)照組和鈣化斑塊組患者，可促進(jìn)單核-巨噬細(xì)胞釋放趨化因子MCP-1 和炎癥因子TNF-α 等，并顯著下調(diào)鈣化相關(guān)基因Runx 2 的表達(dá)水平，這提示DANCR-201 調(diào)控單核-巨噬細(xì)胞的炎癥反應(yīng)。該lncRNA 分子在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展中的作用機(jī)制仍需進(jìn)一步深入研究。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突