李宇涵 ， 汪 露 ， 陳朝喜

(西南民族大學生命科學與技術(shù)學院 ， 四川 成都 610041)

近年來，黃酮類化合物由于其消除自由基、延緩衰老、抗氧化、調(diào)節(jié)免疫力和抗腫瘤等功效而廣泛應(yīng)用在食品和醫(yī)藥等領(lǐng)域[1-2]。目前，黃酮類化合物主要用于清除動物體內(nèi)過多的活性氧自由基以防止脂質(zhì)過氧化[3]。

插田泡(RubuscoreanusMiq.)為薔薇科懸鉤子屬植物，又名大烏泡、倒生根、倒生刺等，其資源豐富，在我國南北方均有廣泛分布，是集藥用、食用、觀賞和綠化于一體的多用途植物。相關(guān)研究報道表明，插田泡中含有大量的蛋白質(zhì)、黃酮和三萜皂苷等生物活性物質(zhì)[4-5]。研究資料表明，國內(nèi)外研究主要關(guān)注其果實的開發(fā)和利用，而對于插田泡的化學成分及其藥用價值的研究報道相對較少[6-7]。

本試驗以采自甘孜州康定跑馬山的插田泡為材料，初步探討其總黃酮對小鼠免疫器官和抗氧化活性指標的影響，以期為深入研究插田泡其他藥理學活性及其開發(fā)利用提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 45只雌雄昆明系小鼠，體重范圍為(20±2) g，購自成都達碩科技有限公司。

1.1.2 試劑及試劑盒 三氯化鋁、乙酸乙酯、甲酸、無水乙醇、醋酸、甲醛和二甲苯均為分析純，購自成都科龍試劑化工廠；二硝基氟苯(DNFB)和左旋咪唑，購自上海源葉生物科技有限公司；丙二醛(MDA)測試盒、總抗氧化能力(T-AOC)測試盒和超氧化物歧化酶(SOD)測試盒，均購自南京建成生物研究所。

1.2 插田泡總黃酮提取 取插田泡粉末0.5 kg，按料液比1∶10的比例，用75%的乙醇浸提，得到插田泡提取物，濃縮后用AB-8大孔樹脂柱純化，經(jīng)薄層層析(展開劑為乙酸乙酯∶甲酸=8∶3)及顯色反應(yīng)鑒定，冷凍干燥后得到插田泡總黃酮，4 ℃保存?zhèn)溆?。臨用前用生理鹽水配置成10 mg/mL、20 mg/mL和40 mg/mL插田泡總黃酮的溶液。

1.3 動物試驗設(shè)計 45只小鼠隨機平均分成5組，其中A、B組為陰性和陽性對照組，陽性藥物劑量的確定參照文獻[8]，分別以灌胃生理鹽水和17.5 mg/mL的左旋咪唑，C、D、E分別為低、中、高濃度插田泡總黃酮組，以每天0.2 mL/(10 g·bw)的劑量連續(xù)灌胃21 d。

1.4 小鼠臟器指數(shù)測定 摘取小鼠胸腺和脾臟，稱重并計算臟器指數(shù)，臟器指數(shù)=臟器重量(mg)/活體重(g)×10。

1.5 抗氧化指標測定 參照試劑盒說明書操作方法，分別對各試驗組小鼠血漿進行丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和總抗氧化能力(T-AOC)測定。

1.6 數(shù)據(jù)處理 試驗中所有數(shù)據(jù)均用SPSS 18.0軟件進行處理。

2 結(jié)果

2.1 插田泡總黃酮對小鼠免疫器官臟器指數(shù)的影響 插田泡總黃酮對小鼠臟器指數(shù)的影響結(jié)果如圖1所示。由圖1可知，B、C、E組胸腺指數(shù)均高于A組，但D組與A組相比略低，5組間差異不顯著(P>0.05)，說明插田泡總黃酮在一定程度上可以提高小鼠的胸腺指數(shù)，但高、中、低劑量組對胸腺指數(shù)的影響并未呈現(xiàn)劑量依賴性關(guān)系；與對照組相比，給藥組對脾臟指數(shù)的影響并未達到預(yù)期的免疫增強作用(數(shù)據(jù)未列出)，其具體原因還有待進一步探討。

圖1 插田泡總黃酮對小鼠胸腺指數(shù)的影響

2.2 插田泡總黃酮抗氧化活性結(jié)果 插田泡總黃酮抗氧化活性結(jié)果見表1。由表1可知，B、D、E三組SOD均高于A組，C組雖低于A組，但兩者間差異不顯著(P>0.05)；B、C、D、E四組的MDA均低于A組，T-AOC均高于A組，說明一定濃度的插田泡總黃酮可以提高小鼠SOD和T-AOC活性，同時有助于降低MDA活性，抑制脂質(zhì)過氧化。

表1 插田泡總黃酮對小鼠SOD、MDA、T-AOC的影響

3 討論

胸腺和脾臟是機體重要的免疫器官，其指數(shù)的高低可以作為機體免疫功能的重要指標[9-11]。本試驗結(jié)果表明，與陰性對照組相比，插田泡總黃酮在一定程度上可以提高小鼠的胸腺指數(shù)，但脾臟指數(shù)并未升高，與其他研究結(jié)果存在一定差異，分析其原因可能與給藥組藥物的劑量選擇有關(guān)。在試驗中，為驗證藥物是否對小鼠的脾臟造成損傷，分別對陰性對照組和給藥組中死亡小鼠的脾臟進行病理組織觀察，但并未發(fā)現(xiàn)明顯的病理變化。

機體中過多的自由基會造成氧化脅迫，加上脂質(zhì)過氧化的終產(chǎn)物會引起細胞功能紊亂，引起機體衰老，SOD是生物體內(nèi)重要的抗氧化酶, 可以有效清除氧自由基, 保護生物體細胞避免氧化損傷，MDA是生物膜脂質(zhì)過氧化的降解產(chǎn)物, 是反映過氧化損傷的常用指標[12-13]，T-AOC作為反應(yīng)機體內(nèi)各種抗氧化分子及酶的總體水平的指標，也具有重要意義。抗氧化劑通過抑制脂質(zhì)過氧化、蛋白氧化和清除體內(nèi)自由基,可以調(diào)整和改善機體狀態(tài),修正生理功能,從而達到預(yù)防和治療慢性疾病的目的[14]。本試驗中SOD、MDA和T-AOC抗氧化結(jié)果顯示，插田泡總黃酮可以提高小鼠SOD和T-AOC活性，同時可以降低MDA活性，有助于抑制脂質(zhì)過氧化。由此可知，插田泡總黃酮具有較好的抗氧化作用,能夠提高機體內(nèi)抗氧化相關(guān)酶的活性, 抑制自由基的產(chǎn)生和脂質(zhì)過氧化產(chǎn)生的不良代謝產(chǎn)物。

4 結(jié)論

在一定濃度劑量范圍內(nèi)，插田泡總黃酮可以提高小鼠胸腺指數(shù)，且插田泡總黃酮濃度越高，小鼠的SOD和T-AOC活性提高越明顯，抑制MDA活性越強，抗氧化的作用較為明顯，為插田泡藥效學廣泛研究及其開發(fā)利用提供理論依據(jù)和基礎(chǔ)。