（新疆兵團(tuán)第二師畜牧獸醫(yī)工作站，鐵門關(guān) 841005）

為了確診新疆某規(guī)?；膛鰻倥８篂a病病原，采集病料和血清樣品進(jìn)行了細(xì)菌分離鑒定和血清中病毒抗體，DNA檢測試驗。

1 材料與方法

1.1 病料采集

剖檢未治療的4頭發(fā)病犢牛，無菌采集心、肝、脾、肺、腎、淋巴結(jié)等臟器組織以及血樣，犢牛編號為犢牛1至犢牛4。再采集6頭發(fā)病犢牛的血樣，犢牛編號為犢牛5至犢牛10。共采集4頭份臟器樣品和10頭份血清樣品。

1.2 主要培養(yǎng)基、試劑

主要培養(yǎng)基：普通營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、普通瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、血瓊脂培養(yǎng)基、脫纖維羊血、三糖鐵瓊脂斜面等。主要試劑：細(xì)小病毒、輪狀病毒、冠狀病毒ELISA抗體檢測試劑盒（均購自武漢純度生物技術(shù)公司），病毒性腹瀉-黏膜病ELISA抗原檢測試劑盒（購自北京愛德士生物技術(shù)有限公司），細(xì)小病毒PCR檢測試劑盒（購自上海雅吉生物有限公司）。

1.3 試驗方法

1.3.1 細(xì)菌分離鑒定[1]

接種培養(yǎng)：將取自4頭犢牛的心臟、肺臟、肝臟、脾臟、腎臟、淋巴結(jié)等臟器組織，分別接種到麥康凱培養(yǎng)基、普通營養(yǎng)瓊脂、血液瓊脂等培養(yǎng)基上，37℃溫箱培養(yǎng)18～24h，觀察并記錄細(xì)菌的生長情況、菌落特征等培養(yǎng)特性。隨后分組對不同形態(tài)典型菌落進(jìn)行純培養(yǎng)。生化試驗：用接種針分別挑取純培養(yǎng)的細(xì)菌，接種于三糖鐵、葡萄糖、甘露糖、蔗糖、乳糖、山梨醇等微量生化發(fā)酵管中，37℃進(jìn)行培養(yǎng)，觀察并記錄試驗結(jié)果。

1.3.2 ELISA和PCR檢測

用細(xì)小病毒、冠狀病毒、輪狀病毒ELISA抗體檢測試劑盒分別檢測細(xì)小病毒、冠狀病毒、輪狀病毒抗體，用病毒性腹瀉-黏膜病ELISA抗原檢測試劑盒檢測病毒性腹瀉-黏膜病抗原，具體操作步驟按試劑盒說明書進(jìn)行。細(xì)小病毒PCR檢測試劑盒檢測細(xì)小病毒DNA，具體操作步驟按試劑盒說明書進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 細(xì)菌分離鑒定結(jié)果

對腹瀉犢牛的臟器接種培養(yǎng)結(jié)果顯示，在普通瓊脂培養(yǎng)基上生長良好，在麥康凱培養(yǎng)基上出現(xiàn)紅色、無色菌落。染色、鏡檢為革蘭氏陰性桿菌，在三糖鐵瓊脂斜面出現(xiàn)穿刺后不變黑、表面呈黃色和穿刺后變黑、中間為黃色兩種情況。一種細(xì)菌：發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖，甘露醇和山梨醇產(chǎn)氣；不發(fā)酵乳糖、蔗糖；不產(chǎn)吲哚、V-P反應(yīng)陰性；不水解尿素和對苯丙氨酸不脫氨。另一種細(xì)菌：甲基紅和吲哚試驗呈陽性，乳糖發(fā)酵陽性，尿素酶和檸檬酸鹽利用呈陰性，氧化酶表現(xiàn)陰性。據(jù)此判斷為沙門氏菌和大腸菌。3頭犢牛臟器樣品檢測出沙門氏菌、大腸桿菌，一頭犢牛僅檢測出沙門氏菌。具體見表1。

表1 犢牛腹瀉病料細(xì)菌分離鑒定結(jié)果

2.2 病毒檢測結(jié)果

表2 患牛血樣病毒檢測結(jié)果

10份血清樣品中均未檢測出病毒性腹瀉-黏膜病病毒抗原、輪狀病毒抗體、冠狀病毒抗體，8份血清樣品中檢測出細(xì)小病毒抗體，7份血清樣品中經(jīng)PCR檢測出細(xì)小病毒DNA。具體結(jié)果見表2。

3 討論

筆者通過對腹瀉犢牛臟器細(xì)菌的分離鑒定檢測出大腸桿菌和沙門氏菌，ELISA實驗中檢測出血清中含有細(xì)小病毒抗體，分子生物學(xué)檢測出細(xì)小病毒DNA。綜合各種診斷結(jié)果和臨床癥狀確診該奶牛場犢牛腹瀉為大腸桿菌、沙門氏菌和細(xì)小病毒混合感染引起。

在細(xì)菌分離鑒定過程中發(fā)現(xiàn)有沙門氏菌和大腸桿菌，還發(fā)現(xiàn)一些其他細(xì)菌經(jīng)鑒定為葡萄球菌，但葡萄球菌不引起腹瀉。沙門氏菌和大腸桿菌感染均引起犢牛腹瀉，可采用抗菌藥物治療。因為未發(fā)現(xiàn)典型的臨床癥狀，不能判斷出是何種病毒病原，所以對引起犢牛腹瀉的常見病毒進(jìn)行一一檢測，最終檢測出細(xì)小病毒。

細(xì)小病毒感染分布十分廣泛，病毒在自然界普遍存在。Abinatni、Warseld在1961年初次從健康犢牛的消化器官和腹瀉犢牛的糞便中分離出細(xì)小病毒，我國于1972年從患呼吸道綜合征犢牛的鼻液中初次分離到牛細(xì)小病毒(B-2毒株)[2]。牛細(xì)小病毒病是由牛細(xì)小病毒感染引起的一種接觸性傳染病，本病的特征是引起妊娠母牛流產(chǎn)、死胎。犢牛主要表現(xiàn)為腹瀉，也有部分犢牛感染初期出現(xiàn)流鼻液、呼吸困難、咳嗽等呼吸道癥狀[3]。

目前，國內(nèi)尚無預(yù)防牛細(xì)小病毒的有效疫苗。筆者對發(fā)病犢牛，采取了嚴(yán)格消毒、隔離措施。對于發(fā)病牛的治療，首先是大量補液防脫水，使用恩諾沙星和魚腥草抗菌消炎防止繼發(fā)感染，再使用黃芪多糖、單克隆抗體、干擾素等藥物增強機(jī)體免疫力，結(jié)果治愈率達(dá)到85%以上。預(yù)防該病除了嚴(yán)格消毒之外，還需保證犢牛出生2h內(nèi)吃夠初乳，同時對其他未發(fā)病犢牛肌肉注射黃芪多糖3～5d，以上措施可有效地預(yù)防細(xì)小病毒傳染。